专利名称：一种培养产紫杉醇菌的培养基的制作方法紫杉醇是一种四环二萜酰胺类化合物，在二萜和生物碱化合物中活性最强的，被认为是很好的抗癌物质。紫杉醇的分离提取主要是从红豆杉属植物的茎皮中得到的，含量很低，而且提取分离难度很大。因此为了缓解紫杉醇在临床应用和科研上的大量需求和药源极缺的矛盾，生物合成、植物化学、化学合成、药用植物和药理等多个学科的科研人员积极开展了多方面研究。微生物能生产紫杉醇的发现使得这一方面的研究有了新的突破，作为天然药物一条新的生产途径，将产生十分重要的经济效益和生态效益。目前，培养产紫杉醇菌的培养基主要有PDA培养基和S-7培养基。使用PDA培养基，紫杉醇的产量很低，不能满足紫杉醇大量的工业化生产需求；S-7培养基的成分中含有价格昂贵的亚油酸、苯丙氨酸、酪氨酸等，成本较高，不适用于工业化生产。
本发明是要解决目前使用PDA培养基，产紫杉醇菌的紫杉醇产量低，无法满足紫杉醇大量的工业化生产需求；S-7培养基的成本高，不适用于工业化生产的问题，提供一种培养产紫杉醇菌的培养基。本发明的一种培养产紫杉醇菌的培养基由麸皮、蛋白胨、尿素、葡萄糖、ZnSO4, MgSO4 WH2CKCaCl2和去离子水组成，培养产紫杉醇菌的培养基中麸皮的浓度为0. 5 4g/L、 蛋白胨的浓度为0. 1 5g/L、尿素的浓度为0. 1 2g/L、葡萄糖的浓度为1 80g/L、ZnS04 的浓度为0. 01 0. lg/L、MgSO4 · 7H20的浓度为0. 01 0. lg/L、CaCl2的浓度为0. 01 0.lg/L。本发明的培养基成本低，更适用于紫杉醇的工业化生产。使用本发明的培养基培养产紫杉醇菌，产紫杉醇菌的紫杉醇产量与使用PDA培养基相比有显著提高，发酵液中紫杉醇的含量为180 221. 6μ g/L，而使用PDA培养基时，产紫杉醇菌的紫杉醇产量仅为 10 30 μ g/L。，还包括各间的任意组合。一本实施方式的一种培养产紫杉醇菌的培养基由麸皮、蛋白胨、尿素、葡萄糖、ZnS04、MgS04 · 7H20、CaCl2和去离子水组成，培养产紫杉醇菌的培养基中麸皮的浓度为0. 5 4g/L、蛋白胨的浓度为0. 1 5g/L、尿素的浓度为0. 1 2g/L、葡萄糖的浓度为 1 80g/L、ZnS04 的浓度为 0. 01 0. lg/L,MgSO4 ·7Η20 的浓度为 0. 01 0. lg/L,CaCl2 的浓度为0. 01 0. lg/L。
本实施方式的培养基成本低，更适用于紫杉醇的工业化生产。使用本实施方式的培养基培养产紫杉醇菌，产紫杉醇菌的紫杉醇产量与使用PDA培养基相比有显著提高，发酵液中紫杉醇的含量为180 221. 6 μ g/L。

