专利名称：花生茎叶提取物及其制备方法用途的制作方法失眠，是以难以入睡和睡眠维持困难为特征的一种最常见的睡眠障碍，是睡眠质量或数量达不到正常需求的一种主观体验。在现代化生活所带来的社会节奏加快及竞争加剧的今天，失眠是一种十分普遍的现象。流行病学调查显示，美国有33%的人患有失眠，在欧洲4% 22%的人受到失眠的严重影响，而我国目前失眠症的发病率也高达10% 20%。长期失眠对人的身心健康有害，容易引起脏器功能紊乱和免疫功能下降，并与溃疡病、高血压病、冠心病、糖尿病以及其他精神疾病有一定的相关性。因此，治疗失眠对于改善人们的生活质量及健康的获得是很重要的。失眠症的治疗方法主要包括药物治疗和非药物治疗两大类。用于治疗失眠的药物种类繁多，催眠药是治疗短暂性失眠症和慢性原发性失眠症的首选药物，其他的还包括抗抑郁药、抗焦虑药和抗精神病药等。由于镇静催眠药对中枢神经系统有广泛的抑制作用，长期使用，几乎都可产生耐受性和依赖性，突然停药时可产生阶段症状等不良反应，因此大大影响了这些药物的临床应用。相对于西药的毒副作用、不良反应来说，中医药的安全性、有效性早已被长期临床实践所证实，积累了较多治疗失眠的有效方药，为失眠的防治作出了贡献，同样也为中药新药研究提供了理论依据和源泉。花生茎叶为豆科落花生属植物落花生的茎叶，《中华本草》记载其味甘、淡，性平，具有清热解毒、宁神降压的功效。但是，目前对于花生茎叶的活性成分研究报道却很少，从而限制了其进一步开发及在临床中的应用。
因此，本发明的一个目的是提供一种花生茎叶提取物。本发明的另一个目的是提供包含所述花生茎叶提取物的药物组合物。本发明的另一个目的是提供所述花生茎叶提取物或所述药物组合物的用途。针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案—方面，本发明提供一种花生茎叶提取物，所述花生茎叶提取物包含一种或多种选自留醇类和酚酸类的化合物。优选地，所述一种或多种选自留醇类和酚酸类化合物的重量之和占花生茎叶提取物重量的50%以上。更优选地，所述的留醇类化合物包括豆留烷-3 β，6 α - 二醇、大豆留醇B、5，8-过氧化麦角留_7，22-二烯-3 β-醇、(22E，MR)_麦角留_7，22-二烯-3 β -醇、和/或麦角甾_5，22-二烯-3-醇-7-酮；所述酚酸类化合物包括水杨酸、原儿荼酸、对羟基苯甲酸、对甲氧基苯甲酸、对羟基桂皮酸、对甲氧基桂皮酸、异香草酸、和/或异阿魏酸。另一方面，本发明提供一种花生茎叶提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤(1)取花生茎叶药材经溶剂提取；(2)将提取液减压浓缩，加水分配；(3)将步骤( 获得的水分配液依次用不同极性的溶剂进行萃取，收集中等极性萃取液部分，回收溶剂并干燥，即得花生茎叶治疗失眠症的有效部位(总留醇+总酚酸)；或/和(4)将步骤C3)获得的中等极性萃取液部分回收溶剂，加入适量水进行分配，将水分配液通过大孔吸附树脂，用水、低浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液；用高浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并干燥，即得花生茎叶治疗失眠症的有效部位(总甾醇+总酚酸)。优选地，根据以上制备方法，所述步骤(1)中的溶剂可以选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种，提取方法可以为温浸、热回流和/或渗漉；或/和步骤(3)中所述依次用不同极性的溶剂进行萃取为首先用低极性溶剂和/或高极性溶剂萃取，再用中等极性溶剂萃取。优选地，根据以上制备方法，所述步骤中所述大孔吸附树脂选自非极性大孔吸附树脂、弱极性大孔吸附树脂、中极性大孔吸附树脂、极性大孔吸附树脂。优选地，根据以上制备方法，所述大孔吸附树脂选自HPD-300大孔吸附树脂。再一方面，本发明提供一种药物组合物，包含有效剂量的前述花生茎叶提取物。优选地，所述药物组合物的剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、注射液、输液用无菌粉末或注射用无菌粉末。还一方面，本发明提供所述的花生茎叶提取物或所述的药物组合物在制备预防和/或治疗失眠性疾病的药物中的用途。具体来说，上述花生茎叶提取物包含一种或多种选自留醇类和酚酸类的化合物。优选地，一种或多种选自留醇和酚酸类化合物之和的重量占花生茎叶提取物重量的50%以上。留醇类化合物主要包括豆留烷-3 β，6 α-二醇、大豆留醇B、5，8_过氧化麦角甾-7，22-二烯-3 β-醇、(22EJ4R)-麦角甾 _7，22-二烯-3 β -醇、麦角甾-5，22-二烯-3-醇-7-酮等。