专利名称：：用酶使油脱胶的方法：传统上有两种方法用于油类的脱胶，是物理脱胶和化学脱胶方法。在1990年代基于胰腺磷脂酶(pancreaticphospholipase)的使用出现了酶脱胶方法。由于该酶按犹太教规不是清洁可食的(non-kosher)，所以该磷脂酶最后由微生物的磷脂酶A1(LecitaseUltraTM-Novozymes，丹麦)代替。与化学或物理脱胶方法相比，酶方法具有若干优点，包括成本节省，产率更高，更环保。
在一个方面，本发明提供一种使用如本文定义的脂质酰基转移酶对植物油或食用油进行酶脱胶的方法。本发明还提供一种植物油或食用油的酶脱胶方法，其包括用本发明的脂质酰基转移酶处理食用油或植物油，从而去除大部分的磷脂。本发明还提供一种植物油或食用油的酶脱胶方法，其包括用本发明的脂质酰基转移酶处理食用油或植物油，从而将来自大部分磷脂的酰基转移到一种或多种酰基受体上，例如转移到一种或多种甾醇(stenol)和/或甾烷醇(stanol)上。另一方面，本发明提供一种或多种脂质酰基转移酶。在一个方面，本发明提供脂质酰基转移酶，其包括SEQIDNo.16所示的氨基酸序列。另一方面，本发明提供含有SEQIDNo16所示的氨基酸序列的脂质酰基转移酶，或与SEQIDNo.16具有75％或更多，优选85％或更多，更优选90％或更多，还更优选95％或更多，还更优选98％或更多，或还更优选99％或更多同源性的氨基酸序列。在又一个方面，本发明提供脂质酰基转移酶在食用油脱胶中的应用，用来(i)去除磷脂(例如磷脂酰胆碱)和/或(ii)提高固醇酯和/或甾烷醇酯在油中形成和/或(iii)去除磷脂(例如磷脂酰胆碱)和/或提高固醇酯和/或甾烷醇酯在油中形成，而不会显著增多油中的游离脂肪酸。优选的方面用于本发明的脂质酰基转移酶可以是天然脂质酰基转移酶，也可以是变体脂质酰基转移酶。例如用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可以是如WO2004/064537或WO2004/064987，或PCT/IB2004/004378或GB0513859.9所述的脂质酰基转移酶。本文使用的术语“脂质酰基转移酶”是指一种具有酰基转移酶活性(通常分类为E.C.2.3.1.x)的酶，该酶能够将酰基从脂质转移到一个或多个受体底物，例如以下物质的一种或多种固醇；甾烷醇；碳水化合物；蛋白质；蛋白质亚基；甘油；优选固醇和/或甾烷醇。优选地，本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明的方法和/或用途的脂质酰基转移酶能够将酰基从脂质(如本文定义的)转移到一种或多种下述酰基受体底物固醇或甾烷醇，优选固醇。在一些方面中，本发明的“酰基受体”可以是包含羟基(-OH)的任何化合物，例如多价醇类包括甘油、固醇、甾烷醇、碳水化合物；羟基酸包括果酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸和抗坏血酸；蛋白质或其亚基如氨基酸、蛋白质水解物和肽(部分水解的蛋白质)，及其混合物和衍生物。优选地，本发明的“酰基受体”不是水。优选酰基受体不是甘油单酯。在一个方面，本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和/或用途的脂质酰基转移酶既能够将酰基从脂质转移到固醇和/或甾烷醇，还能够将酰基从脂质转移到下列物质中的一种或多种碳水化合物，蛋白质，蛋白质亚基，甘油。优选地，本发明脂质酰基转移酶作用的脂质底物是下列脂质中的一种或多种磷脂例如卵磷脂(lecithin)，如磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)。该脂类底物在此可以被称为“脂质酰基供体”。这里使用的术语卵磷脂包括磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺，磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰甘油。对于一些方面，优选地，本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和/或用途的脂质酰基转移酶对其起作用的脂质底物是磷脂，诸如卵磷脂，例如磷脂酰胆碱。对于一些方面，优选地，本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和/或用途的脂质酰基转移酶不能或基本不能作用于甘油三酯和/或1-甘油单酯和/或2-甘油单酯。适宜地，本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和/或用途的脂质酰基转移酶可显示出下列脂酶的活性中的一种或多种磷脂酶A2活性(E.C.3.1.1.4)，磷脂酶A1活性(E.C.3.1.1.32)。适宜地，对于一些方面，本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和/或用途的脂质酰基转移酶可将酰基从磷脂转移到固醇和/或甾烷醇。对于一些方面，优选本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和/或用途的脂质酰基转移酶可将酰基从磷脂转移到固醇和/或甾烷醇，以形成至少固醇酯和/或甾烷醇酯。对于一些方面，优选本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和/或用途的脂质酰基转移酶不表现三酰甘油脂肪酶活性(E.C.3.1.1.3)，或不表现显著的三酰甘油脂肪酶活性(E.C.3.1.1.3)。本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和/或用途的脂质酰基转移酶可将酰基从脂类转移到固醇和/或甾烷醇。因此，在一个实施方案中，本发明的“酰基受体”既可为固醇又可为甾烷醇，或固醇和甾烷醇二者的组合。优选地，本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可用下列标准表征(i)该酶具有酰基转移酶活性，该活性可定义为酯转移活性，凭借该活性，脂质酰基供体的原始酯键的酰基部分被转移到酰基受体以形成新的酯；以及(ii)该酶含有氨基酸序列基序GDSX，其中X是下列氨基酸残基中的一种或多种L，A，V，I，F，Y，H，Q，T，N，M或S。优选地，GDSX基序的X是L或Y。更优选地，GDSX基序的X是L。因此，优选本发明的酶含有氨基酸序列基序GDSL。GDSX基序由四种保守氨基酸构成。优选地，所述基序中的丝氨酸是脂质酰基转移酶的催化性丝氨酸。适宜地，GDSX基序中的丝氨酸可以在与嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)脂肪分解酶中与Ser-16相对应的位置，如Brumlik和Buckley(JournalofBacteriologyApr.1996，Vol.1，No.7，p2060-2064)的教导。为确定蛋白质是否具有本发明所述GDSX基序，根据WO2004/064537或WO2004/064987教导的方法，将该序列优选与Pfam数据库中的隐藏markov模型图谱(modelprofile)(HMM图谱)进行比较。Pfam是蛋白质结构域家族的数据库。Pfam包括为每个家族的辅助(curated)多重序列比对以及用于在新序列中鉴定这些结构域的隐藏Markov模型图谱(HMM图谱)。对Pfam的介绍可见于BatemanA等.(2002)NucleicAcidsRes，30；276-280。隐藏Markov模型被应用于许多旨在对蛋白质进行分类的数据库中，综述见BatemanA和HaftDH(2002)BriefBioinform3；236-245。http://www.nchi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi？cmd＝Retrieve&db＝PuhMed&list_uids＝12230032&dopt＝Abstracthttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi？cmd＝Retrieve&db＝PubMed&list_uids＝11752314&dopt＝Abstract对隐藏Markov模型的详细解释和这些模型如何在Pfam数据库中应用参见DurbinR，EddyS，和KroghA(1998)Biologicalsequenceanalysis；probabilisticmodelsofproteinsandnucleicacids.CambridgeUniversityPress，ISBN0-521-62041-4。Hammer软件包可从华盛顿大学(WashingtonUniversity)，StLouis，USA获得。可选择地，GDSX基序可以使用Hammer软件包识别，说明由DurbinR，EddyS，和KroghA(1998)Biologicalsequenceanalysis；probabilisticmodelsofproteinsandnucleicacids.CambridgeUniversityPress，ISBN0-521-62041-4及其中的参考文献，以及本说明书中提供的HMMER2的资料中提供。