二本实施方式与
一不同的是麸皮的浓度为1 3g/ L。其它与
一相同。

三本实施方式与
一不同的是麸皮的浓度为2g/L。 其它与
一相同。

四本实施方式与
一至三之一不同的是度为0. 5 4. 5g/L。其它与
一至三之一相同。

五本实施方式与
一至三之一不同的是度为1. 5 3. 5g/L。其它与
一至三之一相同。

六本实施方式与
一至三之一不同的是度为2 3g/L。其它与
一至三之一相同。

七本实施方式与
一至六之一不同的是为0.5 1.5g/L。其它与
一至六之一相同。

八本实施方式与
一至六之一不同的是为lg/L。其它与
一至六之一相同。

九本实施方式与
一至八之一不同的是度为10 70g/L。其它与
一至八之一相同。

十本实施方式与
一至八之一不同的是度为30 50g/L。其它与
一至八之一相同。

十一本实施方式与
一至八之一不同的是葡萄糖的浓度为40g/L。其它与
一至八之一相同。

十二 本实施方式与
一至十一之一不同的是=ZnSO4的浓度为0. 03 0. 08g/L。其它与
一至i^一之一相同。

十三本实施方式与
一至十一之一不同的是=ZnSO4的浓度为0.05g/L。其它与
一至i^一之一相同。

十四本实施方式与
一至十三之一不同的是: MgSO4 · 7H20的浓度为0. 03 0. 08g/L。其它与
一至十三之一相同。

十五本实施方式与
一至十三之一不同的是: MgSO4 · 7H20的浓度为0. 05g/L。其它与
一至十三之一相同。

十六本实施方式与
一至十五之一不同的是=CaCl2的浓度为0. 03 0. 08g/L。其它与
一至十五之一相同。

十七本实施方式与
一至十五之一不同的是=CaCl2的浓度为0.05g/L。其它与
一至十五之一相同。

十八本实施方式的一种培养产紫杉醇菌的培养基由麸皮、蛋白胨、 尿素、葡萄糖、ZnSO4, MgSO4 · 7H20、CaCl2和去离子水组成，取1. 5g麸皮、2g蛋白胨、0. 5g尿素、50g 葡萄糖、0. 06g ZnS04、0. 05g MgSO4 · 7H20 和 0. 03g CaCl2,再加去离子水至 IOOOmL,
配制成发酵培养基。蛋白胨的浓 蛋白胨的浓 蛋白胨的浓 尿素的浓度 尿素的浓度 葡萄糖的浓 葡萄糖的浓
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将产紫杉醇的内生真菌HD86_9(保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为 CCTCCM 206137)接于种子培养基(20%马铃薯水煮液汁lOOmL，蔗糖2g，琼脂2g，pH 6.5) 于28°C培养2天，然后转接于装有200mL本实施方式发酵培养基的500mL三角瓶中，在 28°C,180r/min条件下，摇瓶培养7天，收集发酵培养物，提取紫杉醇。采用高效液相色谱法测定紫杉醇的含量为221. 6μ g/L。相同种子培养条件下，将该菌从种子培养基转接于装有200mL PDA培养基的500mL三角瓶中，在28°C，180r/min条件下，摇瓶培养7天，收集发酵培养物，提取紫杉醇。采用高效液相色谱法测定紫杉醇的含量仅为20. 4 μ g/L。

十九本实施方式的一种培养产紫杉醇菌的培养基由麸皮、蛋白胨、 尿素、葡萄糖、ZnS04、MgS04 WH2CKCaCl2和去离子水组成，取麸皮2g、2. 5g蛋白胨、Ig尿素、 40g 葡萄糖、0. 05g ZnS04、0.08g MgSO4 ·7Η20 和 0. 05g CaCl2，再加去离子水至 IOOOmL,配制成发酵培养基。将产紫杉醇的内生真菌HD86_9(保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为 CCTCCM 206137)接于种子培养基(20%马铃薯水煮液汁IOOmL,蔗糖2g，琼脂2g，pH 6. 5)， 于28°C培养2天，然后转接于装有10L本实施方式发酵培养基的发酵罐中，在28°C，180r/ min条件下，摇瓶培养10天，收集发酵培养物，提取紫杉醇。采用高效液相色谱法测定紫杉醇的含量为192. 4 μ g/L。相同种子培养条件下，将该菌从种子培养基转接于装有IOL PDA 培养基的发酵罐中培养中，在28°C，180r/min条件下，摇瓶培养10天，收集发酵培养物，提取紫杉醇。采用高效液相色谱法测定紫杉醇的含量仅为18. 3 μ g/L。


一种培养产紫杉醇菌的培养基，涉及一种培养产紫杉醇菌的培养基。本发明是要解决目前使用PDA培养基，产紫杉醇菌的紫杉醇产量低，无法满足紫杉醇大量的工业化生产需求；S-7培养基的成本高，不适用于工业化生产的问题。本发明的培养基由麸皮、蛋白胨、尿素、葡萄糖、ZnSO4、MgSO4·7H2O、CaCl2和去离子水组成。本发明的培养基成本低，更适用于紫杉醇的工业化生产，使用本发明的培养基培养产紫杉醇菌，使得产紫杉醇菌的紫杉醇产量有显著提高。应用于产紫杉醇菌发酵领域。