一种从天冬中提取游离氨基酸的方法【技术领域】，具体地涉及一种从天冬中提取游离氨基酸的方法。[0002]天冬(RadixAsparagi)为百合科植物天门冬Asparagus cochinchinensis (Lour)Merr的干燥块根，是一种临床常用中药材，主要用于肺燥干咳、顿咳痰粘、骨蒸潮热、腰膝酸痛、咽干口渴、内热消渴、热病津伤、肠燥便秘等病症。天冬主要药理成分有氨基酸类(主要有天冬酰胺、谷氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、瓜氨酸、丝氨酸、苏氨酸、脯氨酸等19种氨基酸)、糖类、螺甾苷类等。天冬历代用野生品药用或制蜜饯食用，国内有多个中药厂都在使用天冬原料生产中成药，并且其需求量呈大幅度增长趋势，使原料极其紧俏。[0003]天冬提取物还具有抗肿瘤、抗炎、抗衰老、降血糖等作用。同时现代药理学研究发现氨基酸是作为发挥抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等作用的物质基础之一，其中氨基酸是抗病毒、抗肿瘤的有效成分。[0004]游离氨基酸的提取方法常用的有超声提取、加热回流提取、浸提法等方法。提取溶剂一般为水、醇、醚等。由于氨基酸是水溶性成分，其在醇或醚中溶解度小于在水中，且醇提法和醚提提在成本及毒性方面均高于水提法，所以采用水提法更好。[0005]《天冬中总氨基酸的水提取工艺研究》(甘肃中医学院学报，2003年I期)对天冬中总氨基酸的水提取工艺进行了研究，其主要采用了水浸提法提取氨基酸，在最佳提取工艺条件下测定氨基酸的含量为2.11%，提取率较低，而且提取时间长、用料量大。
[0006]本发明针对现有技术的不足，提供一种提取率高、用料少、提取时间短、提取成本低、环境污染小的从天冬中提取游离氨基酸的方法。
[0007]为实现上述发明目的，本发明技术方案如下:
一种从天冬中提取游离氨基酸的方法，包括烘干粉碎、微波提取、过滤定容、离心和测定工序，具体操作如下:
(1)烘干粉碎:将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，浙干水后，烘干，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过筛，过筛得到天冬粉末备用；
(2)微波提取:称取步骤(1)的天冬粉末放入微波消解罐内，加入一定比例的提取溶剂，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；
(3)过滤定容:过滤提取液，将滤液定容至50ml；
(4)离心:将定容后的滤液离心，取其上清液，即得游离氨基酸提取液，将该游离氨基酸提取液于4°C储存，备用；
(5)测定:以天冬酰胺药品为对照品，采用茚三酮比色法对该游离氨基酸进行测定。
[0008]以上步骤(1)中所述的烘干条件是在恒温鼓风干燥箱内，控制烘干温度为40°C~50°C，烘干时间为8h~12h。
[0009]以上步骤(1)中所述的过筛是将粉碎的天冬经二号筛过筛。
[0010]以上步骤(2)中所述的提取溶剂为水，所述的一定比例的提取溶剂是天冬粉末与水的比例为1: 15~I:25o
[0011]以上步骤(2)中所述的升温提取是将温度设为50~70°C，控制时间为10~20mino
[0012]以上步骤(4)中所述的离心控制离心转速为5000 r/min~7000r/min,离心时间为 10 min ~15min。
[0013]与现有技术相比，本发明的优点和积极效果如下:
1、本发明以水为提取溶剂，采用微波消解提取的方法提取其中游离氨基酸，测得氨基酸的含量大约为5.75%，提取效率高，制作简单。
[0014]2、本发明具有简便易行、用料少、提取效率高、提取用时间短、提取成本低、环境友好等优点，有利于工业化 生产，具有较好的经济效益、社会效益和生态效益。

[0015]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0016]实施例1:
一种从天冬中提取游离氨基酸的方法，
1.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，浙干水后，在烘干温度为40°c的恒温鼓风干燥箱内进行烘干8h，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过二号筛，过筛得到天冬粉末备用。
[0017]2.游离氨基酸的提取:(I)精密称取0.2500g天冬粉末放入微波消解罐内，用水作为提取溶剂，并按照天冬粉末与水重量比为1:20的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，温度设为50°C，控制时间为15min。待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；(2)采用抽滤的方式过滤出提取液，将滤液定至50ml ; (3)将定容后的滤液离心，控制离心转速为5000 r/min，离心时间为15 min，取其上清液，即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4°C储存，备用；以上三个处理按顺序重复三次。
[0018]3.标准溶液的制备:精密称取0.01000g(精确至0.0OOOlg)的天冬酰胺标准物质，定容于100mL容量瓶中，此溶液质量浓度为0.lmg/ml。
[0019]4.标准曲线的制备:精密量取0.lmg/ml的天冬酰胺标准溶液0，1.0ml, 1.5ml，
2.0ml, 2.5ml, 3.0ml, 3.5ml分别置于25ml比色管中，各加水至IOml,再分别加入磷酸盐(pH为8.04)2ml和2%的茚三酮溶液2ml，摇匀，置于沸水中显色15min，取出后立即用冷水冷却至室温，静放5min,定容至25ml,摇匀，再放置15min,于566nm处测定各标准溶液的吸光度A，以试剂空白调零。以吸光度(A)为横坐标，质量浓度(C)为纵坐标进行线性回归。结果表明，天冬素在I~14Pg / mL与吸光度呈良好的线性关系。回归方程为C=0.4953A-0.0029，R2=0.9992。