PFAM数据库可以通过，例如，目前位于如下网址的几个服务器进行访问http://www.sanger.ac.uk/Software/Pfam/index.shtmlhttp://pfam.wustl.edu/http://pfam.jouy.inra.fr/http://pfam.cgb.ki.se/数据库提供了检索工具，在此可以输入蛋白质序列。然后使用数据库的默认参数，对蛋白质序列中Pfam结构域的存在进行分析。GDSX结构域是在数据库中已建立的区域，因此任何查询序列中存在的该结构域可以得到识别。数据库将返回Pfam00657共有序列与查询序列的比对。优选用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可以用Pfam00657共有序列进行比对(详细描述参见WO2004/064537或WO2004/064987)。优选地，与pfam00657结构域家族的隐藏markov模型图谱(HMM图谱)的阳性匹配表明本发明的GDSL或GDSX结构域的存在。优选地，当与Pfam00657共有序列比对时，用于本发明的方法或用途的脂质酰基转移酶可具有至少一个，优选一个以上，优选两个以上下列区域，GDSx区(block)、GANDY区、HPT区。适宜地，脂质酰基转移酶可具有GDSx区和GANDY区。可选择地，所述酶可具有GDSx区和HPT区。优选地，所述酶至少含有GDSx区。优选地，GANDY基序的残基选自GANDY，GGNDA，GGNDL，最优选GANDY。优选地，当与Pfam00657共有序列比对时，用于本发明方法或用途中的酶与对照嗜水气单胞菌(A.hydrophilia)多肽序列即SEQIDNo.1比较时具有至少一个，优选一个以上，优选两个以上，优选三个以上，优选四个以上，优选五个以上，优选六个以上，优选七个以上，优选八个以上，优选九个以上，优选十个以上，优选十一个以上，优选十二个以上，优选十三个以上，优选十四个以上下列氨基酸残基28hid，29hid，30hid，31hid，32gly，33Asp，34Ser，35hid，130hid，131Gly，132hid，133Asn，134Asp，135hid，309His。Pfam00657GDSX结构域是将具有该区域的蛋白与其它酶区分的独特标识。Pfam00657共有序列，表示为图12的SEQIDNo.2。这是从Pfam00657家族第6版数据库的鉴定衍生出来的，本文也称其为pfam00657.6。共有序列可通过使用新版Pfam数据库来更新(如参见WO2004/064537或WO2004/064987)。发现来自两个版本(release)的数据库的Pfam00657家族中都存在GDSx区、GANDY区和HPT区。其它版本的pfam数据库可用来鉴定pfam00657家族。在一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可用下列标准来表征(i)该酶具有转移酰基的活性，其可定义为酯转移活性，由此将脂质酰基供体的原始酯键上的酰基部分转移到酰基受体上形成新酯；(ii)该酶包含氨基酸序列基序GDSX，其中X是下列氨基酸残基中的一种或多种L，A，V，I，F，Y，H，Q，T，N，M或S；该酶包含His-309或包含在对应于嗜水气单胞菌脂肪分解酶的His-309位的组氨酸残基，所述嗜水气单胞菌脂肪分解酶如图11和13所示(SEQIDNo.1或SEQIDNo.3)。优选地，GDSX基序的氨基酸残基是L。在SEQIDNo.3或SEQIDNo.1中，前18个氨基酸残基形成信号序列。全长序列(其为包含信号序列的蛋白质)的His-309，等同于该蛋白质成熟部分(即不含有信号序列的序列)中的His-291。在一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶包括下列催化三联体Ser-34，Asp-134和His-309或者包含位置分别对应于图13(SEQIDNo.3)或图11(SEQIDNo.1)所示的嗜水气单胞菌脂肪分解酶中Ser-34，Asp-134和His-309的丝氨酸残基、天冬氨酸残基和组氨酸残基。如上所述，在SEQIDNo.3或SEQIDNo.1所示序列中，前18个氨基酸残基形成信号序列。全长序列(包含信号序列的蛋白质)的Ser-34，Asp-134和His-309，等同于蛋白质成熟部分(即不含有信号序列的序列)的Ser-16，Asp-116和His-291。在图12(SEQIDNo.2)所示的Pfam00657共有序列中，活性位点残基对应于Ser-7，Asp-157和His-348。在一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可以用下列标准来表征(i)该酶具有转移酰基的活性，其可定义为酯转移活性，由此将第一脂质酰基供体原始酯键上的酰基部分转移到酰基受体形成新酯；并且(ii)该酶包含至少Gly-32，Asp-33，Ser-34，Asp-134和His-309或者包含位置分别对应于图13(SEQIDNo.3)或图11(SEQIDNo.1)所示的嗜水气单胞菌脂肪分解酶中Gly-32，Asp-33，Ser-34，Asp-134和His-309的甘氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、天冬氨酸和组氨酸。合适地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶包含下列氨基酸序列中的一种或多种。(i)SEQIDNo.3所示的氨基酸序列(见图13)(ii)SEQIDNo.4所示的氨基酸序列(见图14)(iii)SEQIDNo.5所示的氨基酸序列(见图15)(iv)SEQIDNo.6所示的氨基酸序列(见图16)(v)SEQIDNo.7所示的氨基酸序列(见图17)(vi)SEQIDNo.8所示的氨基酸序列(见图18)(vii)SEQIDNo.9所示的氨基酸序列(图9)(viii)SEQIDNo.10所示的氨基酸序列(图10)(ix)SEQIDNo.11所示的氨基酸序列(图21)(x)SEQIDNo.12所示的氨基酸序列(图22)(xi)SEQIDNo.13所示的氨基酸序列(图23)(xii)SEQIDNo.14所示的氨基酸序列(图24)(xiii)SEQIDNo.1所示的氨基酸序列(图11)(xiv)SEQIDNo.15所示的氨基酸序列(图25)或与SEQIDNo.1，SEQIDNo.3，SEQIDNo.4，SEQIDNo.5，SEQIDNo.6，SEQIDNo.7，SEQIDNo.8，SEQIDNo.9，SEQIDNo.10，SEQIDNo.11，SEQIDNo.12，SEQIDNo.13，SEQIDNo.14，SEQIDNo.15所示序列中的任一个具有75％或者更高同一性的氨基酸序列。合适地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶包含如SEQIDNo.3或如SEQIDNo.4或SEQIDNo.1或SEQIDNo.15所示的氨基酸序列，或者包含与SEQIDNo.3所示的氨基酸序列或SEQIDNo.4所示的氨基酸序列或SEQIDNo.1所示的氨基酸序列或SEQIDNo.15所示的氨基酸序列具有75％或以上，优选80％或以上，优选85％或以上，优选90％或以上，优选95％或以上同一性的氨基酸序列。合适地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶包含一段氨基酸序列，该序列与SEQIDNo.3，SEQIDNo.4，SEQIDNo.5，SEQIDNo.6，SEQIDNo.7，SEQIDNo.8，SEQIDNo.9，SEQIDNo.10，SEQIDNo.11，SEQIDNo.12，SEQIDNo.13，SEQIDNo.14，SEQIDNo.1，SEQIDNo.15所示序列中的任一个具有80％或以上，优选85％或以上，更优选90％或以上，还更优选95％或以上的同一性。合适地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶包含下列氨基酸序列中的一个或多个(a)如SEQIDNo.3或SEQIDNo.1的1-100氨基酸残基所示的氨基酸序列；(b)如SEQIDNo.3或SEQIDNo.1的101-200氨基酸残基所示的氨基酸序列；(c)如SEQIDNo.3或SEQIDNo.1的201-300氨基酸残基所示的氨基酸序列；或(d)与上述(a)-(c)定义的氨基酸序列中的任一个具有75％或75％以上，优选85％或85％以上，更优选90％或90％以上，还更优选95％或95％以上同一性的氨基酸序列。合适地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶包含下列氨基酸序列中的一个或多个(a)如SEQIDNo.3或SEQIDNo.1的氨基酸残基28-39所示的氨基酸序列；(b)如SEQIDNo.3或SEQIDNo.1的氨基酸残基77-88所示的氨基酸序列；(c)如SEQIDNo.3或SEQIDNo.1的氨基酸残基126-136所示的氨基酸序列；(d)如SEQIDNo.3或SEQIDNo.1的氨基酸残基163-175所示的氨基酸序列；(e)如SEQIDNo.3或SEQIDNo.1的氨基酸残基304-311所示的氨基酸序列；或(f)与上述(a)-(e)定义的氨基酸序列中任一个具有75％或75％以上，优选85％或85％以上，更优选90％或90％以上，还更优选95％或95％以上同一性的氨基酸序列。