酚酸类化合物主要包括水杨酸、原儿荼酸、对羟基苯甲酸、对甲氧基苯甲酸、对羟基桂皮酸、对甲氧基桂皮酸、异香草酸、异阿魏酸等。本发明花生茎叶提取物含量测定方法如下(1)总留醇的含量测定方法(分光光度法)对照品溶液的制备精密称取干燥恒重的β-谷留醇对照品适量，加甲醇超声溶解制成每Iml含200 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备精密称取本品粉末lg，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，精密称定重量，超声提取40min，再次称重，加甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过。取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。标准曲线的绘制精密量取β-谷甾醇对照品溶液(0.20mg/ml)1.0、2.0、3.0、4.0,5. 0,6. 0ml，分别置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻。取各浓度对照品溶液适量，挥干溶剂后按“测定法”中方法进行显色后，在560nm波长处测定吸光度。以吸光度(y)为纵坐标，浓度x(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线。测定法取供试品溶液适量，水浴挥干溶剂后，精密加入新鲜配制的5%香草醛-冰醋酸O.aiil、高氯酸0.8ml，混勻，密塞。置60°C水浴中加热15min，取出立即冷却加入5. Oml冰醋酸，混勻，放置15min，按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在560nm波长处测定吸收度。(2)总酚酸的含量测定方法(分光光度法)对照品溶液的制备精密称取干燥恒重的原儿荼酸对照品适量，加甲醇溶解制成每Iml含150 μ g的溶液，即得。供试品溶液的制备精密称取本品粉末lg，置具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，精密称定重量，超声提取40min，再次称重，加甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过。取续滤液1ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。标准曲线的绘制精密量取原儿荼酸对照品溶液(0. 15mg/ml) 1. 0,2. 0,3. 0,4. 0、5.0、6. 0ml，分别置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻。取各浓度对照品溶液适量，按“测定法”中方法进行显色后，在680nm波长处测定吸光度。以吸光度(y)为纵坐标，浓度x(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线。测定法取供试品溶液适量，加无水乙醇5ml，加0. 3%十二烷基磺酸钠2ml及1 %FeCl3-O. 5% K3[Fe (CN)6] (1 1)]混合溶液 Iml,混勻，暗处放置 5min，加 0. lmol/L HCl至刻度，混勻，在暗处放置20min，按照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VA)，在680nm波长处测定吸收度。花生茎叶提取物可以由本领域技术人员根据本领域公知的任何方法来制备，包括但不局限于下述制备方法。一种花生茎叶提取物的制备方法包括以下步骤(1)取花生茎叶药材经溶剂提取；(2)将提取液减压浓缩至一定体积，加适量水进行分配；(3)将步骤( 获得的水分配液依次用不同极性的溶剂进行萃取，收集中等极性萃取液部分，回收溶剂并干燥，即得花生茎叶治疗失眠症的有效部位(总留醇+总酚酸)。(4)或/和将步骤( 获得的中等极性萃取液回收溶剂，加入适量水进行分配，将水分配液通过大孔吸附树脂，用水、低浓度的甲醇或乙醇水溶液洗脱，弃去洗脱液；用高浓度甲醇或乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，回收溶剂并干燥，即得花生茎叶治疗失眠症的有效部位(总甾醇+总酚酸)。其中，步骤(1)中的溶剂可以选自水、甲醇、乙醇和丙酮中的一种或多种，提取方法可以为温浸、热回流和/或渗漉；步骤(3)中，所述依次用不同极性的溶剂进行萃取为首先用低极性溶剂和/或高极性溶剂萃取，再用中等极性溶剂萃取；所述不同极性的溶剂包括低极性溶剂，例如正己烷、环己烷，石油醚、苯、甲苯、乙醚等；中等极性溶剂，例如二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、丙酮等；高极性溶剂，例如，乙醇、甲醇、水等。