专利名称：苯并杂环衍生物的用于癌预防及治疗或抑制癌转移的用途的制作方法癌(或肿瘤)是非正常、非控制性、无秩序的细胞增殖的产物。特别是如果有破坏性的生长性及转移性，则分类为恶性。所谓渗透性，作为渗透或破坏周围组织的性质，一般是指破坏构成组织边界的基底层，肿瘤进行局部传播，并往往流入体内的循环系统。所谓转移，一般是指借助于淋巴管(Iymphotic)或血管，肿瘤细胞扩散到不同于原发位置的其他 处。转移也意味着通过浆液性体腔或其他空间直接扩张，使肿瘤细胞移动。目前，癌主要通过3种治疗法，即，通过外科手术、放射线照射及化学疗法中的一种或其组合进行治疗。手术包括去除大部分疾病组织。这种外科手术对去除位于特定部位，例如，位于乳房、结肠及皮肤的肿瘤虽然有效，但无法用于治疗处于诸如脊椎的一部分区域的肿瘤，或诸如白血病的分散性肿瘤疾病。化学疗法是使细胞复制或细胞代谢瓦解，多用于治疗乳房、肺及精巣的癌，用于治疗肿瘤疾病的全身性化学疗法的副作用对接受癌治疗的患者而言是最大问题。在这种副作用中，恶心和呕吐是最为普遍和严重的副作用。化学疗法的副作用对患者生命产生极大影响，会使患者对治疗的顺应性发生急剧变化。另外，作为与化学治疗剂相关的副作用，一般有这种药物在给药时应注意的剂量限制毒性(DLT，Dose Limiting Toxicity)。例如,粘膜炎对多种抗癌剂，例如，对作为抗代谢物质细胞毒素剂的5-氟脲嘧啶、甲氨蝶呤及抗肿瘤抗生素(例，亚德里亚霉素)等具有剂量限制毒性。在这种源于化学疗法的副作用中，大部分在严重情况下需要住院，或需要用于治疗疼痛的镇痛剂。如上所述，化学治疗剂及放射线治疗的副作用成为癌患者的临床处置时的主要问题。另ー方面，肿瘤的转移是癌治疗的存活率方面的决定性因素。67kDa的层粘连蛋白受体^7LR)作为嵌入原生质膜(embedded)的非整合素蛋白型受体，与癌的侵袭(浸y|3|) (Nelson，J· et 已丄· The 67kDa i&miniri receptor: structure, functionand role in disease. Biosci. Rep. 28, 33-48 (2008)) 67LR 由 37kDa 前体(37LRP)的聚合(dimerization)生成,对于这种变化和过程的分子级详细机理尚不清楚。37LRP与參与多聚核糖体形成的核糖体亚基p40相同(Auth, D. & Brawerman, G. A 33-kDa polypeptidewith homology to the laminin receptor: component of translation machinery.Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89，4368-4372 (1992))。67LR 被在多种类的癌中观察到高浓度(Nelson,J.et al.The 67kDa laminin receptor:structure,function and rolein disease. Biosci. Rep. 28，33-48 (2008) ;Menard, S.，Castronovoj V.，Tagliabuej E. &Sobelj Μ. E. New insights into the metastasis-associated 67kD laminin receptor.J. Cell. Biochem. 67，155-165 (1997))。但是，在67LR的膜内存在下的调节者或分子级机理尚不明确。KRS属于为进行蛋白质的合成而使同族的(cognate)氨基酸及tRNA接合的aminoacyl-t-RNA synthetases (ARSs)。这些原始酶除催化酶活性外，还具有多效性(pleiotropicノ 特征(Park, S. G. , Ewalt, K. L. & Kim, S. Functional expansion ofammoacyl-tRNA synthetases and their interacting iactors:new perspectives onhousekeepers. Trends Biochem. Sci. 30，569-574(2005))。