专利名称：鳞盖肉齿菌中二萜类化合物a及其抗肿瘤细胞增殖活性的制作方法肿瘤(tumor)是一种常见病、多发病，其中恶性肿瘤是目前危害人类健康最严重的一类疾病，目前临床上在治疗食道癌、胃癌和妇科恶性肿瘤等恶性肿瘤的药物，因其在抑制癌细胞增殖的同时，无选择地也抑制骨髓等细胞的增殖，所以目前期待着在抗恶性肿瘤药物的研究中，研究和开发毒副作用低、选择性高的抗恶性肿瘤药物已成为亟待解决的问题。本发明的目的就在于提供对恶性肿瘤细胞增殖具有选择性高、毒副作用低的天然化合物。本发明为达到上述目的，对许多的化合物进行了研究。结果发现了此二萜化合物SarcodoninA，具有抑制癌细胞增殖的活性，从而完成了本发明。
1.由下述结构式表示此二萜化合物Sarcodonin A 2.权利要求1所述化合物SarcodoninA具有以下理化特性1)外观淡黄色液体；2)分子式C20H28O3；3)比旋光度[α]D26+843°(c0.464，MeOH)；4)质谱m/z[M+]316.2038；5)红外吸收光谱IR vmaxcm-13400，2920，1630，1650，1570，1160。3.权利要求1所述化合物的制备方法，其包括以下步骤4.权利要求1所述化合物的制备方法，其由下述方法组成 5.组合物，其含有治疗有效量的权利要求1所述化合物以及药学上可以接受的载体。6.权利要求6所要求的组合物，其用于消化道肿瘤的治疗。7.权利要求1所述化合物或权利要求5-6的组合物在制备抑制食道癌细胞增殖的药物中的应用。
8.权利要求1所述化合物或权利要求5-6的组合物在制备特异性地抑制消化道肿瘤细胞增殖的药物中的应用。

2)将3.67克的鳞盖肉齿菌二氯甲烷提取物用常规的硅胶柱层析技术，用环己烷和乙酸乙酯的20％递减梯度进行剃度洗脱。
5)590mg的40％环己烷和60％乙酸乙酯混合洗脱液部分用常规的硅胶柱层析技术，用甲苯和乙酸乙酯为3∶1的混合液300ml进行洗脱，得到336.2mg的粗提物。
6)将336.2mg的粗提物用常规的硅胶柱层析技术，用丙酮和氯仿为9∶1的混合液300ml进行洗脱，进一步的纯化，得到72.1mg的二萜类化合物Sarcodonin A。
7)具体的结构分析高分解能质谱显示该化合物的分子离子峰为316.2043，表明该化合物的分子式为C20H2844；红外光谱显示该化合物有3400cm-1，1710cm-1，1240cm-1，1020cm-1的羟基和羰基吸收峰；氢谱和碳谱显示，此化合物中有δC194.2，δH9.45的羰基，δC140.9；δC145.7；δC154.1；δC119.8，δH6.19；δC144.3，δH6.83；δC138.3的三个双键，与δC74.0，δH3.73的氧原子结合的次甲基和δC66.4，δH3.58的亚甲基。
Sarcodonin A[α]D26+843°(c0.464，MeOH)；HREIMSm/z[M+]calcd.forC20H28O3，316.2038；found316.2043；EIMSm/z(relative intensity)316[M+，100％]，301[M+-OH，7％]，285[M+OH-H2O，50％]，267(32％)，199(28％)，149(26％)；IR vmax(film)cm-13410(OH)，2920，1660(C＝O)，1650，1570，1160；1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)9.45(s，1H)，6.83(dd，J＝8.2，2.5Hz，1H)，6.19(d，J＝8.2Hz，1H)，3.73(br.s，1H)，3.58(m，2H)，3.16(dd，J＝18.3，5.8Hz，1H)，2.96(sexted，J＝7.6Hz，1H)，2.58(m，1H)，2.51(m，1H)，2.40(m，2H)，1.75(m，2H)，1.68(m，2H)，1.36(dt，J＝13.8，4.0Hz，1H)，1.03(s，3H)，0.96(s，3H)，0.94(d，J＝8.1Hz，3H).13C-NMR(CDCl3)δ(ppm)194.2(CH)，154.1(C)，146.7(C)，144.3(CH)，140.9(C)，138.1(C)，119.8(CH)，74.0(CH)，66.4(CH2)，49.6(C)，48.3(C)，38.2(CH2)，36.3(CH2)，35.2(CH)，33.6(CH2)，29.4(CH2)，29.2(CH2)，26.4(CH3)，24.3(CH3)，15.8(CH3)。
实施例2通过以下实验说明本发明化合物的活性1)选用的细胞株为人类食管癌低分化表现型的细胞株TE-2、人类食管癌高分化表现型的细胞株T-Tn、恶性肝细胞瘤细胞株HLE、神经胶质瘤细胞株T98、人类子宫颈癌细胞株HeLa和人类纤维芽细胞株Fibroblast。
2)使用的实验方法为细胞增殖实验法。
在含有20％胎牛血清的D-MEM/hams培养基中，将各被试细胞株的细胞调成密度为1×105细胞/ml，培养20小时后，加入用上述培养基配制的终浓度为10μM、1μM和0.1μM的Sarcodonin A，培养各被试细胞株的细胞。24小时后除去含有SarcodoninA的培养基，再将细胞在培养中培养5天后，测各培养皿中的细胞数。本实验各实验组均设2重复。
本发明化合物Sarcodonin A用DMSO配制成浓度为10mM的溶液，保存在-20℃冰箱中。在实验中以只添加0.1％DMSO的培养基作为空白对照。
本发明化合物SarcodoninA抗各被试细胞株的细胞增殖活性实验结果在下表中表示



本发明提供一种从鳞盖肉齿菌二氯甲烷浸泡液中提取纯化的二萜类化合物A，本发明还涉及该化合物的制备方法以及发明化合物抑制肿瘤细胞增殖的应用。