中和催乳素受体抗体及其治疗用途制作方法_C·奥托专利（催乳素,受体,抗体）-早鸽网

中和催乳素受体抗体及其治疗用途制作方法

专利名称

中和催乳素受体抗体及其治疗用途制作方法
发明者

C·奥托, S·沃尔夫, C·弗莱贝格, A·哈尔恩加, S·格雷文, M·特劳特魏茵, S·布鲁德, A·艾克, A·威尔恩
公开日

2013年1月16日
申请日期

2010年11月18日
优先权日

2009年12月10日
申请人

拜耳知识产权有限责任公司
文档编号

A61K39/395GK102884082SQ201080063269
关键字

催乳素受体抗体用途治疗
权利要求

1.抗体或抗原结合片段，其中所述抗体拮抗催乳素受体介导的信号传导2.如权利要求I所述的抗体，其结合至所述催乳素受体及其人多态变体的胞外域的表位，其中所述催乳素受体的胞外域的氨基酸序列对应SEQID NO 70，并且核酸序列对应SEQID NO713.如权利要求I和/或2所述的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或所述抗原结合片段与表5的抗体006-H08或其确定的成熟变体竞争4.如权利要求3所述的抗体或抗原结合片段， a.其中可变重链区和轻链区的氨基酸序列，对于可变重链结构域，与SEQID NO34至少60%、更优选70%、更优选80%、或90%、或甚至更优选95%相同，并且对于可变轻链结构域，与SEQ ID NO40至少60%、更优选70%、更优选80%、或90%、或甚至更优选95%相同；或者 b.其中对于抗体006-H08的成熟形式，可变重链结构域和轻链结构域的氨基酸序列与其至少60%、更优选70%、更优选80%、或90%、或甚至更优选95%相同；或者 c.其中⑶R的氨基酸序列，对于重链结构域，与SEQID NO 1、7和13至少60%、更优选70%、更优选80%、更优选90%、或甚至更优选95%相同，并且对于可变轻链结构域，与SEQ IDNO 18、24和29至少60%、更优选70%、更优选80%、更优选90%、或甚至更优选95%相同5.包含权利要求1-4的抗体的CDR的抗体或抗原结合片段，其中 a.可变重链包含对应于SEQID NO 1、7和13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO 18、24 和 29 的 CDR 序列；或者 b.可变重链包含对应于SEQID NO I、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 78、24、90 的 CDR 序列；或者 c.可变重链包含对应于SEQID NO 1、75、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO82、24、91 的 CDR 序列；或者 d.可变重链包含对应于SEQID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 82、24、29 的 CDR 序列；或者 e.可变重链包含对应于SEQID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 86、24、29 的 CDR 序列；或者 f.可变重链包含对应于SEQID NO I、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID N087、24、100 的 CDR 序列；或者 g.可变重链包含对应于SEQID NO 1、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 87、24、92 的 CDR 序列；或者 h.可变重链包含对应于SEQID NO 1、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 89、24、93 的 CDR 序列；或者 i.可变重链包含对应于SEQID NO 1、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID N079、24、101 的 CDR 序列；或者 j.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、76、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 89、24、90 的 CDR 序列；或者 k.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID N018、24、100 的 CDR 序列；或者 I.可变重链包含对应于SEQ ID NO I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID N018、24、97 的 CDR 序列；或者 m.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID N018、24、98 的 CDR 序列；或者 η.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 83、24、99 的 CDR 序列；或者 ο.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID Ν018、24、96 的 CDR 序列；或者 P.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID Ν018、24、94 的 CDR 序列；或者 q.可变重链包含对应于SEQ ID NO I、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 88、24、90 的 CDR 序列；或者 r.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO81、24、95 的 CDR 序列；或者 s.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、75、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO18、24、29 的 CDR 序列；或者 t.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、77、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 18、24、29 的 CDR 序列；或者 u.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 80、24、29 的 CDR 序列；或者 V.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 85、24、29 的 CDR 序列；或者 w.可变重链包含对应于SEQ ID NO 1、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQID NO 84、24、29 的 CDR 序列6.