专利名称:一种高通量棉花品种dna指纹库构建方法棉花是我国主要的经济作物,优良新品种的培育与推广对国民经济的发展与人民生活水平的提高具有重要意义。据统计,2000— 2009年我国通过国家及省级审定的棉花品种数量700多个。截止到2012年2月29日,已申请植物新品种保护的棉花品种达335个。然而,由于骨干亲本的集中使用与转基因技术在棉花育种中的大規模应用,棉花品种间的遗传差异越来越小,使得完全依赖传统的形态性状进行品种鉴别越来越困难。同时由于形态鉴定的时效性差,容易受到环境与主观因素的影响,品种多乱杂的现象难以得到有效控制。近年来,以微卫星(SSR)标记为基础的玉米、水稻等主要农作物的DNA指纹库构建已逐步开展,基于SSR标记在棉花遗传图谱构建、纯度鉴定与遗传多样性分析等方面的研究·也有相关报道。但常规聚丙烯酰胺凝胶电泳与银染技术的检测方法在分析的材料和位点较多时,检测工作显得费时费力,且不同胶板间数据的整合与统计是ー项很繁琐的工作,数据结果的准确性也很难保证。多色荧光检测技术是以不同顔色的荧光染料标记在SSR引物的5’端,荧光检测器对标记有荧光染料的扩增产物进行信号采集,并通过与各泳道的分子量内标进行比对,可自动读取产物片段大小,大大提高检测效率的同时保证了数据的准确性,尤其适用于大規模材料的检测分析。然而,基于棉花SSR的多色荧光标记检测技术构建我国棉花品种DNA指纹库的方法还未见相关报道。
本发明目的是提供一种高通量棉花品种DNA指纹库构建方法,以克服现有技术存在的上述不足。本发明提供的一种高通量棉花品种DNA指纹库构建方法,包括以下步骤(I)提取棉花 DNA ;(2)使用分布于棉花全基因组26条染色体上的ー套40对核心引物分别对待测品种进行SSR-PCR检测,每对引物标记有荧光染料标记,所述核心引物的核苷酸序列如下表I所示表I本发明提供了一种高通量棉花品种DNA指纹库构建方法,该方法包括提取棉花品种DNA,使用40对引物(核苷酸序列如SEQ ID No.1-80所示)进行SSR-PCR扩增,将扩增产物进行荧光多重PCR组合,于DNA分析仪上进行毛细管五色荧光电泳检测,根据荧光图谱进行棉花品种DNA指纹库构建。本发明方法相比常规的聚丙烯酰胺凝胶电泳的检测效率提高了10倍以上,且通过分子量内标的自动比对获得扩增产物片段大小,减少人为读板误差的同时,最大程度地保证了数据结果的准确性与可靠性。
一种高通量棉花品种dna指纹库构建方法
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