在一个方面中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可以是如EP1275711中教导的来自近平滑念珠菌(Candidaparapsilosis)的脂质酰基转移酶。因此在一个方面用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为含有SEQIDNo.17(图28)或SEQIDNo.18(图29)教导的氨基酸序列的脂质酰基转移酶。更优选地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为含有SEQIDNo.16所示氨基酸序列的脂质酰基转移酶(图10)，或与SEQIDNo.16具有75％或更多，优选85％或更多，更优选90％或更多，还更优选95％或更多，还更优选98％或更多，还更优选99％或更多同源性的氨基酸序列。该酶可以被认为是变体酶。在一个方面中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可以为卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)或其变体(例如通过分子进化产生的变体)。合适的LCAT是本领域公知的，并可从下列一种或多种生物体中得到，例如哺乳动物、大鼠、小鼠、鸟(chickens)、黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)、植物，包括拟南芥(Arabidopsis)和稻(Oryzasativa)、线虫、真菌和酵母。在一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为可从并优选从含有pPet12aAhydro和pPet12aASalmo的大肠杆菌(E.coli)菌株TOP10中获得，该菌株由Langebrogade1，DK-1001CopenhagenK，Denmark的DaniscoA/S，根据布达佩斯条约关于用于专利程序的国际认可的微生物保藏(theBuddapestTreatyontheInternationalRecognitionoftheDepositofMicroorganismsforthepurposeofPatentProcedure)在2003年12月22日保藏于英国苏格兰阿伯丁圣马恰尔街23号国立工业、海洋和食品细菌保藏中心(NCIMB)(theNationalCollectionofIndustrial，MarineandFoodBacteria(NCIMB)23St.MacharStreet，AberdeenScotland，GB)，登录号分别为NCIMB41204和NCIMB41205。高度优选用于本发明方法的脂质酰基转移酶包括分离自气单胞菌属(Aeromonasspp.)，优选嗜水气单胞菌或杀鲑气单胞菌，最优选杀鲑气单胞菌。最优选用于本发明的脂质酰基转移酶由SEQIDNos1，3，4，15，16编码。本领域技术人员公知优选该酰基转移酶的信号肽在转移酶表达过程中被切割。SEQID1，3，4，15和16的信号肽是氨基酸1-18。因此对于SEQIDNo1和SEQIDNo3(嗜水气单胞菌)最优选的区域是氨基酸19-335，对于SEQIDNo4，SEQIDNo15和SEQIDNo16(杀鲑气单胞菌)最优选的区域是19-336。当用于测定氨基酸序列的同一性的同源性时，优选如本文所述使用成熟序列进行比对。因此用于测定同源性(同一性)时，对于SEQIDNo1和3(嗜水气单胞菌)最优选的区域是氨基酸19-335，对于SEQIDNo4，15和16(杀鲑气单胞菌)最优选的区域是19-336。SEQID34和35是高度优选的、分别来自嗜水气单胞菌和杀鲑气单胞菌的脂质酰基转移酶的成熟蛋白质序列。用于本发明的脂质酰基转移酶也可以分离自THermobbifida，优选T.fusca，最优选由SEQIDNo28编码。用于本发明的脂质酰基转移酶也可以分离自链霉菌属(Streptomyces)，优选S.avermitis，最优选由SEQIDNo.32编码。其它可用于本发明的酶来自链霉菌属，包括由SEQIDNos5，6，9，10，11，12，13，14，31，33编码的那些。实施例表明由SEQIDNo.33编码的酶在酶脱胶过程中非常有效。用于本发明的脂质酰基转移酶也可以分离自棒杆菌属(Cornebacterium)，优选C.efficiens，最优选由SEQIDNo.29编码。合适地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可以是含有如下序列的脂质酰基转移酶如SEQIDNos37，38，40，41，43，45，或47所示氨基酸序列中的任一个，或与其具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同源性的氨基酸序列，或由SEQIDNos36，39，42，44，46，或48所示核苷酸序列中的任一个或者与其具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同源性的核苷酸序列编码。优选地，用于本发明的方法和用途的脂质酰基转移酶是能水解至少半乳糖脂和/或能将酰基从至少半乳糖脂转移到一种或多种酰基受体底物的脂质酰基转移酶，其中所述酶可从，优选从链霉菌属菌种获得。在一个实施方案中，用于本发明的方法和用途的脂质酰基转移酶优选为能够水解至少半乳糖脂和/或能够将酰基从至少半乳糖脂转移到一种或多种酰基受体底物的脂质酰基转移酶，其中所述酶是由选自下组的核酸编码a)含有SEQIDNo.36所示核苷酸序列的核酸；b)依据遗传密码简并性与SEQIDNo.36的核苷酸序列相关的核酸；和c)含有与SEQIDNo.36所示核苷酸序列具有至少70％同一性的核苷酸序列的核酸。在一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶优选为含有SEQIDNo.37所示氨基酸序列或与其具有至少60％同一性的氨基酸序列的脂质酰基转移酶。在另一个实施方案中，用于本发明的方法和用途的脂质酰基转移酶优选为能够水解至少半乳糖脂和/或能够将酰基从至少另一半乳糖脂转移到另一或多种酰基受体底物的脂质酰基转移酶，其中所述酶含有SEQIDNo.37所示氨基酸序列或与其具有至少60％同一性的氨基酸序列。优选地，用于本发明的方法和用途的脂质酰基转移酶是能够水解至少半乳糖脂和/或能够将酰基从至少半乳糖脂转移到一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中所述酶可从，优选从thermobifida菌种，优选Thermobifidafusca获得。优选地，用于本发明的方法和用途的脂质酰基转移酶是能够水解至少半乳糖脂和/或能够将酰基从至少半乳糖脂转移到一种或多种酰基受体底物的脂肪分解酶，其中所述酶可从，优选获自棒杆菌菌种，优选Corynebacteriumefficiens。在另一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为含有如下序列的脂质酰基转移酶如SEQIDNos37，38，40，41，43，45或47所示氨基酸序列中的任一个，或与其具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同一性的氨基酸序列，或由SEQIDNos39，42，44，46或48所示核苷酸序列中的任一个或与其具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同一性的核苷酸序列编码。在另一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为用于本文所述用途的含有SEQIDNo38，40，41，45或47所示氨基酸序列中的任一个或与其具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同一性的氨基酸序列的脂质酰基转移酶。在另一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为用于本文所述用途的含有SEQIDNo38，40，或47所示氨基酸序列中的任一个或与其具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同一性的氨基酸序列的脂质酰基转移酶。更优选在一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为含有SEQIDNo.47所示氨基酸序列或与其具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同一性的氨基酸序列的脂质酰基转移酶。在另一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为含有SEQIDNo.43或44所示氨基酸序列或与其具有至少80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同一性的氨基酸序列的脂质酰基转移酶。在另一个实施方案中，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可为含有SEQIDNo.41所示氨基酸序列或与其具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％或98％同一性的氨基酸序列的脂质酰基转移酶。