如权利要求1-5所述的抗体或抗原结合片段，其中抗体 a.006-H08包含对应于SEQ ID NO46的核酸序列和SEQ ID NO34的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO52的核酸序列和SEQ ID NO40的氨基酸序列的可变轻链结构域； b.006-H08-12-2包含对应于SEQ ID NO331的核酸序列和SEQ ID NO353的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 165的核酸序列和SEQ ID NO 143的氨基酸序列的可变轻链结构域； c.006-H08-13-2包含对应于SEQ ID NO332的核酸序列和SEQ ID NO354的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 166的核酸序列和SEQ ID NO 144的氨基酸序列的可变轻链结构域； d.006-H08-13-6-1包含对应于SEQ ID NO333的核酸序列和SEQ ID NO355的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 167的核酸序列和SEQ ID NO 145的氨基酸序列的可变轻链结构域； e.006-H08-14-6-0包含对应于SEQ ID NO 334的核酸序列和SEQ ID NO 356的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 168的核酸序列和SEQ ID NO 146的氨基酸序列的可变轻链结构域；f.006-H08-15-5包含对应于SEQ ID NO335的核酸序列和SEQID NO357的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 169的核酸序列和SEQ ID NO 147的氨基酸序列的可变轻链结构域； g.006-H08-19-1包含对应于SEQ ID NO336的核酸序列和SEQ ID N0358的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 170的核酸序列和SEQ ID NO 148的氨基酸序列的可变轻链结构域； h.006-H08-29-1包含对应于SEQ ID NO 337的核酸序列和SEQ ID NO 359的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 171的核酸序列和SEQ ID NO 149的氨基酸序列的可变轻链结构域； i.006-H08-32-2包含对应于SEQ ID NO338的核酸序列和SEQ ID N0360的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 172的核酸序列和SEQ ID NO 150的氨基酸序列的可变轻链结构域； j. 006-H08-33-0包含对应于SEQ ID NO339的核酸序列和SEQ ID NO361的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 173的核酸序列和SEQ ID NO 151的氨基酸序列的可变轻链结构域； k. 006-H08-33-16-0包含对应于SEQ ID NO340的核酸序列和SEQ ID NO362的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO174的核酸序列和SEQ ID NO 152的氨基酸序列的可变轻链结构域； I. 006-H08-35-17-1包含对应于SEQ ID NO341的核酸序列和SEQ ID NO363的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 175的核酸序列和SEQ ID NO 153的氨基酸序列的可变轻链结构域； m. 006-H08-35-17-4包含对应于SEQ ID NO342的核酸序列和SEQ ID NO364的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 176的核酸序列和SEQ ID NO 154的氨基酸序列的可变轻链结构域； η. 006-H08-35-1包含对应于SEQ ID NO 343的核酸序列和SEQ ID NO 365的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 177的核酸序列和SEQ ID NO 155的氨基酸序列的可变轻链结构域； ο. 006-Η08-36-17-0包含对应于SEQ ID NO344的核酸序列和SEQ ID Ν0366的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 178的核酸序列和SEQ ID NO 156的氨基酸序列的可变轻链结构域； p. 006-Η08-37-19-0包含对应于SEQ ID NO345的核酸序列和SEQ ID NO367的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 179的核酸序列和SEQ ID NO 157的氨基酸序列的可变轻链结构域； q. 006-Η08-39-7包含对应于SEQ ID NO 346的核酸序列和SEQ ID NO 368的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 180的核酸序列和SEQ ID NO 158的氨基酸序列的可变轻链结构域； r. 006-H08-48-5包含对应于SEQ ID NO 347的核酸序列和SEQ ID NO 369的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 181的核酸序列和SEQ ID NO 159的氨基酸序列的可变轻链结构域；s. 006-H08-53-27-0包含对应于SEQ ID NO348的核酸序列和SEQ ID NO370的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 182的核酸序列和SEQ ID NO 160的氨基酸序列的可变轻链结构域； t. 006-H08-59-30-0包含对应于SEQ ID NO349的核酸序列和SEQ ID NO371的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 183的核酸序列和SEQ ID NO 161的氨基酸序列的可变轻链结构域； u.006-H08-63-32-4包含对应于SEQ ID NO 350的核酸序列和SEQ ID NO 372的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 184的核酸序列和SEQ ID NO 162的氨基酸序列的可变轻链结构域； V. 006-H08-65-33-2包含对应于SEQ ID NO351的核酸序列和SEQ ID NO373的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 185的核酸序列和SEQ ID NO 163的氨基酸序列的可变轻链结构域； w. 006-H08-68-35-2包含对应于SEQ ID NO352的核酸序列和SEQ ID NO374的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO 186的核酸序列和SEQ ID NO 164的氨基酸序列的可变轻链结构域7.如权利要求3所述的抗体或抗原结合片段，其中 a.所述抗体包含对应于SEQID ΝΟ1、7、13、18、24、29的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 b.所述抗体包含对应于SEQID N0l、74、13、78、24、90的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 c.所述抗体包含对应于SEQID ΝΟ1、75、13、82、24、91的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 d.所述抗体包含对应于SEQID ΝΟ1、7、13、82、24、29的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 e.所述抗体包含对应于SEQID ΝΟ1、7、13、86、24、29的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 f.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、74、13、87、24、100 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者 g.所述抗体包含对应于SEQID ΝΟ1、74、13、87、24、92的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 h.所述抗体包含对应于SEQID ΝΟ1、74、13、89、24、93的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 i.