与此相反，就包含了 KRS 的几种哺乳类的ARS而言，为调节构成蛋白质的多样功能，形成发挥作为分子库(molecularreservoir)作用的(Ray, P. S·，Arif, A. & Fox, P. Macromolecular complexes as depotsfor releasable regulatory proteins.Trends Biochem. Sci. 32，158-164(2007))大分子复合体(Lee, S. ff. , Cho, B. Η. , Park, S. G. & Kim, S. Aminoacyl-tRNA synthetasecomplexes:beyond translation. J. Cell. Sci. 117, 3725-3734(2004) ;Han, J. M. , Kim, J.Y. & Kim, S. Molecular network and functional implications of macromolecular tRNAsynthetase complex. Biochem. Biophys. Res. Commun. 303, 985-993 (2003))。人类 KRS 含有关于RNA与其他蛋白质间相互作用的特有的N端转录激活区(Rho, S. B. et al. Geneticdissection οι protein—protein interactions in multi—tRNA synthetase complex.Proc. Natl. Sci. Acad. USA 96, 4488-4493 (1999) ; Francin, M. , Kaminska, M. , Ker jan, P.&Mirande. M. The N-terminal domain of mammalian Lysyl-tRNA synthetase is afunctional tRNA-binding domain. J. Biol. Chem. 277, 1762-1769 (2002))。
技术课题因此,本发明人在就人类赖氨酰t-RNA合成酶(lysyl-t-RNA synthetase, KRS)的功能多样性进行研究的过程中，作为具有与该蛋白质结合可能性的蛋白质之一，确认了37LRP/p40 ; 了解到KRS使通过37LRP的聚合而形成的存在于原生质膜的层粘连蛋白受体(67LR)实现稳定化，从而促进细胞移动及癌转移等，KRS通过原生质膜的层粘连蛋白受体，对癌转移或癌细胞移动产生影响；阻抑KRS与67LR相互作用的物质对癌转移进行抑制，从而具有癌预防及治疗效果，因此，获知了对其进行阻抑的苯并杂环衍生物的新用途，完成了本发明。因此，本发明的目的是提供一种苯并杂环衍生物的用途，通过阻抑KRS及67LR的相互作用，抑制癌的转移，从而预防及治疗癌。技术解决方案为达成如上目的，本发明提供ー种包含苯并杂环衍生物或其可允许用作药用的盐的癌预防及治疗用药物组合物。为达成本发明的另一目的，本发明提供ー种包含苯并杂环衍生物或其可允许用作药用的盐的癌转移阻抑用药物组合物。为达成本发明的另一目的，本发明提供一种苯并杂环衍生物或其可允许用作药用的盐的用于癌预防及治疗剂制造的用途。为达成本发明的另一目的，本发明提供一种苯并杂环衍生物或其可允许用作药用的盐的用于癌转移阻抑剂制造的用途。为达成本发明的另一目的，本发明提供一种癌预防及治疗方法，其特征在于，把苯并杂环衍生物或其可允许用作药用的盐，以有效剂量投药给需要其的个体。为达成本发明的另一目的，本发明提供一种癌转移阻抑方法，其特征在于，把苯并杂环衍生物或其可允许用作药用的盐，以有效剂量投药给需要其的个体。下面对本发明进行详细说明。本发明人首次查明了 KRS对癌转移或癌细胞移动产生的影响。即，本发明查明KRS通过原生质膜的层粘连蛋白受体^7LR)对癌转移或癌细胞移动产生影响。另外，首次查明阻抑KRS与67LR相互作用的物质对癌的转移进行抑制，能够用作癌预防及治疗的目的。并筛选化合物的类库，遴选了苯并杂环衍生物化合物。在本发明中，“KRS”、“KRS蛋白质”或“KRS多肽”是指被称为赖氨酰tRNA合成酶的多肽。上述KRS多肽可以是本行业众所周知的KRS多肽，但优选可以是具有基因库中注·册号NP_005539中标记的氨基酸序列的多肽。另外，本发明的KRS包括其功能性同等物。在本发明中，所谓功能性同等物，是指与基因库中注册号NP_005539中标记的氨基酸序列至少具有70%以上，优选具有80%以上，更优选具有90%以上的序列相同性(S卩，同一性)的多肽。例如，是包括具有 70%、71%、72%、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、100%的序列相同性的多肽，是指与具有基因库中注册号NP_005539中标记的氨基酸序列的多肽实质上表现出同质的生理活性的多肽。