在一个实施方案中，用于本发明的方法和用途的脂质酰基转移酶可为能够水解至少半乳糖脂和/或能够将酰基从至少半乳糖脂转移到一种或多种酰基受体底物的脂质酰基转移酶，其中所述酶可由选自下组的核酸编码a)含有SEQIDNo.36所示核苷酸序列的核酸；b)依据遗传密码简并性与SEQIDNo.36的核苷酸序列相关的核酸；和c)含有与SEQIDNo.36所示核苷酸序列具有至少70％同一性的核苷酸序列的核酸。在一个实施方案中，本发明的脂质酰基转移酶是可从，优选从链霉菌属菌株L130或L131获得的脂质酰基转移酶，该菌株由Langebrogade1，DK-1001CopenhagenK，Denmark的DaniscoA/S，根据布达佩斯条约关于用于专利程序的国际认可的微生物保藏(theBuddapestTreatyontheInternationalRecognitionoftheDepositofMicroorganismsforthepurposeofPatentProcedure)在2004年6月25日保藏于国立工业、海洋和食品微生物保藏中心(NCIMB)(23St.MacharStreet，AberdeenScotland，GB)，登录号分别为NCIMB41226和NCIMB41227。适用于本发明和/或本发明所述方法的脂质酰基转移酶可以包含下列氨基酸序列中的任一个和/或由下列核苷酸序列编码编码本发明脂质酰基转移酶的多核苷酸(SEQIDNo16)；本发明的脂质酰基转移酶的氨基酸序列(SEQIDNo17)；适用于本发明方法的脂质酰基转移酶还可通过使用采用默认设定的AlignX，VectorNTI的ClustalW配对比对算法与L131(SEQIDNo.37)序列进行比对而鉴定。L131和来自除虫链霉菌(S.avermitilis)和fusca的同源物的比对说明了GDSx基序(在L131和除虫链霉菌和T.fusca中的GDSY)，GANDY盒，其为GGNDA或GGNDL，以及HPT区(认为是保守的催化组氨酸(histadine))的保守性。这些三个保守区在图61中突出显示。当与pfamPfam00657共有序列(如WO04/064987所述)和/或本文公开的L131序列(SEQIDNo37)比对时，可以鉴定三个保守区域，GDSx区，GANDY区和HTP区(进一步详述参见WO04/064987)。当与pfamPfam00657共有序列(如WO04/064987所述)和/或本文公开的L131序列(SEQIDNo37)比对时，i)本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法的脂质酰基转移酶，优选具有GDSx基序，更优选GDSx基序选自GDSL或GDSY基序。和/或ii)本发明的脂质酰基转移酶或用于本发明方法的脂质酰基转移酶，优选具有GANDY区，更优选GANDY区含有氨基GGNDx，更优选GGNDA或GGNDL。和/或iii)本发明的酶或用于本发明方法的酶具有优选的HTP区。并优选地本发明的或用于本发明方法的半乳糖脂酶/脂质酰基转移酶优选具有GDSx或GDSY基序，及含有氨基GGNDx的GANDY区，优选GGNDA或GGNDL，及HTP区(保守组氨酸)。合适地，当用于本发明方法或用途的脂质酰基转移酶可为变体脂质酰基转移酶，在这样情况下该酶的特征在于所述的酶包含氨基酸序列基序GDSX，其中X是以下氨基酸残基中的一个或多个L，A，V，I，F，Y，H，Q，T，N，M或S，其中该变体酶与亲本序列相比较，在组2或组4或组6或组7(在下文定义)中定义的任何一个或多个氨基酸残基上包含一种或多种氨基酸修饰。例如，用于本发明方法或用途的脂质酰基转移酶变体的特征可在于该酶包含氨基酸序列基序GDSX，其中X是以下氨基酸残基中的一个或多个L，A，V，I，F，Y，H，Q，T，N，M或S，并且其中所述变体酶与亲本序列相比，在组2或组4或组6或组7(在下文定义)中详述的任何一个或多个氨基酸残基上包含一种或多种氨基酸修饰，所述修饰通过将所述亲本序列与本文定义的P10480的结构模型进行比对来鉴定，其优选通过将P10480的晶体结构坐标与本文教导的1IVN.PDB和/或1DEO.PDB进行结构比对来获得。在进一步的实施方案中，用于本发明方法或用途的变体脂质酰基转移酶的特征可在于该酶包含氨基酸序列基序GDSX，其中X是以下氨基酸残基中的一个或多个L，A，V，I，F，Y，H，Q，T，N，M或S，并且其中所述变体酶与亲本序列相比，在组2教导中的任何一个或多个氨基酸残基上包含一种或多种氨基酸修饰，所述修饰在将所述亲本序列与pfam共有序列(SEQIDNo.2-图12)进行对比时被鉴定并且根据P10480的结构模型来修饰以保证最优拟合重叠(bestfitoverlap)(参见图30)，如本文所述。合适地，变体脂质酰基转移酶可包含氨基酸序列，该氨基酸序列如SEQIDNo.34，SEQIDNo.3，SEQIDNo.4，SEQIDNo.5，SEQIDNo.6，SEQIDNo.7，SEQIDNo.8，SEQIDNo.19，SEQIDNo.10，SEQIDNo.11，SEQIDNo.12，SEQIDNo.13，SEQIDNo.14，SEQIDNo.1，SEQIDNo.15，SEQIDNo.25，SEQIDNo.26，SEQIDNo.27，SEQIDNo.28，SEQIDNo.29，SEQIDNo.30，，SEQIDNo.32，或SEQIDNo.33所示，除了在组2或组4或组6或组7(在下文定义)中定义的任何一个或多个氨基酸残基上包含一种或多种氨基酸修饰，所述修饰通过与SEQIDNo.34进行序列比对来鉴定。可选地，变体脂质酰基转移酶可包含氨基酸序列，该氨基酸序列如SEQIDNo.34，SEQIDNo.3，SEQIDNo.4，SEQIDNo.5，SEQIDNo.6，SEQIDNo.7，SEQIDNo.8，SEQIDNo.19，SEQIDNo.10，SEQIDNo.11，SEQIDNo.12，SEQIDNo.13，SEQIDNo.14，SEQIDNo.1，SEQIDNo.15，SEQIDNo.25，SEQIDNo.26，SEQIDNo.27，SEQIDNo.28，SEQIDNo.29，SEQIDNo.30，，SEQIDNo.32，或SEQIDNo.33所示，除了在组2或组4或组6或组7定义的任何一个或多个氨基酸残基上包含一种或多种氨基酸修饰，所述修饰通过将所述亲本序列与本文定义的P10480结构模型进行结构比对来鉴定，其优选地通过将P10480晶体结构坐标与如本文教导的1IVN.PDB和/或1DEO.PDB进行结构比对而获得。可选择地，变体脂质酰基转移酶可包含氨基酸序列，该氨基酸序列如SEQIDNo.34，SEQIDNo.3，SEQIDNo.4，SEQIDNo.5，SEQIDNo.6，SEQIDNo.7，SEQIDNo.8，SEQIDNo.19，SEQIDNo.10，SEQIDNo.11，SEQIDNo.12，SEQIDNo.13，SEQIDNo.14，SEQIDNo.1，SEQIDNo.15，SEQIDNo.25，SEQIDNo.26，SEQIDNo.27，SEQIDNo.28，SEQIDNo.29，SEQIDNo.30，，SEQIDNo.32，或SEQIDNo.33所示，除了在组2教导的任何一个或多个氨基酸残基上包含一种或多种氨基酸修饰，所述修饰在将所述亲本序列与pfam共有序列(SEQIDNo.2)进行对比时被鉴定，并且根据P10480的结构模型来修饰以保证最优拟合重叠(参见图30)，如在下文所教导的。本文所用术语“修饰”指添加，取代和/或缺失。优选术语“修饰”指“取代”。为了免除怀疑，当亲本酶中的氨基酸被取代时，优选用与亲本酶中该位置初始存在的氨基酸不同的氨基酸进行取代，由此产生变体酶。换句话说，术语“取代”的意思不包括用同样的氨基酸进行氨基酸替换。优选地，该亲本酶是包含SEQIDNo.34和/或SEQIDNo.15和/或SEQIDNo.35所示的氨基酸序列的酶。优选地，该变体酶是包含氨基酸序列的酶，所述氨基酸序列如SEQIDNo.34或SEQIDNo.35所示，除了在组2或组4或组6或组7中定义的任何一个或多个氨基酸残基处的一种或多种氨基酸修饰。在一个实施方案中，优选该变体酶与亲本序列相比在组4中定义的至少一个氨基酸残基处包含一种或多种氨基酸修饰。合适地，与亲本酶相比较，该酶变体包含一种或多种下述氨基酸修饰S3E，A，G，K，M，Y，R，P，N，T或GE309Q，R或A，优选Q或R-318Y，H，S或Y，优选Y。优选地，GDSX基序的X是L所以，优选亲本酶包含氨基酸基序GDSL。优选地，制备脂质酰基转移酶变体的方法进一步包含下述的一个或多个步骤1)结构同源性作图或2)序列同源性比对。合适地，结构同源性作图可包括下述的一个或多个步骤i)将亲本序列与图46所示的结构模型(1IVN.PDB)进行比对；ii)在活性位点上以甘油分子的中心碳原子为圆心在10?范围内选择一个或多个氨基酸残基(参见图47)(例如在组1或组2中定义的一个或多个氨基酸残基)；和iii)在亲本序列中修饰根据步骤(ii)选择的一个或多个氨基酸。在一个实施方案中，所选择的氨基酸残基可位于活性位点中以甘油分子的中心碳原子为圆心的9?以内，优选在8，7，6，5，4，或3?范围以内(参见图47)。合适地，结构同源性作图可包括下述的一个或多个步骤i)将亲本序列与图46所示的结构模型(1IVN.PDB)进行比对；ii)在活性位点上以甘油分子的中心碳原子为圆心在10?