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、74、13、79、24、101 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者 j.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、76、13、89、24、90的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 k.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、7、13、18、24、100的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 I.所述抗体包含对应于SEQ ID ΝΟ1、7、13、18、24、97的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 m.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、7、13、18、24、98的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 η.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、74、13、83、24、99的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 ο.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、7、13、18、24、96的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 P.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、7、13、18、24、94的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 q.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、74、13、88、24、90的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 r.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、74、13、81、24、95的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 s.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、75、13、18、24、29的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 t.所述抗体包含对应于SEQ ID勵1、77、13、18、24、29的0)1 中的1、2、3、4、5或6个;或者 u.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、7、13、80、24、29的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 V.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、7、13、85、24、29的CDR中的1、2、3、4、5或6个;或者 w.所述抗体包含对应于SEQ ID N0l、7、13、84、24、29的CDR中的1、2、3、4、5或6个8.如权利要求1-7所述的抗体，其中所述抗体由抗原结合区组成，所述抗原结合区特异性结合至PRLR的一个或多个区域，或者对PRLR的一个或多个区域具有高亲和力，PRLR的氨基酸序列如SEQ ID N070和SEQID NO70的人多态变体的氨基酸位置1-210所示，其中亲和力为至少ΙΟΟηΜ，优选低于约ΙΟΟηΜ，更优选低于约30nM，甚至更优选具有低于约IOnM的亲和力，或者甚至更优选具有低于InM的亲和力9.如权利要求1-8所述的抗体，其中所述重链恒定区为修饰或未修饰的IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG410.一种分离的核酸序列，其编码权利要求1-9中任一项所述的抗体或抗原结合片段11.如权利要求10所述的分离的核酸序列,其中所述核酸序列如表5所示12.表达载体,其包含权利要求10和11的核酸序列13.宿主细胞，其包含权利要求12的载体或者权利要求10和11的核酸分子，其中所述宿主细胞可以是高等真核宿主细胞如哺乳动物细胞，低等真核宿主细胞如酵母细胞，并且可以是原核细胞如细菌细胞14.一种利用权利要求13的宿主细胞产生抗体或抗原结合片段的方法，所述方法包括在合适的条件下培养权利要求的宿主细胞并回收所述抗体15.通过权利要求14的方法产生的抗体或抗原结合片段16.如权利要求1-9中任一项所述的抗体或抗原结合片段，其纯化至至少95重量％同质性17.作为药物的权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段18.—种药物组合物，其包含权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段以及药学可接受的载体，所述载体包含赋形剂和助剂19.包含权利要求1-9的抗体的试剂盒，其包含治疗有效量的抗体006-H08或其成熟变体，包装在容器中，所述试剂盒任选包含第二治疗剂，并且还包含附着至所述容器或者与所述容器一起包装的标签，所述标签描述所述容器的内容物并提供使用所述容器的内容物的适应症和/或说明书以治疗子宫内膜异位症、子宫腺肌病、良性乳房疾病和乳腺痛、泌乳抑制、高催乳素血症性和正常催乳素血症性脱发、良性前列腺增生、纤维瘤，或者用于非激素女性避孕，或者治疗联合激素疗法(即雌激素加上黄体酮疗法)下的妇女以抑制乳腺上皮细胞增殖20.用于治疗和/或预防子宫内膜异位症和子宫腺肌病(宫内子宫内膜异位症)的PRLR中和抗体或抗原结合片段21.如权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段，其用于治疗和/或预防子宫内膜异位症和子宫腺肌病(宫内子宫内膜异位症)22.用于女性避孕的PRLR中和抗体或抗原结合片段23.如权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段，其用于女性避孕24.用于治疗良性乳房疾病和乳腺痛的PRLR中和抗体或抗原结合片段25.如权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段，其用于治疗良性乳房疾病和乳腺痛26.用于抑制泌乳的PRLR中和抗体或抗原结合片段27.如权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段，其用于抑制泌乳28.用于治疗良性前列腺增生的PRLR中和抗体或抗原结合片段29.如权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段，其用于治疗良性前列腺增生30.用于治疗高催乳素血症性和正常催乳素血症性脱发的PRLR中和抗体或抗原结合片段31.如权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段，其用于治疗高催乳素血症性和正常催乳素血症性脱发32.用于治疗接受联合激素疗法的妇女的PRLR中和抗体或抗原结合片段33.如权利要求1-9所述的抗体或抗原结合片段，其用于治疗接受联合激素疗法的妇女34.权利要求32和/或33所述的抗体或抗原结合片段的用途，其中所述联合激素疗法为雌激素加上黄体酮疗法35.权利要求1-9所述的抗体或者包含权利要求1-9所述的PRLR抗体或抗原结合片段的权利要求18的药物组合物形式的抗体用于肠胃外给药的用途，其中肠胃外递送的方法包括体表、动脉内、肌肉内、皮下、髓内、鞘内、心室内、静脉内、腹腔内、子宫内、阴道或鼻内给药36.如权利要求18所述的药物组合物，其包含权利要求1-9所述的PRLR抗体或抗原结合片段，与至少一种其他物质组合
技术领域