步骤中的低浓度甲醇或乙醇水溶液优选为5%-20% (体积)的甲醇或乙醇水溶液；高浓度甲醇或乙醇水溶液优选为30%-95% (体积)甲醇或乙醇水溶液；所述大孔吸附树脂包括非极性大孔吸附树脂，例如HPD-300大孔吸附树脂、HPD-100大孔吸附树脂、DlOl大孔吸附树脂、X-5大孔吸附树脂、H103大孔吸附树脂、H107大孔吸附树脂，等；弱极性大孔吸附树脂，例如AB-8大孔吸附树脂、DA-201大孔吸附树脂，等；中极性大孔吸附树脂，例如HPD-400大孔吸附树脂、ML-8大孔吸附树脂，等；以及极性大孔吸附树脂，例如NKA-9大孔吸附树脂、NKA-II大孔吸附树脂、S-8大孔吸附树脂、HPD-500大孔吸附树脂、HPD-600大孔吸附树脂，等。上述制备方法简单易行、提取效果好、易于工业推广应用。根据本发明的另一个目的是提供一种含有所述花生茎叶提取物的药物组合物。上述药物可以为包含花生茎叶提取物的胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、注射液、输液或注射用无菌粉末。可以采用常规方法将花生茎叶提取物与任何一种或一种以上药用辅料，如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚维酮、羧甲基淀粉钠、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、甘氨酸等混合制成上述剂型。本发明在对花生茎叶进行研究的基础上，意外地发现该植物中所包含的留醇类和酚酸类成分具有明显的治疗失眠的作用。本发明提供了花生茎叶提取物在制备预防和/或治疗失眠性疾病的药物中的用途，失眠性疾病包括神经性失眠、神经性衰弱和睡眠障碍等。对本发明的药物的药效学部分进行了初步研究，结果发现本发明的药物能明显减少小鼠自发活动次数和促进小鼠睡眠时间，具有显著的镇静、安神和促进睡眠的作用。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果1、本发明首次对花生茎叶中的留醇和酚酸类成分进行富集纯化研究，并将其合并应用共同作为花生茎叶治疗失眠症的有效部位，经药效学试验证明其疗效显著；2、花生茎叶原为花生成熟后废弃的部位，本发明将其作为原料制备成治疗失眠症的新药，使花生茎叶得到了有效利用，保证了中药资源的可持续性发展。本发明的原料药来源丰富，制备工艺易于产业化，可根据需要制成各种剂型，为临床提供了更加方便、有效和质量可控的现代中药。对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。实施例1、本发明花生茎叶提取物的制备取花生茎叶33kg，用10倍量70%乙醇加热回流提取3次Qh、lh、Ih)(花生茎叶药材先经70%乙醇提取2小时，倾出提取液后残渣用70%乙醇再提取1小时，重复第二次操作，即得花生茎叶提取液)，收集提取液；将提取液浓缩后加入适量水进行分配，依次用石油醚和正丁醇溶液对其进行萃取，收集正丁醇萃取液部分，回收溶剂并减压干燥，即得本发明的花生茎叶提取物(花生茎叶有效部位)。采用紫外-可见分光光度法，对花生茎叶提取物中的总留醇和总酚酸的含量进行测定，结果显示，上述花生茎叶提取物中总留醇含量为42%，总酚酸含量为10%。实施例2、本发明花生茎叶提取物的制备取花生茎叶33kg，用10倍量70%乙醇加热回流提取提取3次Qh、lh、lh)(花生茎叶药材先经70%乙醇提取2小时，倾出提取液后残渣用70%乙醇再提取1小时，重复第二次操作，即得花生茎叶提取液)，收集提取液；将提取液浓缩后加入适量水进行分配，依次用石油醚和正丁醇溶液对其进行萃取，收集正丁醇萃取液部分，回收溶剂，加适量水进行分配，水分配液过HPD-300型大孔吸附树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公司生产)，先用3BV(柱体积)水和:3BV(柱体积)20%乙醇洗脱至无色，除去糖等大分子杂质，弃去，再用5BV(柱体积)70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥，即得本发明的花生茎叶提取物(花生茎叶有效部位)。采用紫外-可见分光光度法对花生茎叶提取物中的总留醇和总酚酸的含量进行测定，结果显示，上述花生茎叶提取物中总留醇含量为阳％，总酚酸含量为15%。