范围内选择一个或多个氨基酸残基(参见图47)(例如在组1或组2中定义的一个或多个氨基酸残基)；和iii)确定根据步骤(ii)所选择的一个或多个氨基酸残基是否是高度保守的(具体为是否是活性位点残基和/或部分GSDx基序和/或部分GANDY基序)；以及iv)在所述亲本序列中修饰根据步骤(ii)选择的一个或多个氨基酸，其不包括根据步骤(iii)鉴定的保守区域。在一个实施方案中，选择的氨基酸残基可以位于以活性位点中甘油分子的中央碳原子为中心的9?以内，优选8，7，6，5，4或3?范围以内(参见图47)。二中择一地，或与上述的结构同源性作图相结合，结构同源性作图可如下进行选择来源于pfam比对(比对2，图48)用P10480模型及1IVN覆盖的特异性环状区(LRs)或插入区(IVRs)。下面表中定义了环状区(LRs)或插入区(IVRs)在本发明的一些实施方案中，用于本发明方法及用途的变体酰基转移酶不仅在组1-4及6-7中的任一组中定义的一个或多个氨基酸处含有氨基酸修饰，而且在上述定义的一个或多个插入区(IVR1-6)中(优选在IVRs3，5和6，更优选在IVR5或IVR6中)和/或在上述定义的一个或多个环状区(LR1-5)中(优选在LR1，LR2或LR5，更优选在LR5中)含有至少一个氨基酸修饰。在一个实施方案中，用于本发明方法和用途的变体酰基转移酶可包含一个或多个氨基酸修饰，该修饰不仅由组2，4，6和7中的一个或多个组定义，而且位于IVRs1-6中的一个或多个之内(优选位于IVR3，5或6之内，更优选位于IVR5或IVR6之内)，或位于LRs1-5中的一个或多个之内(优选位于LR1，LR2或LR5以内，更优选位于LR5以内)。合适地，用于本发明方法和用途的变体酰基转移酶可包含一个或多个氨基酸修饰，该修饰不仅在组1或2内，而且位于IVR3之内。合适地，用于本发明方法和用途的变体酰基转移酶可包含一个或多个氨基酸修饰，该修饰不仅在组1或2内，而且位于IVR5之内。合适地，用于本发明方法和用途的变体酰基转移酶可包含一个或多个氨基酸修饰，该修饰不仅在组1或2内，而且位于IVR6之内。合适地，用于本发明方法和用途的变体酰基转移酶可包含一个或多个氨基酸修饰，该修饰不仅在组1或2内，而且位于LR1之内。合适地，用于本发明方法和用途的变体酰基转移酶可包含一个或多个氨基酸修饰，该修饰不仅在组1或2内，而且位于LR2之内。同样地，在本发明的一些实施方案中，用于本发明方法及用途的变体酰基转移酶不仅在一个或多个氨基酸残基处含有氨基酸修饰，其中该氨基酸残基位于以活性位点中甘油分子的中央碳原子为中心的10?以内，优选9，8，76，5，4，或3?范围以内，而且在上述定义的一个或多个插入区(IVR1-6)中(优选在IVRs3，5和6中的一个或多个，更优选在IVR5或IVR6中)和/或上述定义的一个或多个环状区(LR1-5)中(优选在LR1，LR2或LR5中的一个或多个，更优选在LR5中)含有至少一个氨基酸修饰。在一个实施方案中，优选该氨基酸修饰位于存在于10?范围内并且也在LR5之内的一个或多个氨基酸残基。因此，该结构同源性作图可包含下列一个或多个步骤i)将亲本序列与图46所示结构模型(1IVN.PDB)进行比对；ii)在以活性位点中甘油分子的中央碳原子为中心的10?范围之内(参见图47)选择一个或多个氨基酸残基(例如在组1或组2定义的一个或多个氨基酸残基)；和/或在IVR1-6之内选择一个或多个氨基酸残基)(优选在IVR3，5或6之内，更优选在IVR5或IVR6之内)；和/或在LR1-5之内选择一个或多个氨基酸残基(优选在LR1，LR2或LR5之内，更优选在LR5之内)；和iii)在所述亲本序列中修饰根据步骤(ii)选择的一个或多个氨基酸。在一个实施方案中，选择的氨基酸残基可以位于以活性位点中甘油分子的中央碳原子为中心的9?范围以内，优选8，7，6，5，4或3?范围以内(参见图47)。合适地，该结构同源性作图可包含下列一个或多个步骤i)将亲本序列与图46所示结构模型(1IVN.PDB)进行比对；ii)在以活性位点中甘油分子的中央碳原子为中心的10?范围之内(参见图47)选择一个或多个氨基酸残基(例如组1或组2中定义的一个或多个氨基酸残基)；和/或在IVR1-6之内选择一个或多个氨基酸残基(优选在IVR3，5或6之内，更优选在IVR5或IVR6之内)；和/或在LR1-5之内选择一个或多个氨基酸残基(优选在LR1，LR2或LR5之内，更优选在LR5之内)；iii)测定根据步骤(ii)选择的一个或多个氨基酸残基是否高度保守(尤其是否是活性位点残基和/或部分GDSx基序和/或部分GANDY基序)；和在所述亲本序列中修饰根据步骤(ii)选择的一个或多个氨基酸，其不包括根据步骤(iii)鉴定的保守区域。合适地，在上面所述方法中选择的一个或多个氨基酸不仅位于以活性位点中甘油分子的中央碳原子为中心的10?范围之内(参见图47)(例如组1或组2中定义的一个或多个氨基酸残基)；并且位于IVR1-6中的一个或多个之内(优选在IVR3，5或6之内，更优选在IVR5或IVR6之内)或位于LR1-5中的一个或多个之内(优选在LR1，LR2或LR5之内，更优选在LR5之内)。在一个实施方案中，优选所述一个或多个氨基酸修饰在LR5之内。当情况是所述一个(或多个)修饰在LR5之内时，所述修饰不是组5中定义的修饰。合适地，所述一个或多个氨基酸修饰不仅落在由LR5定义的区域内，而且构成了组2，组4，组6或组7中一个或多个之内的氨基酸。合适地，该序列同源性比对可包含下列一个或多个步骤i)选择第一亲本脂质酰基转移酶；ii)鉴定具有所需活性的第二相关的脂质酰基转移酶；iii)将所述第一亲本脂质酰基转移酶和第二相关的脂质酰基转移酶进行比对；iv)鉴定所述两个序列间有差别的氨基酸残基；和v)在所述亲本脂质酰基转移酶中修饰根据步骤(iv)鉴定的一个或多个氨基酸残基。合适地，该序列同源性比对可包含下列一个或多个步骤i)选择第一亲本脂质酰基转移酶；ii)鉴定具有所需活性的第二相关的脂质酰基转移酶；iii)将所述第一亲本脂质酰基转移酶和第二相关的脂质酰基转移酶进行比对；iv)鉴定所述两个序列间有差别的氨基酸残基；v)确定根据步骤(iv)选择的一个或多个氨基酸残基是否高度保守(尤其是否是活性位点残基和/或部分GDSx基序和/或部分GANDY基序)；和vi)在所述亲本序列中修饰根据步骤(iv)鉴定的一个或多个氨基酸残基，其不包括根据步骤(v)鉴定的保守区域。合适地，所述第一亲本脂质酰基转移酶可包含下列氨基酸序列中的任一个SEQIDNo34，SEQIDNo3，SEQIDNo4，SEQIDNo5，SEQIDNo6，SEQIDNo7，SEQIDNo8，SEQIDNo19，SEQIDNo10，SEQIDNo11，SEQIDNo12，SEQIDNo13，SEQIDNo14，SEQIDNo1，SEQIDNo15，SEQIDNo25，SEQIDNo26，SEQIDNo27，SEQIDNo28，SEQIDNo29，SEQIDNo30，，SEQIDNo32或SEQIDNo33。合适地，所述第二相关脂质酰基转移酶可包含下列氨基酸序列中的任一个SEQIDNo3，SEQIDNo34，SEQIDNo4，SEQIDNo5，SEQIDNo6，SEQIDNo7，SEQIDNo8，SEQIDNo19，SEQIDNo10，SEQIDNo11，SEQIDNo12，SEQIDNo13，SEQIDNo14，SEQIDNo1，SEQIDNo15，SEQIDNo25，SEQIDNo26，SEQIDNo27，SEQIDNo28，SEQIDNo29，SEQIDNo30，，SEQIDNo32或SEQIDNo33。所述变体酶与所述亲本酶相比较必须包含至少一个氨基酸修饰。在一些实施方案中，所述酶变体与所述亲本酶相比较，可包含至少2个，优选至少3个，优选至少4个，优选至少5个，优选至少6个，优选至少7个，优选至少8个，优选至少9个，优选至少10个氨基酸修饰。当本文提到特异性氨基酸残基时，所述编号是由变体序列与SEQIDNo.34或SEQIDNo.35所示参考序列进行比对而得到的。在一个方面，优选所述变体酶含有下列一个或多个氨基酸取代S3A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，G，Q，R，T，V，W，或Y；和/或L17A，C，D，E，F，G，H，I，K，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或S18A，C，D，E，F，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，T，W，或Y；和/或K22A，C，D，E，F，G，H，I，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或M23A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或Y30A，C，D，E，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，或W；和/或G40A，C，D，E，F，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或N80A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或P81A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或K82A，C，D，E，F，G，H，I，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或N87A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