专利名称：一种从色钉菇中提取抗氧化活性物质的方法及其应用的制作方法药食用高等真菌作为一类高蛋白、低脂肪、富含微量元素的健康食品，具有很 高的营养价值和保健功效。高等真菌可产生多种结构新颖或具有各种生物活性的次生代 谢产物，为人类开发新药、保健食品等提供了重要的资源。迄今为止，已经从高等真菌 中发现了多糖、留体类、生物碱、萜类等具有显著生物活性的物质。随着化学、药理 学、营养学、临床医学的不断发展，人们对高等真菌的认识和利用将更加广泛深入。近 年来，人们对高等真菌的研究已越来越偏重于生物活性的研究，而非过去单纯的化学成 分的分离鉴定。长期以来，在食品保鲜、化妆品制作、保健食品乃至医药领域，人们一直使 用人工合成抗氧化剂，如BHT(二叔丁基羟基甲酚)，BHA(叔丁基羟基茴香醚)， TBHQ(特丁基对苯二酚)和PG(没食子酸丙酯)等。近年研究发现，这些人工合成抗 氧化剂存在安全性问题，具有诸多副作用，如对人体的肝、脾、肺均有不利影响，会诱 发恶性肿瘤等。因此，近年来，从自然界寻求高效、无毒、安全的天然抗氧化剂的研究 已引起各国科学家的重视。抗氧剂依其作用原理可分为(1)自由基终止剂，如BHA， BHT, TBHQ和天然存在的生育酚等；(2)还原剂，如抗坏血酸及其盐类、亚硫酸及其 盐类、核黄素等；(3)鳌合剂，如EDTA、柠檬酸、植酸等；(4)单旋态氧抑制剂，如胡 萝卜素等。目前，已开发利用或正在研究的天然抗氧化剂多来自植物材料，主要有香辛 料提取物、茶多酚类、天然黄酮类、维生素类、蛋白质和酶类(SOD)、类胡萝卜素、植 酸、中草药提取物等几类物质。除植物材料以外，近年，利用高等真菌作材料，研究天 然抗氧化剂已成为该领域的新热点。国内外对高等真菌抗氧化活性物质研究呈以下特点。一是在多种食药用真菌子 实体、菌丝体提取物中都发现含有抗氧化活性物质。这些高等真菌中，既有人工栽培的 食用菌，也有野生菌。研究表明，不同种类的食用菌抗氧化能力并不相同，说明高等真 菌中含有的抗氧化成分多少、种类均有差异。二是对抗氧化能力的测定多用的单一粗提 物。如冷水提取物、热水提取物、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚、丙酮、氯仿等提取 物。检测方法多采用清除超氧化物自由基、羟自由基、抑制脂质过氧化、亚铁离子螯合 等。结果显示，各提取物均有不同程度的抗氧化活性，表明高等真菌中含有的抗氧化物 质存在复杂性。定性测定结果显示，子实体、菌丝体中含有的抗氧化物质有酚类物 质、黄酮类物质、类黄酮、萜类物质、维生素C，类胡罗卜素、番茄红素、多糖等。三 是仅有少数文献报道了高等真菌抗氧化物质的纯化及结构特点。 色钉菇(Chroogomphus rutilus)，又称血红铆钉菇，俗称红蘑、肉蘑、松树伞、松蘑等，在真菌分类上属于担子菌亚门层菌纲、伞菌目、铆钉菇科。是针叶树木重要的 外生菌根真菌。国内外对色钉菇的研究主要集中在其所含多的多糖类物质。唐超、王清 吉等研究发现低剂量血红铆钉菇多糖对小鼠S180肉瘤的抑制率为76.018%，明显超过抗 癌药物环磷酰胺的抑瘤率，具有显著的抑瘤作用；而肝指数、脾指数和胸腺指数与正常 小鼠差异不大，能够有效保护免疫器官。SunY.X.，LiX.等分析了血红铆钉菇子实体的 四种水溶性多糖CRPsA-I、CRPsA-2、CRPsB-I和CRPsB_2的结构，并通过体外抗氧 化能力检测，发现CRPsB-I和CRPsB-2具有很好的自由基清除作用和较强的Fe2+螯合能 力。而采用不同极性的有机化合物分别提取色钉菇中的活性物质并对其活性物质的抗氧 化活性进行研究，国内外均未见报道。