本发明涉及催乳素受体抗体006-H08，并且提供重组抗原结合区以及包含此类抗原结合区的抗体和功能片段，其特异性结合并中和催乳素受体；编码前述抗体的核酸序列；包含所述核酸序列的载体；包含它们的药物组合物以及它们在治疗或预防良性疾病和适应症中的用途，所述良性疾病和适应症受益于催乳素受体介导的信号传导的抑制，例如子宫内膜异位症、子宫腺肌病、非激素女性避孕、良性乳房疾病、乳腺痛、泌乳抑制、良性前列腺增生、纤维瘤以及高催乳素血症性和正常催乳素血症性脱发；以及在联合激素疗法中协同治疗以抑制乳腺上皮细胞增殖
背景技术

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法律状态

专利名称：中和催乳素受体抗体及其治疗用途的制作方法对治疗各种良性疾病和适应症以及预防联合(即雌激素加上黄体酮)激素疗法中的乳腺上皮细胞增殖存在未满足的医疗需求，所述良性疾病和适应症例如子宫内膜异位症、子宫腺肌病、非激素女性避孕、良性乳房疾病、乳腺痛、泌乳抑制、良性前列腺增生、纤维瘤、高催乳素血症性和正常催乳素血症性脱发。催乳素(PRL)是包含199个氨基酸的多肽激素。PRL属于生长激素(GH)，多肽激素的胎盘催乳激素(PL)家族，并且在垂体的催乳激素细胞以及几种垂体外组织如淋巴细胞、乳腺上皮细胞、子宫肌层和前列腺中合成。两种不同启动子调控垂体和垂体外PRL合成(BioEssays 28:1 05 1-1055,2006)。PRL结合至PRL受体(PRLR)，PRL受体是属于I类细胞因子受体超家族的单次跨膜受体(Endocrine Reviews 19:225-268,1998)。PRLR以三种不同同种型存在，即可以通过它们的胞质尾区长度区分的短、长和中间形式。当配体结合时，顺序过程导致PRLR活化。PRL通过其结合位点I与一个PRLR分子相互作用，然后通过其结合位点2吸引第二个受体分子，导致PRLR的活性二聚体。PRLR 二聚化导致JAK/STAT (詹纳斯激酶/信号转导及转录激活蛋白)途径的优势激活。当受体二聚化时，JAK(主要是JAK2)与该受体关联、磷酸根转移并互相激活。此外，PRLR还被磷酸化，并且可以结合至包含SH2-结构域的蛋白如STAT0受体结合的STAT随后磷酸化，从该受体解离并易位至细胞核，在那里它们刺激靶基因的转录。此外，已描述通过PRLR激活Ras-Raf-MAPK途径以及激活胞质src激酶(综述见 Endocrine Reviews 19:225-268,1998)。PRLR介导的信号传导在各种过程中起作用，例如乳腺发育、泌乳、生殖、乳腺和前列腺肿瘤生长、自身免疫性疾病、一般生长和代谢以及免疫调节(Endocrine Reviews19:225-268，1998;Annu. Rev. Physiol. 64:47-67，2002)。目前，完全干扰PRLR介导的信号传导是不可能的。干扰PRLR介导的信号传导的唯一方法是通过使用溴麦角环肽和其他多巴胺受体2激动剂来抑制垂体PRL分泌(NatureClinical Practice Endocrinology and Metabolism 2 (10) : 571-581，2006)。然而,这些物质不抑制垂体外PRL合成，垂体外PRL合成可以成功地补偿垂体PRL合成的抑制，导致几乎不受影响的PRLR介导的信号传导(Endocrine Reviews 19:225-268,1998)。因此，多巴胺2型受体激动剂无益于患有乳腺癌或者自身免疫性疾病如系统性狼疮或类风湿性关节炎的患者并不令人惊讶(Breast Cancer Res. Treat. 14:289-29，1989; Lupus7:414-419，1998)，虽然这些疾病涉及催乳素。多巴胺受体激动剂不阻断乳腺癌细胞或淋巴细胞中的局部催乳素合成，所述合成分别在乳腺癌或自身免疫性疾病中起关键作用。
尽管上文提到尝试提供方法用于治疗或预防良性疾病和适应症如子宫内膜异位症、子宫腺肌病、非激素女性避孕、良性乳房疾病和乳腺痛、泌乳抑制、良性前列腺增生、纤维瘤、高催乳素血症性和正常催乳素血症性脱发，以及用于在联合激素疗法中协同治疗以防止乳腺上皮细胞增殖，仍然没有化合物可用于满足该需要。因此本发明的目的是通过提供化合物来解决该问题，所述化合物是这些良性疾病和适应症的治疗剂。现在已鉴别新抗体，其为PRLR特异性的，对PRLR具有高亲和力，以这种方式中和 PRLR介导的信号传导，并且可以将治疗益处递送至个体。通过中和PRLR抗体阻断PRLR激活导致PRLR介导的信号传导的完全抑制。相比之下，多巴胺受体激动剂仅可以干扰应答升高的垂体催乳素分泌而增强的PRLR介导的信号传导，但是不可以干扰由于激活PRLR突变或者由于局部升高的催乳素生成而增强的PRLR介导的信号传导。因此，通过提供抗体006-H08及其抗原结合片段或其变体用于治疗上文提到的良性疾病和适应症来解决该问题，所述抗体006-H08及其抗原结合片段或其变体以高亲和力结合至PRLR，有效中和PRLR介导的信号传导，并且优选与来自其他物种如猕猴(Macaccamulatta)和食蟹猴(Macacca fascicularis)、小家鼠(Mus musculus)或褐家鼠(Rattusnorvegicus)的 PRLR 交叉反应。一些PRLR抗体已描述于申请W02008/022295 (Novartis)和美国专利7，422，899 (Biogen)。本发明基于新抗体的发现，所述新抗体是PRLR特异性的，对PRLR具有高亲和力，以这种方式中和PRLR介导的信号传导，并且可以将治疗益处递送至个体(新抗体的序列如SEQ ID N0:34、40、46和52)。本发明的抗体可以用于本文中更全面描述的许多情况，所述抗体可以是人或人源化或嵌合或人工程化的。因此，本发明的目的是抗体或抗原结合片段，由此所述抗体拮抗催乳素受体介导的信号传导。新抗体“ 002-H06 ”、“ 002-H08 ”、“ 006-H07 ”、“ 001-E06 ”、“ 005-C04 ” 是相应申请的主题。在小鼠疾病模型中体内表征这些抗体仅对表现出与小鼠催乳素受体的交叉反应性的抗体是可能的。仅在相应申请中公开的抗体005-C04表现出足够的与小鼠催乳素受体的交叉反应性，因此是可以用于小鼠体内模型的唯一抗体。因此用这个抗体获得的结果作为替代证明相应申请中公开的所有其他中和催乳素受体抗体在分析的疾病模型中的一般效力。将所述抗体在几种细胞系统中表征以确定它们的物种特异性以及它们失活PRLR介导的信号传导的不同读数范式(paradigm)的效价和效力(参见实施例5_10)。