[0020]5.游离氨基酸的测定:精密量取上述提取上清液(即游离氨基酸提取液)5ml置于25ml比色管中，并加水至10ml，再加入磷酸盐(pH为8.04)2ml和2%的茚三酮溶液2ml，摇匀，置于沸水中显色15min,取出后立即用冷水冷却至室温,静放5min,定容至25ml,摇匀，再放置15min，于566nm处测定其的吸光度(A)。将测定得到的吸光度值代入回归方程，该方法下测得游离氨基酸的含量为5.75%。
[0021]实施例2
1.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，浙干水后，在烘干温度为45°C的恒温鼓风干燥箱内进行烘干9h，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过二号筛，过筛得到天冬粉末备用。 [0022]2.游离氨基酸的提取:(I)精密称取0.3334g天冬粉末放入微波消解罐内，用水作为提取溶剂，并按照天冬粉末与水重量比为1:15的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，温度设为60°C，控制时间为15min。待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；(2)采用抽滤的方式过滤出提取液，将滤液定至50ml ; (3)将定容后的滤液离心，控制离心转速为6000 r/min，离心时间为12 min，取其上清液，即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4°C储存，备用；以上三个处理按顺序重复三次。
[0023]3.标准溶液的制备同实施例1。
[0024]4.标准曲线的制备同实施例1。
[0025]5.游离氨基酸的测定同实施例1，将测定得到的吸光度值代入回归方程，该方法下测得游离氨基酸含量为5.22%。
[0026]实施例3
1.将天冬药材去皮后用蒸馏水冲洗干净，浙干水后，在烘干温度为50°C的恒温鼓风干燥箱内进行烘干12h，然后切剪成小段，用粉碎机粉碎，过二号筛，过筛得到天冬粉末备用。
[0027]2.游离氨基酸的提取:(I)精密称取0.2000g天冬粉末放入微波消解罐内，用水作为提取溶剂，并按照天冬粉末与水重量比为1:25的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，温度设为70°C，控制时间为15min。待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；(2)采用抽滤的方式过滤出提取液，将滤液定至50ml ; (3)将定容后的滤液离心，控制离心转速为7000 r/min，离心时间为10 min，取其上清液，即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4°C储存，备用；以上三个处理按顺序重复三次。
[0028]3.标准溶液的制备同实施例1。
[0029]4.标准曲线的制备同实施例1。
[0030]5.游离氨基酸的测定同实施1，将测定得到的吸光度值代入回归方程，该方法下测得游离氨基酸含量为5.27%。
[0031]实施例4
1.样品预处理方法同实施例1。
[0032]2.游离氨基酸的提取:(I)精密称取0.3334g天冬粉末放入微波消解罐内，用水作为提取溶剂，并按照天冬粉末与水重量比为1:15的比例向装有天冬粉末的微波消解罐为加入5ml水，将微波消解罐固定于防爆保护套中，旋紧盖子后置于微波消解仪内，升温提取，温度设为60°C，控制时间为15min。待温度降为室温时，从微波消解仪内取出微波消解罐；(2)采用抽滤的方式过滤出提取液，将滤液定至50ml ; (3)将定容后的滤液离心，控制离心转速为5000 r/min，离心时间为15 min，取其上清液，即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4°C储存，备用；以上三个处理按顺序重复三次。[0033]3.标准溶液的制备同实施例1。
[0034]4.标准曲线的制备同实施例1。
[0035]5.游离氨基酸的测定同实施1，将测定得到的吸光度值代入回归方程，该方法下测得游离氨基酸含量为5.60%。
[0036]实施例5
1.样品预处理方法同实施例1。
[0037]2.游离氨基酸的提取:(I)精密称取2.0OOOg天冬粉末放入三角瓶中，用水作为提取溶剂，并按照天冬粉末与水重量比为1:15的比例向装有天冬粉末的三角瓶中加入45ml水，将三角瓶放入水浴锅中，套上回流装置，水浴锅温度设为60°C，以第一滴泠凝水下滴时计时，回流时间为120min。时间到后，从水浴锅中取出三角瓶；(2)采用抽滤的方式过滤出提取液，将滤液定至50ml ; (3)将定容后的滤液离心,控制离心转速为5000 r/min,离心时间为15 min，取其上清液，即得游离氨基酸提取液。将该游离氨基酸提取液于4°C储存，备用；以上三个处理按顺序重复三次。
[0038]3.标准溶液的制备同实施例1。
[0039]4.标准曲线的制备同实施例1。
[0040]5.游离氨基酸的测定:精密量取上述提取上清液(即游离氨基酸提取液)0.5ml置于25ml比色管中，并加水至10ml，再加入磷酸盐(pH为8.04)2ml和2%的茚三酮溶液2ml，摇匀，置于沸水中显色15min,取出后立即用冷水冷却至室温,静放5min,定容至25ml,摇匀，再放置15min，于566nm处测定其的吸光度(A)。将测定得到的吸光度值代入回归方程，该方法下测得游离氨基酸的含量为4.05%。