或N88A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或W111A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W或Y；和/或V112A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，W或Y；和/或A114C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或Y117A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，或W；和/或L118A，C，D，E，F，G，H，I，K，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或P156A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或D157A，C，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或G159A，C，D，E，F，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或Q160A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，R，S，T，V，W，或Y；和/或N161A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，MP，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或P162A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或S163A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，T，V，W，或Y；和/或A164C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或R165A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，S，T，V，W，或Y；和/或S166A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，T，V，W，或Y；和/或Q167A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，R，S，T，V，W，或Y；和/或K168A，C，D，E，F，G，H，I，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或V169A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，W，或Y；和/或V170A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，V，W，或Y；和/或E171A，C，D，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或A172C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或Y179A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，或W；和/或H180A，C，D，E，F，G，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或N181A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或Q182A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，R，S，T，V，W，或Y，优选K；和/或M209A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或L210A，C，D，E，F，G，H，I，K，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或R211A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或N215A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或Y226A，C，D，E，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，或W；和/或Y230A，C，D，E，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V或W；和/或K284A，C，D，E，F，G，H，I，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或M285A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或Q289A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，R，S，T，V，W，或Y；和/或V290A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，W，或Y；和/或E309A，C，D，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W，或Y；和/或S310A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，T，V，W，或Y。此外或可替换地可有一个或多个C末端延伸。优选附加的C末端延伸包含一个或多个脂肪族氨基酸，优选非极性氨基酸，更优选I，L，V或G。因此，本发明进一步提供含有下列一个或多个C末端延伸的变体酶318I，318L，318V，318G。当情况是所述亲本主链中的残基不同于来自P10480(SEQIDNo2)的残基时，如通过与P10480和/或1IVN进行同源性比对和/或结构比对所确定的，期望分别用P10480中存在的残基替换所述残基，其中所述残基与P10480(SEQIDNo2)中的下列任何一个或多个氨基酸残基进行对比Ser3，Leu17，Lys22，Met23，Gly40，Asn80，Pro81，Lys82，Asn87，Asn88，Trp111，Val112，Ala114，Tyr117，Leu118，Pro156，Gly159，Gln160，Asn161，Pro162，Ser163，Ala164，Arg165，Ser166，Gln167，Lys168，Val169，Val170，Glu171，Ala172，Tyr179，His180，Asn181，Gln182，Met209，Leu210，Arg211，Asn215，Lys284，Met285，Gln289，Val290，Glu309或Ser310。对于磷脂(例如磷脂酰胆碱(PC))的水解活性降低的变体酶也可具有增加的从磷脂的转移酶活性。从磷脂(例如磷脂酰胆碱(PC))的转移酶活性增加的变体酶也可具有增加的对磷脂的水解活性。合适地，下列的一个或多个位点可与底物结合和相关Leu17；Ala114；Tyr179；His180；Asn181；Met209；Leu210；Arg211；Asn215；Lys284；Met285；Gln289；Val290。1.下列的一个或多个残基的修饰可产生对磷脂的绝对(absolute)转移酶活性增加的变体酶S3，D157，S310，E309，Y179，N215，K22，Q289，M23，H180，M209，L210，R211，P81，V112，N80，L82，N88；N87可提供从磷脂的转移酶活性提高的变体酶的具体修饰可选自下列的一种或多种S3A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，T，V，W或Y；优选N，E，K，R，A，P或M，最优选S3AD157A，C，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选D157S，R，E，N，G，T，V，Q，KorCS310A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，T，V，W或Y；优选S310T-318EE309A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，T，V,W或Y；优选E309R，E，L，R或AY179A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，V或W；优选Y179D，T，E，R，N，V，K，Q或S，更优选E，R，N，V，K或QN215A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选N215S，L，R或YK22A，C，D，E，F，G，H，I，L，M，N，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