一种从红花檵木叶中提取红花檵木多酚的方法【技术领域】，尤其涉及一种从红花檣木叶中提取红花檣木多酚的方法。[0002]红花檣木(Loropetalumchinense Olive var.rubrum Yieh)系金缕梅科(Hamamelidaceae)檣木属檣木(L.chinense Olive)的变种，为常绿灌木或小乔木，是湖南本土野生资源，零星分布于湖南浏阳、平江、醴陵和江西萍乡上栗区湘赣。《本草纲目》、《植物名实图考》、《福建民间草药》、《湖南药物志》中都有记载檣木的根、叶、花、果均可入药，具有清热解毒、通经活络、止咳、消炎、镇痛、止血、兴奋子宫、扩张血管等功效，有研究证实其多种色素具抗氧化，抗菌活性。[0003]多酚广泛存在于水果、蔬菜、牧草和药用植物中，是植物在长期自然选择的过程中产生的一些次级代谢产物。由于多酚是一种重要的生理活性物质，有着很强的生物活性和药理活性，到目前为止，在植物中已经发现近一万种结构独特的多酚。近年来，国内外学者对类多酚的研究更加深入，相对 集中在分离纯化、结构鉴定、清除自由基、药理作用、抗辐射作用、抗癌和抗肿瘤等方面。与此同时，多酚对微生物的抑制和杀灭作用，也逐渐引起了人们的广泛关注。[0004]研究资料显示，植物多酚具有较强的抑菌作用，及明显的抗氧化、抗老化、抑制胆固醇上升和抗癌等功效，摄取植物多酚对预防和控制疾病的发生具有明显效果。感冒、口腔炎、胃肠炎以及皮肤疮疡等疾病多与病毒和细菌等微生物感染有密切关系。很多食品有杀灭和抑制微生物导致疾病的功效，能够发挥抗病毒、消炎杀菌及驱虫作用。[0005]王金梅等采用顶空固相微萃取和气质联用技术从花和叶中分别鉴定出26和29个化合物，测定其花的挥发性成分相对含量明显比叶高。唐华等分析比较了檣木和红花檣木叶片挥发油的成分，在3种叶片中分别鉴定出25、21、23种成分，含量较多的组分有:顺-3-己烯-1-醇、棕榈酸、硬脂酸、油酸。戴菁等采用不同溶剂提取红花檣木植株3种不同颜色叶片中的色素，分析花色素的含量结果表明:红花檣木红色叶片中总花青素和多酚含量都相对较高，绿色叶片中含叶绿素和类胡萝卜素多。唐华等研究结果表明檣木和红花檣木叶中含有大量不饱和脂肪酸，可作为中药材原料。卢成英，唐克华等用20%乙醇加微波处理提取的红檣木花红色素具有较强的抗菌活性。刘如龙，付鸣佳提取的红花檣木花朵中的多酚类物质，对细菌和真菌有较好的抑制细菌作用。[0006]但是，目前从红花檣木叶中提取红花檣木多酚的方法大都存在着方法复杂，并且提取的产率和纯度不高，并且得到的产物抑菌活性差等缺点。

[0007]本发明提供了一种从红花檣木叶中提取红花檣木多酚的方法。
[0008]本发明采用如下技术方案:[0009]本发明的从红花檣木叶中提取红花檣木多酚的方法的具体步骤如下:
[0010](I)将新鲜的红花檣木叶用电热恒温干燥箱50_80°C烘干粉碎后，过10-30目筛密封保存备用；
[0011](2)称取步骤(1)处理好的红花檣木叶，然后加入乙醇，红花檣木叶与乙醇的重量比为1:25-45，在75-85°C下，浸提15_30min，浸提完成后，滤液加入等体积的氯仿脱色，在2-6°C下振荡并静置分层，水层用等体积的乙酸乙酯萃取，2-6°C振荡20-40min，静置分层，取乙酸乙酯层进行减压蒸馏，冷冻干燥后得红花檣木花叶I号多酚粉末。
[0012]步骤(1)中，优选将新鲜的红花檣木叶用电热恒温干燥箱65°C烘干粉碎后，过18目筛密封保存备用。
[0013]步骤(2)中，乙醇的质量浓度为60%。
[0014]步骤(2)中，红花檣木叶与乙醇的重量比优选为1:35。
[0015]步骤(2)中，优选在80°C下，浸提20min。
[0016]步骤(2)中，优选在4°C下振荡并静置分层，水层用等体积的乙酸乙酯萃取，4°C振荡30min，静置分层。
[0017]本发明的积极效果如下:
[0018]本发明的从红花檣木叶中提取红花檣木多酚的方法具有操作简单，原料易得，反应条件温和等优点，并且提 取的红花檣木多酚的产率高、纯度高，而且抑菌活性强。



