专利名称：续断总皂苷及川续断皂苷vi的制备方法续断为川续断科植物川续断Dipsacus asper Wall, ex Henry的干燥根。始载于 《神农本草经》，列为上品。苦、辛，微温。归肝、肾经。补肝肾，强筋骨，续折伤，止崩漏。用于肝肾不足，腰膝酸软，风湿痹痛，跌扑损伤，筋伤骨折，崩漏，胎漏。酒续断多用于风湿痹痛，跌扑损伤，筋伤骨折。盐续断多用于腰膝酸软。续断主要含有三萜及其皂苷类化合物， 环烯醚萜苷类化合物，生物碱类化合物，酚酸类化合物，黄酮类化合物等多种成分，已知皂苷类成分为其主要有效成分。刘永等通过对不同产地续断中总皂苷的含量测定，发现湖北鹤峰野生续断的总皂苷类有效成分均高于其他地区，高达19. 91%，同时发现不同采收期的以秋季霜降时续断倒苗后采收其总皂苷含量为高。谭洪根等通过实验发现湖北长阳和四川灌县川续断皂苷VI含量最高，文献记载也认为湖北和四川续断的质量较好，药效学实验也表明川续断皂苷VI具有增加骨密度的作用，与中医临床应用续断“补肝肾，强簸骨，续折断”的主治和功能相吻合。吴丰喆等利用大鼠在体肠吸收实验模型，采用HPLC法测定肠循环液中川续断皂苷VI和酚红的浓度，对川续断皂苷VI大鼠在体肠吸收特性进行研究，发现川续断皂苷VI提取物中的共存成分可降低其吸收；其吸收方式可能为被动扩散。目前国内川续断皂苷VI的提取纯化方法有(1)低级醇或含水的低级醇提取，滤过，减压回收醇，浓缩，碱调pH，上清液上大孔树脂柱，碱液洗脱、水洗脱，再用醇洗脱，过氧化铝或脱色树脂柱或采用活性炭脱色，得粗品，进一步采用柱层析分离或采用不同极性溶剂分级萃取纯化精制制得。( 醇提取，碱调pH，水饱和正丁醇萃取，正丁醇层再用正丁醇饱和的水反复萃取，得总皂苷，加水溶解，通过降温或降低溶剂极性至续断皂苷VI充分沉淀，对沉淀过滤或离心除去其中包含的母液，再次将沉淀用水溶解重复上述操作1-3次得到续断皂苷VI单体。这类方法操作复杂、提取周期长、需使用大量有机溶剂。
本发明的技术方案是提供一种续断总皂苷及川续断皂苷VI的制备方法。本发明提供的续断总皂苷及川续断皂苷VI的制备方法，按以下步骤进行1)提取将中药续断粉碎成粗粉，用石油醚脱脂，干燥后用热水或40-99%乙醇提取2-4次，减压浓缩得浸膏；2)氧化镁柱层析所得浸膏加入氧化镁层析柱，含水乙醇洗脱，收集洗脱液浓缩至无醇味；3)除杂加入碱调节PH8-11，离心，将上清液浓缩至干得续断总皂苷提取物；
4)高速逆流色谱分离纯化将续断总皂苷提取物用高速逆流色谱仪分离，以庚烷-氯仿-乙醇-水为溶剂系统，收集川续断皂苷VI流分，减压浓缩冻干结晶，即获得川续断皂苷VI。
1)步骤所述的石油醚加入量为2-3倍药材量，超声脱脂15-30分钟后挥干石油醚。
1)步骤所述的提取方法为超声提取或微波辅助提取，每次提取40min-180min，减压浓缩至原体积的1/5-1/15。
2)步骤所述氧化镁为100-150目氧化镁，柱径高比为1 5_20，洗脱剂为4-6BV 冷水一3-5BV50-80% 乙醇。
4)步骤采用高速逆流色谱法，溶剂系统庚烷-氯仿-乙醇-水体积比为 2-5 3-4 6-7 2-5，主机转速为600-1500r/min，流动相泵入柱内的流速为0. 5-5ml/mirio
本发明的积极效果是采用微波或超声提取，用时短、提取效率高；采用氧化镁柱层析分离纯化，减少了后续工序的分离难度；采用高速逆流色谱法分离，效率高、无污染、快速、大制备量分离川续断皂苷VI，获得的川续断皂苷VI纯度可达98%以上。

下面结合具体实施例，对本发明进一步阐述。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1
取续断饮片Ikg粉碎成粗粉，用石油醚2L超声脱脂20min，挥干除去石油醚后，用体积百分比浓度为50%的乙醇水溶液4L微波提取3次，每次60min，提取液合并、减压浓缩至1000ml，加入氧化镁柱层析(100-150目，柱径高比1 10)，依次以5BV冷水一5BV70% 乙醇洗脱，收集70%乙醇流出液，减压回收乙醇至无醇味，边搅拌边加入氨水溶液调节pH 至8. 5，静置，离心得上清液，浓缩至干，粉碎得续断总皂苷粉末98. 6g，含量为86 %。
采用高速逆流色谱分离续断总皂苷，室温下将庚烷-氯仿-乙醇-水按体积比 5:3:7: 5置于分液漏斗中，振摇后静置分层，待平衡30min后，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，称取IOOmg续断总皂苷粉末溶于两相溶液中待用。进样前， 将固定相泵入色谱柱中，使充满整个柱子，调整主机转速为800r/min，以3. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待流动相从出液端流出且两相建立动态平衡后，由进样阀将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器，在212nm波长处对流出液连续检测，与川续断皂苷VI标准图谱进行对比，收集目标成分，得到川续断皂苷VI流分，浓缩冻干后进行结晶，得川续断皂苷VI，经HPLC测定其纯度达到98%以上。