用大鼠Nb2-ll细胞(实施例6，图6)或者人PRLR(实施例5，图5)或小鼠PRLR(实施例10，图10)稳定转染的Ba/F细胞进行增殖测定。Novartis抗体XHA 06. 983对大鼠和小鼠PRLR未表现出活性，而Novarti s抗体XHA06. 642对大鼠PRLR表现出活性，但对小鼠PRLR未表现出活性。XHA 06. 642抑制人PRLR介导的信号传导(实施例5、7、8)。关于用人PRLR稳定转染的Ba/F细胞的增殖抑制，本发明的新抗体006-H08表现出最高效价(实施例5，图5)。相应申请的新抗体005-C04是唯一表现出对小鼠(实施例10、9)和人PRLR(实施例5、7、8)的交叉反应性的抗体。因此，与Novartis抗体XHA06. 642相比，新抗体005-C04适合在小鼠模型中测试PRLR介导的信号传导的抑制。本申请或相应申请中描述的所有其他抗体是人PRLR特异性的。除了细胞增殖测定(实施例5、6、10)，利用人(实施例8)或小鼠(实施例9) PRLR稳定转染以及LHRE (催乳激素应答元件)控制下的萤光素酶报道基因瞬时转染的HEK293细胞进行萤光素酶报道测定。利用这些系统，Novartis抗体XHA06. 642不能有效阻断小鼠PRLR介导的信号传导再次变得明显(实施例9)。相比之下，新抗体005-C04(相应申请)阻断小鼠PRLR激活萤光素酶报道基因(实施例9)。人T47D细胞中的STAT5磷酸化用作额外的读数以分析所述抗体对人PRLR的抑制活性(实施例7，图7)。正如预期的，非特异性抗体在所有分析的实验范式中无活性。本发明涉及通过提供抗PRLR抗体来抑制PRLR阳性细胞的生长以及上文提到的良性疾病和适应症的发展的方法。本发明提供人单克隆抗体、其抗原结合片段以及所述抗体和片段的变体，其特异性结合至PRLR(SEQID N0:70)或SEQ ID No:70的人多态变体的胞外域(ECD)，所述人多态变体例如 PNAS 105(38)，14533，2008 和 J. Clin. Endocrinol.Metab. 95(1)，271，2010 中描述的 I146L 和 I76V 变体。本发明的另一目的是一种抗体，其结合至催乳素受体及其人多态变体的胞外域的表位，其中所述催乳素受体的胞外域的氨基酸序列对应SEQ IDN0:70，并且核酸序列对应SEQ ID NO:71。本发明的抗体、抗原结合片段以及所述抗体和片段的变体包含轻链可变区和重链可变区。本发明涵盖的抗体或抗原结合片段的变体是其中保持所述抗体或抗原结合抗体片段对PRLR的结合活性的分子(序列参见表5)。因此，本发明的目的是抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或所述抗原结合片段与抗体006-H08或其确定的成熟变体竞争。所述抗体及其成熟变体的序列如表5所示。在另一实施方案中，公开抗体或抗原结合片段，a.其中可变重链区和轻链区的氨基酸序列，对于可变重链结构域，与SEQ IDNO: 34至少60%、更优选70%、更优选80%、或90%、或甚至更优选95%相同，并且对于可变轻链结构域，与SEQ ID NO: 40至少60%、更优选70%、更优选80%、或90%、或甚至更优选95%相同；或者b.其中对于抗体006-H08的成熟形式，可变重链结构域和轻链结构域的氨基酸序列与其至少60%、更优选70%、更优选80%、或90%、或甚至更优选95%相同；或者c.其中⑶R的氨基酸序列，对于重链结构域，与SEQ ID NO: 1、7和13至少60%、更优选70%、更优选80%、更优选90%、或甚至更优选95%相同，并且对于可变轻链结构域，与SEQID NO: 18、24和29至少60%、更优选70%、更优选80%、更优选90%、或甚至更优选95%相同。在另一实施方案中，公开包含抗体006-H08的⑶R的抗体或抗原结合片段，其中a.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7和13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO: 18、24 和 29 的 CDR 序列；b.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO: 78、24、90 的 CDR 序列；或者c.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、75、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID N0:82、24、91 的 CDR 序列；或者d.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 82、24、29 的 CDR 序列；或者e.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 86、24、29 的 CDR 序列；或者f.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID N0:87、24、100 的 CDR 序列；或者g.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO:87、24、92 的 CDR 序列；或者h.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO:89、24、93 的 CDR 序列；或者i.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID N0:79、24、101 的 CDR 序列；或者j.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、76、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO:89、24、90 的 CDR 序列；或者k.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 18,24,100 的 CDR 序列；或者I.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 18,24,97 的 CDR 序列；或者m.