一种蛇足石杉内生真菌菌株及其应用的制作方法[0002]老年痴呆症(Alzheimer’ s disease, AD)是一种中枢神经系统退行性疾病，临床表现为记忆功能衰退、社交识别能力出现故障。研究发现，有10%~15%的老年人患有不同程度的痴呆，其中60%~70%为老年痴呆。到目前为止，老年痴呆发病机制尚未明确。胆碱能神经损伤假说是被世界上较为认可的老年痴呆症致病机制，基于该假说而开发的乙酰胆碱酯酶(acetylcholine, AChE)抑制剂能有效地改善老年痴呆症,成功用于临床的有他克林(Tacrine)、多奈哌齐(Donepezil)、利伐司替明(Rivastigmine)、加兰他敏(Galanthamine)、和石杉喊甲(Huperzine A)等。[0003]人脑有数千亿个神经元，它们纵横交错、相互交联，乙酰胆碱是它们之间传递化学信息的一种重要的神经递质。它传导的信息与人的认知、学习、记忆功能密切相关，其代谢过程的紊乱与AD症的发病密切相关。[0004]乙酰胆碱存在于轴突囊泡，它由乙酰转化酶参与合成，随着神经冲动的传导，乙酰胆碱被释放到突触间隙，再与突触后膜上的多种受体结合，经过一系列的生化反应，引起突触后膜电位的变化，形成电信号向下一级传递。研究表明，90%患有AD病的患者在神经冲动传输过程中缺乏乙酰胆碱，而乙酰胆碱酯酶的功能就是分解乙酰胆碱。所有抑制乙酰胆碱酯酶的作用是控制和缓解老年性痴呆症的关键。[0005]植物内生真菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物的各种组织和器官内部的真菌，不仅包括了互惠共利的和中性的内共生真菌，也包括了那些潜伏在宿主体内的病原菌。目前，在所有研究过内生真菌的植物中都发现内生真菌，少则十几种，多则近百种。研究发现内生真菌能产生许多活性次级代谢产物，从而能够增强植物的抗逆性，并且这些活性次级代谢产物经常具有多种生物活性。据统计，从内生真菌中发现新活性化合物的比例为51 %，远远超过土壤微生物的38 %。研究证明药用植物内生真菌能够产生与宿主植物相同或相似的药用活性成分，特别是还发现许多新的活性成分，是宿主植物所不具备的，而且，微生物还具有生长周期短、容易培养，易分离活性成分等优势。另外，从植物内生真菌发酵产物中可以大量获得所需药物，能克服天然药材不足的问题。因而，植物内生真菌作为潜在的药物资已成为发现新天然活性物质的重要资源。
[0006] 本发明提供了一种蛇足石杉内生真菌Moniliaceae Penicillium sp.LQ2F02菌株，已于2014年I月12日保藏在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC N0.M2014022，其分类命名为丛梗孢科青霉属LQ2F02。本发明蛇足石杉内生真菌Moniliaceae Penicillium sp.LQ2F02菌株分离自云南产蛇足石杉根部,分离纯化后保藏于武汉大学中国典型培养物保藏中心。[0007]本发明蛇足石杉内生真菌Moniliaceae Penicillium sp.LQ2F02菌株具抗乙酰胆
碱酯酶活性。
[0008]本发明人从蛇足石杉中分离其内生真菌，将内生真菌发酵获得发酵产物，然后对发酵产物进行抗乙酰胆碱酯酶活性测定，结果筛选到一株内生真菌LQ2F02，该菌株的发酵产物具有较强的抗乙酰胆碱酯酶活性，IC5tl值为14.36ug/ml。经形态学鉴定，ITS测序和系统发育树构建，表明LQ2F02为丛梗孢科青霉属(Moniliaceae Penicillium)。本发明所述的Moniliaceae Penicillium sp.LQ2F02已于2014年I月12日，保藏在中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏编号为CCTCC M2014022。上述菌株的生物学形态描述为:在PDA培养基菌落呈，最初气生菌丝无色，渐变灰白色，最后变为青色；菌落紧密，圆形，边缘不整齐，背面黄褐色，如图1所示；电镜下可见该菌株菌丝无分枝，分生孢子梗粗糙，无隔膜，直径约为1.6~2.8um，顶囊球形，小梗呈放射状，产生分生孢子、细小卵圆形，如图2所
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[0009]本发明上述蛇足石杉内生真菌Moniliaceae Penicillium sp.LQ2F02的遗传特性，该内生真菌5.8S rDNA序列为，如SEQ ID N0.1所示:
[0010]CTCTGGGTCCAACCTCCCACCCGTGTTTATTGTACCTTGTTGCTTCGGCGCGCCCGC CTCACGGCCGCCGGGGGGCATCCGCCCCCGGGCCCGCGCCCGCCGAAGACACCATTGA ACTCTTGTCTGAAGATTGCAGTCTGAGTAGATTAGCTAAATCAGTTAAAACTTTCAACAA CGGATCTCTTGGTTCCGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAA TTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAGTCTTTGAACGCACATTGCGCCCCCTGGTATTCCGG GGGGCATGCCTGTCCGAGCGTCATTGCTGCCCTCAAGCACGGCTTGTGTGTTGGGCTTC GCCCCCCGTTCGTCGGGGGGCGGGCCCGAAAGGCAGCGGCGGCACCGCGTCCGGTCCT CGAGCGTATGGGGCTTTGTCACCCGCTCTGTAGGCCCGGCCGGCGCCCGCCGGCGACAC CCAAATCAATCTATCCAGGTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCA TATCAATAAAGAAAGGAA
[0011]该序列与NCBI核酸数据库BLAST比对结果显示,该菌株与多种Pencillium sp.具有高达99 %的相似度。对该ITS序列进行进化树构建分析如图3，显示该序列与Penci 11 iumsp.有较闻的未缘关系。
[0012]18S rDNA 序列如下，如 SEQ ID N0.2 所示:
[0013]TAAGTATAAGCACTTTATACTGTGAAACTGCGAATGGCTCATTAAATCAGTTATCGTT TATTTGATAGTACCTTACTACATGGATACCTGTGGTAATTCTAGAGCTAATACATGCTAAA AACCCCGACTTCAGGAAGGGGTGTATTTATTAGATAAAAAAACCAACGCCCTTCGGGGCT CCTTGGTGAATCATAATAACTTAACGAATCGCATGGCCTTGCGCCGGCGATGGTTCATTC AAATTTCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTAGGATAGTGGCCTACCATGGTGGCAACGGGT AACGGGGAATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCA AGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCCGATACGGGGAGGTAGTGACAATAA ATACTGATACGGGGCTCTTTTGGGTCTCGTAATTGGAATGAGAACAATTTAAATCCCTTA ACGAGGAACAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAA TAGCGTATATTAAAGTTGTTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGAACCTTGGGTCTGGCTGG CCGGTCCGCCTCACCGCGAGTACTGGTCCGGCTGGACCTTTCCTTCTGGGGAACCTCAT GGCCTTCACTGGCTGTGGGGGGAACCAGGACTTTTACTGTGAAAAAATTAGAGTGTTCA AAGCAGGCCTTTGCTCGAATACATTAGCATGGAATAATAGAATAGGACGTGTGGTTCTAT TT TGTTGGTTTCTAGGACCGCCGTAATGATTAATAGGGATAGTCGGGGGCGTCAGTATTC AGCTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTGCTGAAGACTAACTACTGCGAAAGCATTCGC CAAGGATGTTT