本发明的目的是提供一种从色钉菇中提取抗氧化活性物质的方法。本发明的目的还在于提供上述提取方法获得的提取物在抗氧化保健产品及药物 开发中的应用。本发明的技术构思如下在化学、生物化合物分离制备技术领域，液-固萃取 法是利用溶剂对固体混合物中所需成分的溶解度大，对杂质的溶解度小的原理，把固体 物质放于溶剂中长期浸泡而达到萃取的目的。本发明提供的方法是采用极性不同的三种 有机溶剂，即非极性的石油醚、中极性的乙酸乙酯、极性的乙醇，分步萃取色钉菇的子 实体，获得极性不同的萃取物，即药用活性物质，然后分析不同极性萃取物的抗氧化效 果，进而用于开发其用途。具体的，本发明所说的从色钉菇中提取抗氧化活性物质的方法如下方法一取烘干后的色钉菇子实体干粉，与石油醚按质量体积比(0.1 1) 20 (g mL) 比例混合后，进行如下步骤(A)操作搅拌2h，静置过夜，滤纸过滤收集上清液，重复 操作3 5次，合并上清液，将合并后的上清液采用旋转蒸发器于40 45°C减压浓缩， 然后用真空干燥箱干燥，得到石油醚提取物浸膏，称重，计算产率。将子实体粉末滤 尽，烘干备用。本发明还可以采取方法二将方法一得到的石油醚提取物干粉与乙酸乙酯按质 量体积比(0.1 1) 20(g mL)比例混合后，重复方法一中的步骤(A)操作，即搅 拌2h，静置过夜，滤纸过滤收集上清液，重复操作3 5次，合并上清液，将合并后的上 清液采用旋转蒸发器于40 45°C减压浓缩，然后用真空干燥箱干燥，得到乙酸乙酯提取 物浸膏，称重，计算产率。将子实体粉末滤尽，烘干备用。 本发明还可以采取方法三将方法二得到的乙酸乙酯提取物干粉与无水乙醇按 质量体积比(0.1 1) 20 (g mL)比例混合后，重复方法一中的步骤(A)操作，即 搅拌2h，静置过夜，滤纸过滤收集上清液，重复操作3 5次，合并上清液，将合并后的 上清液采用旋转蒸发器于40 45°C减压浓缩，然后用真空干燥箱干燥，得到乙醇提取膏 状物，称重并计算产率。各方法提取物的得率=[每种提取物的质量(g)/子实体干粉的质量(g)]X100%各提取方法得到的提取物的得率见表1。表1色钉菇子实体三种提取物的得率(％ )提取物石油醚 乙酸乙酯 乙醇-

本发明公开了一种从色钉菇中提取抗氧化活性物质的方法，以及获得的提取物在抗氧化保健品及药物研发中的应用。本发明提供的制备活性物质的方法一将色钉菇干粉与石油醚混合、搅拌，静置过夜；收集上清液后旋转蒸发浓缩，浓缩物真空干燥得到石油醚提取物浸膏。将子实体粉末烘干备用。还可以将石油醚提取物干粉与乙酸乙酯混合，重复方法一操作，获得乙酸乙酯提取物浸膏。还可以将乙酸乙酯提取物干粉与无水乙醇混合，重复方法一操作，获得乙醇提取物膏状物。获得的三种提取物均具有较强的抗氧化功效，含丰富的抗氧化活性物质，可做为抗氧化保健产品及药物的原料。