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 18,24,98 的 CDR 序列；或者η.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO:83、24、99 的 CDR 序列；或者ο.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 18,24,96 的 CDR 序列；或者p.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID Ν0:18、24、94 的 CDR 序列；或者q.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO:88、24、90 的 CDR 序列；或者r.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、74、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID N0:81、24、95 的 CDR 序列；或者s.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、75、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO: 18、24、29 的 CDR 序列；或者t.可变重链包含对应于SEQ ID N0:l、77、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于 SEQ ID NO: 18、24、29 的 CDR 序列；或者u.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 80、24、29 的 CDR 序列；或者V.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 85、24、29 的 CDR 序列；或者w.可变重链包含对应于SEQ ID NO: I、7、13的⑶R序列，并且可变轻链包含对应于SEQ ID NO: 84、24、29 的 CDR 序列。在一实施方案中，本文公开人抗体006-H08或其成熟形式，其中抗体a. 006-H08包含对应于SEQ ID NO:46的核酸序列和SEQ ID NO:34的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 52的核酸序列和SEQ ID NO: 40的氨基酸序列的可变轻链结构域；b. 006-H08-12-2包含对应于SEQ ID NO:331的核酸序列和SEQID NO:353的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 165的核酸序列和SEQ ID NO: 143的氨基酸序列的可变轻链结构域；c. 006-H08-13-2包含对应于SEQ ID NO:332的核酸序列和SEQID NO:354的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 166的核酸序列和SEQ ID NO: 144的氨基酸序列的可变轻链结构域；d. 006-H08-13-6-1 包含对应于 SEQ ID NO:333 的核酸序列和 SEQID NO:355 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 167的核酸序列和SEQ ID NO: 145的氨基酸序列的可变轻链结构域；e. 006-H08-14-6-0 包含对应于 SEQ ID NO:334 的核酸序列和 SEQID NO:356 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 168的核酸序列和SEQ ID NO: 146的氨基酸序列的可变轻链结构域； f. 006-H08-15-5包含对应于SEQ ID NO:335的核酸序列和SEQID NO:357的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 169的核酸序列和SEQ ID NO: 147的氨基酸序列的可变轻链结构域；g. 006-H08-19-1包含对应于SEQ ID NO:336的核酸序列和SEQID NO:358的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 170的核酸序列和SEQ ID NO: 148的氨基酸序列的可变轻链结构域；h. 006-H08-29-1包含对应于SEQ ID NO:337的核酸序列和SEQID NO:359的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 171的核酸序列和SEQ ID NO: 149的氨基酸序列的可变轻链结构域；i. 006-H08-32-2包含对应于SEQ ID NO:338的核酸序列和SEQID NO:360的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 172的核酸序列和SEQ ID NO: 150的氨基酸序列的可变轻链结构域；j. 006-H08-33-0包含对应于SEQ ID NO:339的核酸序列和SEQID NO:361的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 173的核酸序列和SEQ ID NO: 151的氨基酸序列的可变轻链结构域；k. 006-H08-33-16-0 包含对应于 SEQ ID NO:340 的核酸序列和 SEQ ID NO:362 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:174的核酸序列和SEQ ID NO: 152的氨基酸序列的可变轻链结构域；I. 006-H08-35-17-1 包含对应于 SEQ ID NO:341 的核酸序列和 SEQ ID NO:363 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDN0:175的核酸序列和SEQ ID NO: 153的氨基酸序列的可变轻链结构域；m. 006-H08-35-17-4 包含对应于 SEQ ID NO: 342 的核酸序列和 SEQ ID NO: 364 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:176的核酸序列和SEQ ID NO: 154的氨基酸序列的可变轻链结构域；η. 006-Η08-35-1包含对应于SEQ ID NO:343的核酸序列和SEQID NO:365的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 177的核酸序列和SEQ ID NO: 155的氨基酸序列的可变轻链结构域；ο. 006-Η08-36-17-0 包含对应于 SEQ ID NO:344 的核酸序列和 SEQ ID NO:366 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:178的核酸序列和SEQ ID NO: 156 的氨基酸序列的可变轻链结构域；p. 006-H08-37-19-0 包含对应于 SEQ ID NO:345 的核酸序列和 SEQ ID NO:367 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:179的核酸序列和SEQ ID NO: 157的氨基酸序列的可变轻链结构域；q. 006-H08-39-7包含对应于SEQ ID NO:346的核酸序列和SEQID NO:368的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 180的核酸序列和SEQ ID NO: 158的氨基酸序列的可变轻链结构域；r. 006-H08-48-5包含对应于SEQ ID NO:347的核酸序列和SEQID NO:369的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ ID NO: 181的核酸序列和SEQ ID NO: 159的氨基酸序列的可变轻链结构域；s. 006-H08-53-27-0 包含对应于 SEQ ID NO:348 的核酸序列和 SEQ ID NO:370 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:182的核酸序列和SEQ ID NO: 160的氨基酸序列的可变轻链结构域；t. 006-H08-59-30-0 包含对应于 SEQ ID NO:349 的核酸序列和 SEQ ID NO:371 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:183的核酸序列和SEQ ID NO: 161的氨基酸序列的可变轻链结构域；u. 006-H08-63-32-4 包含对应于 SEQ ID NO: 350 的核酸序列和 SEQ ID NO: 372 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:184的核酸序列和SEQ ID NO: 162的氨基酸序列的可变轻链结构域；V. 006-H08-65-33-2 包含对应于 SEQ ID NO:351 的核酸序列和 SEQ ID NO:373 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:185的核酸序列和SEQ ID NO: 163的氨基酸序列的可变轻链结构域；w. 006-H08-68-35-2 包含对应于 SEQ ID NO:352 的核酸序列和 SEQ ID NO:374 的氨基酸序列的可变重链结构域，并且包含具有SEQ IDNO:186的核酸序列和SEQ ID NO: 164的氨基酸序列的可变轻链结构域。在另一实施方案中，本文公开前述抗体的抗体或抗原结合片段，其中a.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、18、24、29 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者b.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、74、13、78、24、90 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者c.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、75、13、82、24、91 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者d.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、82、24、29 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者e.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、86、24、29 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者f.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、74、13、87、24、100 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者 g.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、74、13、87、24、92 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者h.所述抗体包含对应于 SEQ ID N0:l、74、13、89、24、93 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者i.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、74、13、79、24、101 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者j.