实施例2:
取续断饮片Ikg粉碎成粗粉，用石油醚3L超声脱脂25min，挥干除去石油醚后， 用热水8L微波提取4次，每次90min，提取液合并、减压浓缩至5000ml，加入氧化镁柱层析 (100-150目，柱径高比1 5)，依次以4BV冷水一;3BV50%乙醇洗脱，收集50%乙醇流出液，减压回收乙醇至无醇味，边搅拌边加入氨水溶液调节PH至8. 0，静置，离心得上清液，浓缩至干，粉碎得续断总皂苷粉末100. 6g，含量为88%。
采用高速逆流色谱分离续断总皂苷，室温下将庚烷-氯仿-乙醇-水按体积比 3:4:6: 4置于分液漏斗中，振摇后静置分层，待平衡30min后，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，称取IOOmg续断总皂苷粉末溶于两相溶液中待用。进样前，将固定相泵入色谱柱中，使充满整个柱子，调整主机转速为950r/min，以2. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待流动相从出液端流出且两相建立动态平衡后，由进样阀将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器，在212nm波长处对流出液连续检测，与川续断皂苷VI标准图谱进行对比，收集目标成分，得到川续断皂苷VI流分，浓缩冻干后进行结晶，得川续断皂苷VI，经HPLC测定其纯度达到98 %以上。
实施例3
取续断饮片Ikg粉碎成粗粉，用石油醚3L超声脱脂30min，挥干除去石油醚后，用体积百分比浓度为70%的乙醇水溶液5L微波提取2次，每次180min，提取液合并、减压浓缩至2000ml，加入氧化镁柱层析(100-150目，柱径高比1 15)，依次以6BV冷水一5BV80% 乙醇洗脱，收集80%乙醇流出液，减压回收乙醇至无醇味，边搅拌边加入氨水溶液调节pH 至9. 0，静置，离心得上清液，浓缩至干，粉碎得续断总皂苷粉末109. 4g，含量为87%。
采用高速逆流色谱分离续断总皂苷，室温下将庚烷-氯仿-乙醇-水按体积比 4:3:7: 2置于分液漏斗中，振摇后静置分层，待平衡30min后，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，称取IOOmg续断总皂苷粉末溶于两相溶液中待用。进样前， 将固定相泵入色谱柱中，使充满整个柱子，调整主机转速为lOOOr/min，以3. 5ml/min的流速将流动相泵入柱内，待流动相从出液端流出且两相建立动态平衡后，由进样阀将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器，在212nm波长处对流出液连续检测，与川续断皂苷VI标准图谱进行对比，收集目标成分，得到川续断皂苷VI流分，浓缩冻干后进行结晶，得川续断皂苷VI，经HPLC测定其纯度达到98%以上。
实施例4
取续断饮片Ikg粉碎成粗粉，用石油醚2L超声脱脂15min，挥干除去石油醚后，用体积百分比浓度为90%的乙醇水溶液4L微波提取3次，每次120min，提取液合并、减压浓缩至800ml，加入氧化镁柱层析(100-150目，柱径高比1 20)，依次以5BV冷水一4BV80% 乙醇洗脱，收集80%乙醇流出液，减压回收乙醇至无醇味，边搅拌边加入氨水溶液调节pH 至9. 5，静置，离心得上清液，浓缩至干，粉碎得续断总皂苷粉末97. Ig,含量为90%。
采用高速逆流色谱分离续断总皂苷，室温下将庚烷-氯仿-乙醇-水按体积比 2:4:6: 3置于分液漏斗中，振摇后静置分层，待平衡30min后，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，称取IOOmg续断总皂苷粉末溶于两相溶液中待用。进样前， 将固定相泵入色谱柱中，使充满整个柱子，调整主机转速为1200r/min，以5. Oml/min的流速将流动相泵入柱内，待流动相从出液端流出且两相建立动态平衡后，由进样阀将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器，在212nm波长处对流出液连续检测，与川续断皂苷VI标准图谱进行对比，收集目标成分，得到川续断皂苷VI流分，浓缩冻干后进行结晶，得川续断皂苷VI，经HPLC测定其纯度达到98%以上。


本发明涉及续断总皂苷及川续断皂苷VI的制备方法，它以中药续断为原料，粉碎成粗粉，用石油醚脱脂，干燥后用热水或40-99％醇提取2-4次，回收乙醇，所得浸膏加入氧化镁柱层析，含水乙醇洗脱，洗脱液浓缩至无醇味，加碱调节pH，离心，取上清液浓缩至干得续断总皂苷提取物；将续断总皂苷提取物采用高速逆流色谱法分离，以庚烷-氯仿-乙醇-水为溶剂系统，收集川续断皂苷VI流分，浓缩冻干结晶即获得高纯度川续断皂苷VI。本发明方法可同时获得续断总皂苷和高纯度的川续断皂苷VI，高效、简便。