[0019]图1为红花檣木花叶I号多酚对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和黑曲霉菌的抑制效果图。
[0020]A-金黄色葡萄球菌、B-大肠杆菌、C-枯草芽孢杆菌、D-黑曲霉菌。

[0021]下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。
[0022]实施例1
[0023](I)将新鲜的红花檣木叶用电热恒温干燥箱50°C烘干粉碎后，过10目筛密封保存备用;
[0024](2)称取步骤(1)处理好的红花檣木叶，然后加入乙醇，红花檣木叶与乙醇的重量比为1:25，在75°C下，浸提30min，浸提完成后，滤液加入等体积的氯仿脱色，在2°C下振荡并静置分层，水层用等体积的乙酸乙酯萃取，2°C振荡20min，静置分层，取乙酸乙酯层进行减压蒸馏，冷冻干燥后得红花檣木多酚粉末。
[0025]经检测本方法提取花檣木多酚粉末的收率为94.23%。纯度为71.87%。
[0026]实施例2
[0027](I)将新鲜的红花檣木叶用电热恒温干燥箱80°C烘干粉碎后，过30目筛密封保存备用;
[0028](2)称取步骤(1)处理好的红花檣木叶，然后加入乙醇，红花檣木叶与乙醇的重量比为1:45，在85°C下，浸提15min，浸提完成后，滤液加入等体积的氯仿脱色，在6°C下振荡并静置分层，水层用等体积的乙酸乙酯萃取，6°C振荡40min，静置分层，取乙酸乙酯层进行减压蒸馏，冷冻干燥后得红花檣木多酚粉末。
[0029]经检测本方法提取花檣木多酚粉末的收率为96.58%。纯度为72.23%。
[0030]实施例3
[0031](I)将新鲜的红花檣木叶用电热恒温干燥箱65°C烘干粉碎后，过18目筛密封保存备用;
[0032](2)称取步骤(1)处理好的红花檣木叶，然后加入乙醇，红花檣木叶与乙醇的重量比为1:35，在80°C下，浸提20min，浸提完成后，滤液加入等体积的氯仿脱色，在4°C下振荡并静置分层，水层用等体积的乙酸乙酯萃取，4°C振荡30min，静置分层，取乙酸乙酯层进行减压蒸馏，冷冻干燥后得红花檣木多酚粉末。
[0033]经检测本方法提取花檣木多酚粉末的收率为97.86。纯度为74.56%。
[0034]实施例4本发明制备的红花檣木多酚的抑菌活性
[0035]将本发明实施例3制备的红花檣木多酚进行抑菌活性测定，方法如下:
[0036]1.1菌悬液的制备方法
[0037]活化菌种:准备好超净工作台，在无菌操作条件下，将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌3种菌种分别移接入3支经过高压蒸汽灭菌(121°C，15min)的装有营养肉汤培养基的试管斜面上，放置于37°C恒温培养箱内培养24h后,置于O~4°C冰箱冷藏备用。黑曲霉菌种移马铃薯葡萄糖琼脂培养基的斜面上，于28 V恒温培养箱内培养48h后，置于O~4°C下冷藏备用。
[0038]制备菌悬液:用接种环挑取微量菌体于一定体积的无菌水中，使用比浊法(λ =600nm)判定菌量，调整菌悬浮液的准确浓度，使其所含孢子或者菌体量在104~105cfu/mL之间。
[0039]1.2红花檣木多酚提取液抑菌活性的测定
[0040]在无菌条件下，向相应的固体培养基平板上分别加入0.5mL菌悬液，用无菌三角刮铲涂布均匀。等待琼脂完全吸收平板上的水分，再用无菌镊子在每个平板上轻放两个牛津杯(经高压蒸汽灭菌)，平皿边缘距离牛津杯不少于15mm，且两个牛津杯间距不少于30mm。分别向牛津杯中加入浓度为1.2mg/mL的红花檣木多酚溶液与无菌水各200yL。将细菌放置于37°C恒温培养箱内，培养24h ;将霉菌置于28°C恒温培养箱内培养48h。米用游标卡尺测定抑菌圈直径。1.3结果
[0041]本发明实施例3制备的红花檣木多酚的抑菌活性如图1和表1所示:
[0042]表1红花檣木多酚的抑菌活性