选K22E，R，C或AQ289A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，R，S，T，V，W或Y；优选Q289R，E，G，P或NM23A，C，D，E，F，G，H，I，K，LN，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选M23K，Q，L，G，T或SH180A，C，D，E，F，G，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选H180Q，R或KM209A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，N，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选M209Q，S，R，A，N，Y，E，V或LL210A，C，D，E，F，G，H，I，K，M，N，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选L210R，A，V，S，T，I，W或MR211A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，S，T，V，W或Y；优选R211TP81A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，Q，R，S，T，V，W或Y；优选P81GV112A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，N，P，Q，R，S，T，W或Y；优选V112CN80A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选N80R，G，N，D，P，T，E，V，A或GL82A，C，D，E，F，G，H，I，M，N，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选L82N，S或EN88A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，P，Q，R，S，T，V，W或Y；优选N88CN87A，C，D，E，F，G，H，I，K，L，M，R，Q，R，S，T，V，W或Y；优选N87M或G下列一个或多个残基的修饰产生对磷脂的绝对转移酶活性增加的变体酶S3N，R，A，GM23K，Q，L，G，T，SH180RL82GY179E，R，N，V，K或QE309R，S，L或A一种优选的修饰是N80D。特别是当使用所述参考序列SEQIDNo35时的情况。因此在本发明的一个优选实施方案中，本发明的脂质酰基转移酶含有SEQIDNo35。如上所述，当本文提到具体的氨基酸残基时，所述编号是由变体序列与SEQIDNo.34或SEQIDNo.35所示参考序列进行比对而得到的。更优选地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可以是含有SEQIDNo.16所示氨基酸序列(图10)，或与SEQIDNo.16具有75％或更多，优选85％或更多，更优选90％或更多，还更优选95％或更多，还更优选98％或更多，或还更优选99％或更多的同一性的氨基酸序列的脂质酰基转移酶。该酶可以被认为是变体酶。为免除怀疑，除非另有说明，当一个特定氨基酸被教导位于一个特定位点，例如L118时，这是指SEQIDNo34中位于残基数118的特定氨基酸。但是，在不同亲本酶中位于118位的氨基酸残基可以不同于亮氨酸。因此，当教导取代位于118残基的氨基酸时，尽管可以参照L118，但是本领域技术人员很容易理解当所述亲本酶不同于SEQIDNo.34所示时，所述被取代的氨基酸可以不是亮氨酸。因此，当取代亲本酶中的氨基酸序列时，所述亲本酶不是具有SEQIDNo.34所示氨基酸序列的酶，新的(取代)氨基酸可以与SEQIDNo.34中教导的氨基酸相同。这可以是这样的情况，例如，假定118残基的氨基酸不是亮氨酸因而不同于SEQIDNo.34中位于118残基的氨基酸。换句话说，例如在118残基，如果亲本酶在该位置具有不同于亮氨酸的氨基酸，则根据本发明，该氨基酸可以用亮氨酸代替。为了本发明的目的，同一性的程度基于相同序列元件的数目。依照本发明，同一性程度可通过本领域已知的计算机程序合适地测定，所述程序诸如GCG程序包中提供的GAP(ProgramManualfortheWisconsinPackage，Version8，August1994，GeneticsComputerGroup，575ScienceDrive，Madison，Wisconsin，US53711)(Needleman&Wunsch(1970)，J.ofMolecularBiology48，443-45)，使用下列设置进行多肽序列比较GAP生成罚分3.0和GAP延伸罚分0.1。合适地，关于氨基酸序列的同一性程度是在至少20个连续氨基酸，优选在至少30个连续的氨基酸，优选在至少40个连续的氨基酸，优选在至少50个连续的氨基酸，优选在至少60个连续的氨基酸中测定的。合适地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可从，优选从来自下列一个或多个属的生物体中获得气单胞菌属(Aeromonas)、链霉菌属(Streptomyces)、酵母菌属(Saccharomyces)、乳球菌属(Lactococcus)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、链球菌属(Streptococcus)、乳杆菌属(Lactobacillus)、脱亚硫酸菌属(Desulfitobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、弧菌科(Vibrionaceae)、木杆菌属(Xylella)、硫化叶菌属(Sulfolobus)、曲霉属(Aspergillus)、裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)、李斯忒氏菌属(Listeria)、奈瑟氏球菌属(Neisseria)、Mesorhizobium、Ralstonia、黄单胞菌属(Xanthomonas)、假丝酵母属(Candida)、Thermobifida和棒杆菌属(Corynebacterium)。合适地，用于本发明方法和用途的脂质酰基转移酶可从，优选从下列一种或多种生物体中获得嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)、杀鲑气单胞菌(Aeromonassalmonicida)、天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)、龟裂链霉菌(Streptomycesrimosus)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、酿脓链球菌(Streptococcuspyogenes)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、嗜热链球菌(Streptococcusthermophilus)、瑞士乳杆菌(Lactobacillushelveticus)、脱卤脱亚硫酸菌(Desulfitobacteriumdehalogenans)、芽孢杆菌(Bacillussp)、空肠弯曲杆菌(Campylobacterjejuni)、弧菌科(Vibrionaceae)、苛养木杆菌(Xylellafastidiosa)、硫磺矿硫化叶菌(Sulfolobussolfataricus)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、土曲霉(Aspergillusterreus)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)无害李斯忒氏菌(Listeriainnocua)、单核细胞增生李斯忒氏菌(Listeriamonocutogenes)、脑膜炎奈瑟氏球菌(Neisseriameningitidis)、Mesorhizobiumloti、Ralstoniasolanacearum、野油菜黄单胞菌(Xanthomonascampestris)、地毯草黄单胞菌(Xanthomonasaxonopodis)、近平滑假丝酵母(Candidaparapsilosis)、Thermobifidafusca和Corynebacteriumefficiens。在一方面，优选地，本发明的脂质酰基转移酶可从，优选从一种或多种嗜水气单胞菌或杀鲑气单胞菌获得。在一个实施方案中，合适地，固醇和/或甾烷醇可以包括以下一种或多种结构特征i)3-β羟基或3-α羟基；和/或ii)顺式位置的A:B环或反式位置的A:B环或者C5-C6是不饱和的。