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、76、13、89、24、90 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者k.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、18、24、100 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者I.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、18、24、97 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者m.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、18、24、98 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者η.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、74、13、83、24、99 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者ο.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、18、24、96 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者p.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、18、24、94 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者q.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: I、74、13、88、24、90 的 CDR 中的 I、2、3、4、5 或6个；或者r.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、74、13、81、24、95 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者s.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、75、13、18、24、29 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者t.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、77、13、18、24、29 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或6个；或者
u.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、80、24、29 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6
个；或者V.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、85、24、29 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个；或者w.所述抗体包含对应于 SEQ ID NO: 1、7、13、84、24、29 的 CDR 中的 1、2、3、4、5 或 6个。在本发明的另一实施方案中，抗体006-H08由抗原结合区组成，所述抗原结合区特异性结合至PRLR的一个或多个区域，或者对PRLR的一个或多个区域具有高亲和力，PRLR的氨基酸序列如SEQ ID NO: 70的氨基酸位置1-210所示，其中亲和力为至少ΙΟΟηΜ，优选低于约ΙΟΟηΜ，更优选低于约30nM，甚至更优选具有低于约IOnM的亲和力，或者甚至更优选具有低于InM的亲和力，或者甚至更优选具有低于30pM的亲和力。本发明的目的还是前述抗体006-H08，其中重链恒定区为修饰或未修饰的IgGl、IgG2、IgG3 或IgG4。表I提供本发明的代表性抗体的解离常数和解离速率的概括，所述解离常数和解离速率通过PRLR(SEQ ID NO:70)的单体胞外域在直接固定的抗体上的表面等离子共振(Biacore)来测定。表I :通过表面等离子共振测定的HEK293细胞中表达的人PRLR的胞外域对抗PRLR人IgGl分子的单价解离常数和解离速率
抗体K0 [M]kd[l/s]
006-H08O. 7x ICT92. 4x ICT4
002-H062. 7x ICT95. 4x ICT4
002-H08I. 8x 10_92. Ox 10_4
006-H072. Ox 10_9I. 3x ICT3
001-E0615.8x 10_9 4.8x 10_3
005-⑶412. 2x ICT9 9. 3x ICT3
HE06. 6420. 3x ICT93. 2x ICT4
XHA06. 642I. 2x ICT9I. 3x ICT4
XHA06. 9830. 2x ICT9I. 7x ICT4IgGl形式用于基于细胞的亲和力测定，通过荧光激活细胞分选术(FACS)联合斯卡查德分析来测定。表2示出代表性IgG抗体在人乳腺癌细胞系T47D和大鼠淋巴瘤细胞系Nb2上的
结合强度。
表2 :通过FACS在人乳腺癌细胞系T47D和大鼠淋巴瘤细胞系Nb2上测定的抗PRLR抗体的基于细胞的结合效力

本发明涉及中和催乳素受体抗体006-H08及其成熟形式，和抗原结合片段，包含它们的药物组合物，以及它们在治疗或预防催乳素受体介导的良性病症和适应症如子宫内膜异位症、子宫腺肌病、非激素女性避孕、良性乳房疾病和乳腺痛、泌乳抑制、良性前列腺增生、纤维瘤、高催乳素血症性和正常催乳素血症性脱发中的用途，以及在联合激素疗法中协同治疗以抑制乳腺上皮细胞增殖的用途。本发明的抗体阻断催乳素受体介导的信号传导。

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