实施例3、本发明花牛苯叶提取物的制备取花生茎叶3. ^g，用10倍量甲醇加热回流提取3次Qh，lh, lh)(花生茎叶药材先经甲醇提取2小时，倾出提取液后残渣用甲醇再提取1小时，重复第二次操作，即得花生茎叶提取液)，收集提取液；将提取液浓缩后加入适量水进行分配，依次用石油醚和乙酸乙酯溶液对其进行萃取，收集乙酸乙酯萃取液部分，回收溶剂，加适量水进行分配，水分配液过HPD-300型大孔吸附树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公司生产)，先用:3BV(柱体积)水和3BV (柱体积)20 %乙醇洗脱至无色，除去糖等大分子杂质，弃去，再用5BV (柱体积)70 %的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥，即得本发明的花生茎叶提取物(花生茎叶有效部位)。采用紫外-可见分光光度法对花生茎叶提取物中的总留醇和总酚酸的含量进行测定，结果显示，上述花生茎叶提取物中总留醇含量为51%，总酚酸含量为12%。实施例4、本发明花生茎叶提取物的制备取花生茎叶3. 5kg,用10倍量70 %乙醇渗漉提取Mh，收集提取液；将提取液浓缩后加入适量水进行分配，依次用石油醚和正丁醇溶液对其进行萃取，收集正丁醇萃取液部分，回收溶剂，加适量水进行分配，水分配液过HPD-300型大孔吸附树脂(沧州宝恩吸附材料科技有限公司生产)，先用3BV(柱体积)水和:3BV(柱体积)20%乙醇洗脱至无色，除去糖等大分子杂质，弃去，再用5BV(柱体积)70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，将回收乙醇后的洗脱液减压干燥，即得本发明的花生茎叶提取物(花生茎叶有效部位)。采用紫外-可见分光光度法对花生茎叶提取物中的总留醇和总酚酸的含量进行测定，结果显示，上述花生茎叶提取物中总留醇含量为50%，总酚酸含量为11%。实施例5、本发明药物组合物的制备取花生茎叶提取物10g，蔗糖40g，混合均勻，制粒，过筛，干燥，即制得花生茎叶提取物的颗粒剂型的药物；或将制得的颗粒经进一步压片，干燥，即制得花生茎叶提取物片剂剂型的药物。实施例6、本发明药物组合物的制备取花生茎叶提取物10g，淀粉50g，混合均勻，采用常规的胶囊制备工艺，即制得花生茎叶提取物胶囊剂型的药物。实施例7、本发明药物组合物的制备取花生茎叶提取物10g，加入IOg熔融的聚乙二醇6000和IOg聚乙二醇4000中，采用常规的滴丸制备工艺，即制得花生茎叶提取物滴丸剂型的药物。
实施例8、本发明药物组合物的制备取花生茎叶提取物10g，微晶纤维素24g，羧甲基纤维素钠6g，微粉硅胶0. lg，混合均勻，压片，即制得花生茎叶提取物分散片剂型的药物。实施例9、本发明药物组合物的制备取花生茎叶提取物10g，植物油25g，混勻，用明胶作囊壳材料，采用常规的软胶囊制备工艺压制成软胶囊，即制得花生茎叶提取物软胶囊剂型的药物。实施例10、本发明药物组合物的制备取花生茎叶提取物10g，聚乙烯40g，混合均勻，制粒，压片，干燥，即制得花生茎叶提取物缓释片剂型的药物。棚列11、 ·物播·勿膽效轉骀以下实施例将用于证明本发明花生茎叶提取物的疗效镇静安神药效试验采用测定小鼠自主活动和戊巴比妥钠阈下量协同小鼠睡眠方法，观察花生茎叶提取物对小鼠睡眠质量的影响程度。1.实验材料1. 1 动物昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18_22g，购自北京华埠康生物科技股份有限公司，许可证编号SCXK京2010-0004。1. 2 药物花生茎叶提取物棕色粉末，23. 6g生药/g，由天津药物研究院中药现代研究室提供·七叶神安片每片含三七叶总皂苷50毫克，批号100604，山东绿叶制药有限公司产品。
2.实验方法小鼠40只，随机分为4组，即生理盐水组、花生茎叶提取物中剂量组(100克生药/kg，人剂量)、花生茎叶提取物高剂量组OOO克生药/kg，人剂量)和阳性药(七叶神安片)组，每组10只，灌胃给药。小鼠自主活动试验测试各组给药前、后Ih小鼠自主活动，分别记录5min内小鼠活动次数。戊巴比妥钠阈下量协同小鼠睡眠试验灌胃Ih后，腹腔注射戊巴比妥钠阈下量(30mg/kg) 10mL/kg，观察30min，记录翻正反射消失Imin以上的小鼠数量。3.实验结果从小鼠5min自主活动次数和睡眠两方面进行观察，花生茎叶提取物中剂量和高剂量组能明显减少小鼠自发活动次数和促进小鼠睡眠时间，与空白组比较有显著性差异(P<0.01)，表明其具有镇静、安神和促进睡眠的作用。表1花生茎叶提取物对小鼠镇静安神的影响(n = 10 -,x±SD )


本发明提供了一种花生茎叶提取物和它的制备方法及其在制备药物中的应用。本发明提供的花生茎叶提取物中有效物质纯度较高，甾醇和酚酸类化合物的重量之和占花生茎叶提取物重量的50％以上，同时本发明制备预防和/或治疗神经性失眠、神经性衰弱和睡眠障碍等失眠性疾病的药物。本发明质量可控，制备工艺易于产业化，可以根据需要制成各种剂型，为临床提供方便、有效、质量稳定可控的现代中药。