适宜的固醇酰基受体包括胆固醇和植物甾醇(phytosterol)，例如α-谷甾醇(sitosterol)、β-谷甾醇、豆甾醇(stigmasterol)、麦角固醇(ergosterol)、油菜甾醇(campesterol)、5，6-二氢固醇、菜子固醇(brassicasterol)、α-菠菜甾醇(spinasterol)、β-菠菜甾醇、γ-菠菜甾醇、δ-菠菜甾醇、岩藻甾醇(fucosterol)、dimosterol、子囊甾醇(ascosterol)、serebisterol、表甾醇(episterol)、anasterol、α-苯基丁酰胺(hyposterol)、菠菜甾醇(chondrillasterol)、链甾醇(desmosterol)、海绵甾醇(chalinosterol)、多孔甾醇(poriferasterol)、γ-谷甾醇(clionasterol)、固醇苷(sterolglycoside)、生育酚(tocopherol)、生育三烯酚(tocotrienol)和其它天然或合成的同分异构形式和衍生物。有利地，在一个实施方案中，所述固醇酰基受体为生育酚。合适地，所述生育酚可以是一种或多种γ，Δ，β或d-α生育酚一包括例如琥珀酸维生素E(d-αtocopherolacidsuccinate)。在一个实施方案中固醇酰基受体优选是α-生育酚。在一个实施方案中，本发明的方法优选包括向所述油中加入生育酚，优选α-生育酚的步骤。在一个方面，优选地，所述固醇酰基受体是胆固醇。在一个方面，优选地，所述固醇和/或甾烷醇酰基受体是除胆固醇之外的固醇和/或甾烷醇。在本发明的一个方面，合适地，一种以上固醇和/或甾烷醇可以作为酰基受体，合适地，两种以上固醇和/或甾烷醇可以作为酰基受体。换言之，在本发明的一个方面，合适地，可以产生一种以上固醇酯和/或甾烷醇脂。合适地，当胆固醇是酰基受体时，一种或多种其他固醇和一种或多种甾烷醇也可作为酰基受体。因此，在一个方面，本发明提供了生育酚酯与至少一种其它固醇酯或甾烷醇酯组合的原位产生方法。换言之，在本发明的一些方面，脂质酰基转移酶可以将酰基从脂质上转移到生育酚与至少一种其它固醇和/或至少一种甾烷醇。在一些方面，按照本发明方法制备的油可用于降低患心血管疾病的风险。在一个方面，按照本发明方法制备的油可用于降低血清胆固醇和/或降低低密度脂蛋白。血清胆固醇和低密度脂蛋白均与人类某些疾病有关，诸如动脉粥样硬化和/或心脏病。因此，可以设想，按照本发明制备的油可用于降低患这些疾病的风险。在又一个方面，本发明提供了根据本发明的食用油用于治疗和/或预防心血管疾病的用途。因此，在一个方面，本发明提供了根据本发明的食用油用于治疗和/或预防动脉粥样硬化和/或心脏病的用途。在又一个方面，本发明提供了一种含有本发明食用油的药剂。在又一个方面，本发明提供了一种治疗和/或预防人类和动物患者疾病的方法，所述方法包括给予所述患者有效量的本发明的食用油。合适地，固醇酰基受体可为天然存在于食用油或植物油中的固醇酰基受体。可选地或此外，所述固醇酰基受体可为添加到食用油或植物油中的固醇酰基受体。在将固醇和/或甾烷醇添加到所述食用油中的情况下，可在添加本发明的脂质酰基转移酶之前，同时，和/或之后添加固醇和/或甾烷醇。合适地，本发明可包括在添加本发明的酶之前或者同时将外源性固醇/甾烷醇，尤其是植物固醇/植物甾烷醇，添加到食用油或植物油中。在一些方面，在添加本发明的脂质酰基转移酶之前或同时，所述食用油中存在的一种或多种的固醇可能被转化成一种或多种甾烷醇。任何将固醇转化成甾烷醇的适宜方法都可使用，例如，可以通过化学氢化作用进行所述转化。这种转化可在本发明的脂质酰基转移酶添加之前或本发明的脂质酰基转移酶添加的同时进行。将固醇转化成甾烷醇的合适的酶在WO00/061771中教导。合适地，可将本发明应用于在食用油中原位产生植物甾烷醇酯。植物甾烷醇酯具有增加的透过类脂膜的溶解性，生物利用度，和增强的健康益处(参见例如WO92/99640)。本发明的一个优点是在食用油脱胶过程中在其中产生了固醇和/或甾烷醇酯。另一优点是在没有提高或没有基本上提高食用油的游离脂肪酸含量的情况下将酶脱胶。游离脂肪酸的产生可对食用油有害。优选地，本发明的方法导致食用油的脱胶，其中降低和/或消除了游离脂肪酸的累积。不希望被理论束缚，根据本发明，从脂质除去的脂肪酸通过脂质酰基转移酶转移到酰基受体，例如固醇和/或甾烷醇。因此，在食品中游离脂肪酸的总水平不增加，或仅增加不显著的程度。这与将磷脂酶，如LecitaseUltraTM用于食用油的酶脱胶的情况形成强烈对比。特别是利用这种磷脂酶会使食用油中游离脂肪酸的量增加，这可为有害的。如果使用磷脂酶A，如LecitaseUltraTM代替本发明的脂质酰基转移酶，那么与已累积的游离脂肪酸的量相比，根据本发明，游离脂肪酸的累积被降低和/或消除。本发明的脂质酰基转移酶可以适用于植物油或食用油的酶脱胶。在植物油或食用油的加工过程中，用本发明的脂质酰基转移酶处理所述食用油或植物油，以便水解较大部分的磷脂。优选地，将脂酰基从极性脂质转移到酰基受体。由于水解了大部分(即超过50％)磷脂，脱胶处理通常导致食用油中的极性脂质，尤其是磷脂含量的降低。通常，将含有水解的磷脂的水相与油分离。合适地，所述食用油或植物油起始(用本发明所述酶预处理)可具有50-250ppm的含磷量。如本领域技术人员公知本文所用术语“脱胶”是指通过将磷脂(例如卵磷脂，磷脂和滞留油(occludedoil))转化为能水合的磷脂而进行的油的精炼。脱胶后的油流动性更强，因此比没有脱胶的油具有更好的操作性质。这里使用的术语“转移酶”与术语“脂质酰基转移酶”可以互换。合适地，如本文定义的脂质酰基转移酶催化下列一种或多种反应相互酯化作用(interesterification)，转酯基作用(transesterification)，醇解作用，水解作用。术语“相互酯化作用”指的是酰基在脂质供体与脂质受体之间的酶催化转移，其中的脂质供体不是游离的酰基。本文术语“转酯基作用”指的是酰基从脂质供体(游离脂肪酸除外)酶催化转移到酰基受体(水除外)。如本文使用的术语“醇解作用”指的是通过与醇ROH的反应酸衍生物的共价键的酶裂解，使得产物中的一种与醇的H结合而另一种产物与醇的OR基团结合。如本文使用的术语“醇”指的是包含羟基的烃基化合物。如本文使用的术语“水解作用”指的是酰基从脂质到水分子OH基团的酶催化转移。如本文使用的术语“不增加或基本上不增加游离脂肪酸”指的是本发明的脂质酰基转移酶优选具有100％转移酶活性(即将100％的酰基从酰基供体转移到酰基受体，无水解活性)；但是此酶可将不到100％的存在于脂质酰基供体中存在的酰基转移到酰基受体。在这种情况下，优选的酰基转移酶活性占总酶活性的至少5％，更优选至少10％，更优选至少20％，更优选至少30％，更优选至少40％，更优选至少50％，更优选至少60％，更优选至少70％，更优选至少80％，更优选至少90％，并且更优选至少98％。所述％转移酶活性(即转移酶活性占总酶活性的百分比)可通过下列方案测定适用于本发明方法的酶优选具有在下文教导的标准磷脂酶活性试验中的磷脂酶活性。测定磷脂酶活性(磷脂酶活性试验(PLU-7))底物在0.05MHEPES缓冲液pH7中分散0.6％L-α磷脂酰胆碱95％植物(Avanti#_441601)，0.4％Triton-X100(SigmaX-100)和5mMCaCl2。步骤将400μL底物加到1.5mlEppendorf管，并置于Eppendorf热混合器(thermomixer)，37℃、5分钟。在时间t＝0时，加入50μL酶溶液。也对以水代替酶的空白进行分析。以10×100rpm在Eppendorf热混合器上于37℃将所述样品混合10分钟。在时间t＝10分钟时，将Eppendorf管置于另一热混合器中，在99℃、10分钟以结束反应。使用来自WAKOGmbH的NEFAC试剂盒分析样品中的游离脂肪酸。在试验条件下，在pH7的酶活性PLU-7以每分钟产生的微摩尔脂肪酸来计算。更优选脂质酰基转移酶还具有如下面方案所定义的转移酶活性测定％转移酶活性的规程酶促反应后，可用2∶1的CHCl3∶CH3OH提取已添加本发明的脂质酰基转移酶的食用油，分离包含脂质物质的有机相，并可根据在下文详述的步骤通过GLC和HPLC分析。通过GLC和HPLC的分析，确定游离脂肪酸和一种或多种固醇/甾烷醇酯类的量。用同种方法分析不添加本发明的酶的对照食用油。计算从GLC和HPLC分析的结果可以计算出游离脂肪酸和固醇/甾烷醇酯的增加。Δ％脂肪酸＝％脂肪酸(酶)-％脂肪酸(对照)；Mv脂肪酸＝脂肪酸的平均分子量；A＝Δ％固醇酯/Mv固醇酯(其中Δ％固醇酯＝％固醇/甾烷醇酯(酶)-％固醇/甾烷醇酯(对照)，而Mv固醇酯＝固醇/甾烷醇酯的平均分子量)；转移酶活性作为总酶活性的百分率计算如果食用油中的游离脂肪酸增加，优选它们基本不增加，即达不到显著水平。我们的意思是游离脂肪酸的增加不会负面影响食用油质量。用于酰基转移酶活性试验的食用油优选豆油(soyabeanoil)，所述豆油使用实施例3的方法补充植物甾醇(1％)和磷脂酰胆碱(2％)油。对于该试验所用的酶剂量优选0.2PLU-7/g油，更优选0.08PLU-7/g油。该油之中存在的磷脂水平和/或固醇的％转化率优选在4小时后，更优选在20小时后测定。在本发明的一些方面，本文使用的术语“基本不增加游离脂肪酸”意思是用本发明脂质酰基转移酶处理的食用油中游离脂肪酸的量少于在已使用除本发明脂质酰基转移酶以外的酶时食用油中产生的游离脂肪酸的量，例如与已使用常规的磷脂酶如LecitaseUltraTM(NovozymesA/S，丹麦)时产生的游离脂肪酸的量进行比较。此外，或代替地，可使用下列名称为“鉴定用于本发明脂质酰基转移酶的规程”的试验，来评价油(上述)中的％转移酶活性，以鉴定最优选用于本发明方法的脂质酰基转移酶。鉴定脂质酰基转移酶的规程根据本发明的脂质酰基转移酶使得i)去除豆油中的磷脂，所述豆油使用实施例3中教导的方法补充植物甾醇(1％)和磷脂酰胆碱(2％)油。和/或ii)当使用实施例3中教导的方法时将加入的固醇转化为固醇-酯(％转化)。可以使用实施例5中教导的GLC方