其中，所谓“实质上同质的生理活性”，是指与原生质膜的层粘连蛋白受体相互作用，调节癌转移或癌细胞移动。在本发明中，“层粘连蛋白受体”或“67kDa的层粘连蛋白受体(67LR)”，作为嵌入原生质膜的(embedded)非整合素蛋白型受体，例如，可以具有基因库中注册号NM_002295、S37431、AF284768、S37431、AF284768、J03799、XP_370865、XP_001083023 中记载的碱基序列或氨基酸序列。另外，在本发明中，层粘连蛋白受体包括其功能性同等物。本发明中的对KRS及67LR相互作用的阻抑可以利用本行业众所周知的蛋白与蛋白相互作用的检测方法，例如，可以利用体外蛋白与蛋白结合试验(in vitropull-down assay) > EMSA(,electrophoretic mobility shift assays)、用于蛋臼放结合的免疫试验、功能性试验(磷酸化试验等)、非免疫沉淀试验、免疫沉淀蛋白质印迹试验、免疫-共-定位试验(immuno-co-localization)、交联(cross-linking)、亲和层析(affinity chromatography)、免疫沉淀法(immunoprecipitation, IP)、酵母双杂交(yeast two-hybrid, Y2H)、突光共振能量转移(fluorescence resonance energytransfer, FRET)、双分+灸光互朴(bimolecular fluorescence complementation, Bi-FC)等本行业众所周知的多种方法执行。本发明的化合物的筛选方法，例如，可以利用分别融合于细菌阻遏蛋白LexA或酵母GAL4的DNA-结合域及酵母GAL4蛋白质的转录激活(transactivaton)域的、表达KRS与67LR或这些蛋白质的一部分或同系物(homologues)的酵母,执行酵母双杂交试验(KIM, M.J. et al.，Nat. Gent.，34:330-336，2003)。KRS 与 67LR 的相互作用是在具有结合于 LexA 蛋白质或GAL4的DNA-结合域的调节序列的启动子的控制下，对诱导表达报告基因的转录激活因子进行重新构成。作为上述报告基因，如上所述记载，可以使用对本行业众所周知的能够任意检测的多肽进行编码的基因(例CAT (chloramphenicol acetyltransferase :氯霉素こ酰转移酶)、突光素酶、β -半乳糖苷酶、β -葡萄糖苷酶、碱性磷酸酶及GFP (green fluorescentprotein :绿色荧光蛋自)等。在KRS与67LR或这些蛋白质的一部分或同系物的相互作用被试验制剂所促进或强化的情况下，上述报告基因的表达则比正常条件进ー步増加。相反，在上述相互作用被试验制剂阻抑或削弱的情况下，上述报告基因将不表达或比正常条件减少表达。另外，作为报告基因，可以选择对能够使酵母生长的蛋白质(即，当上述报告基因不表达时，酵母的生长被抑制)进行编码者。例如，可以是对与氨基酸或含氮碱基的生物合成过程有关的酶进行编码的营养缺陷型(auxotropic)基因(例ADE3、HIS3等的酵母基因或其他种来源的同等基因)。当在该系统中表达的AMP2与p53的相互作用或者这些蛋白质的一部分或同系物的相互作用被试验制剂抑制或削弱时，报告基因不表达或減少表达。因此，在上述条件下，酵母的生长停止或变慢。这种报告基因的表达所带来的效果可以通过 目视或装置(例显微镜)进行观察。在本发明中，利用上述筛选方法筛选了化合物类库，确认了苯并恶唑、苯并噻唑、苯并吡咯衍生物化合物阻抑KRS及67LR的相互作用，阻抑癌的转移，从而具有预防/治疗癌的效果。因此，本发明提供一种癌预防及治疗用药物组合物，包含以下述化学式I表示的苯并杂环衍生物或其可允许用作药用的盐作为有效成份。 化予式I本发明涉及一种苯并杂环衍生物的新型用途，尤其涉及包含苯并杂环衍生物或其可允许用作药用的盐作为有效成份的癌预防及治疗用组合物。本发明人查明，通过KRS与67LR相互作用，促进癌(或肿瘤)细胞的移动，对癌的转移(metastasis)产生影响，确认了阻抑KRS及67LR的相互作用的物质能够抑制癌细胞的转移，预防及治疗癌。因此，本发明的组合物抑制癌的转移，从而提供用于癌预防及治疗的新途径。
苯并杂环衍生物的用于癌预防及治疗或抑制癌转移的用途制作方法
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