专利名称：Age生成抑制剂的制作方法对于晚期糖基化终产物AGE (Advanced Glycation End-products,以下,在本说明书中称之为“AGE”)的生成过程尽管仍有许多模糊点，但通常认为非酶促的糖基化反应为其主体。即，在初期反应中，蛋白质中存在的氨基与葡萄糖等还原糖的醛基产生非酶促反应(Glycation)，经希夫碱形成阿马道里(Amadori )重排产物，在后期反应中，上述重排产物经长时间复杂的开环和缩合等形成AGE。糖尿病并发症包括视网膜症、肾病、神经功能障碍、缺血性心脏病、脑血管障碍等，现已确认这些疾病的致病原因之一即为高血糖状态的生体生成的AGE (例如，参照非专利文献I)。糖尿病性肾病是由糖尿病引起的肾微血管障碍，基本病理变化为肾小球基底膜增厚与肾小球膜区域扩大。近年，在糖尿病患者增加的同时，糖尿病性肾病发展为末期肾功能不全，进而需要进行透析治疗的患者逐步增多。目前认为，因高血糖状态的持续而生成的AGE通过I)血管通透性的亢进、2)促进蛋白与脂蛋白的沉积、3) —氧化氮(NO)的失活、4)促进细胞外基质生成等引起肾病发病(例如，参照非专利文献2)。目前，以预防和改善糖尿病并发症为目的，为抑制AGE的生成而研究开发了种种AGE生成抑制剂。例如，对于作为引发肾病、视网膜症等糖尿病并发症等的成因的AGE生成，利用合成医药(合成化合物)进行抑制的方法虽已公开(参照专利文献I及2) JMAGE生成抑制剂类的合成医药尚处于开发阶段，并且这类合成医药多伴随有不可预期的副作用。与此相对，对于不采用合成医药、而具有通过饮食生活即可对疾病进行预防、抑制、改善及治疗的功能的成分或食品成分的研究逐渐受到关注。例如，专利文献3 5中公开了含作为食品的植物的提取物的AGE生成抑制组合物。但是，通常与合成医药(合成化合物)相比，存在于此类植物提取物中的AGE抑制活性成分的抑制活性极低，并且活性成分在提取物中的存在量也极低。糖尿病并发症的预防或治疗需长期持续地进行，因此需要兼顾有效的AGE生成抑制与避免副作用两方面因素的AGE生成抑制剂，但目前尚未发现可充分满足此类需求的植物提取物。另一方面，近年来已明确AGE除糖尿病外还与皮肤老化密切相关。AGE随年龄增力口，而在作为皮肤蛋白质的胶原部分产生美拉德(Maillard)反应时，蛋白质中赖氨酸残基的氨基或精氨酸残基的胍基与糖的羰基产生非酶促反应，从而生成AGE并使胶原部分彼此交联。交联结构的形成进而导致分子变得强直、皮肤固有的弹性丧失。并且，交联物被机体识别为异物，从而促使分解酶(胶原酶、弹性蛋白酶)的分泌量增加。这些因素使得肌肤的张力和弹性丧失，并且肌肤变脆，进而还导致皱纹、松弛下坠、肌肤晦暗现象的产生。如上所述，不只出于AGE为糖尿病并发症的致病因子的观点，从抗衰老的观点AGE的生成机制也逐渐受到关注。现有技术文献专利文献专利文献I :日本专利特开平10-324629号公报专利文献2 :日本专利特开2005-170935号公报 专利文献3 :日本专利特开2006-28090号公报专利文献4 日本专利特开2005-343842号公报专利文献5 :日本专利特开2005-320262号公报非专利文献非专利文献I =Higasi T.等，Bioclinica, 1997 年，第 12 卷，第 2 号，p. 19-21非专利文献2 Baba T.等，Bioclinica, 1997 年，第 12 卷，第 2 号，p. 39-48。
基于这种背景，本发明人们对于种种植物来源的提取物分析了含有成分、含量等，并最终将关注点集中到了富含多酚的“樱”。并且，由各种实验的结果发现，樱的花及叶的提取物、尤其是这些提取物中含有的类苯基丙烷配糖体(咖啡酰基葡萄糖、香豆酰基葡萄糖、桂皮酰基葡萄糖)、以及类黄酮配糖体(山萘酚葡萄糖苷、槲皮素葡萄糖苷、山萘酚丙二酰基葡萄糖、槲皮素丙二酰基葡萄糖)中含有可有效抑制AGE生成、及促进成纤维细胞的胶原网格形成的成分。并且还发现，作为樱提取物的新生理活性，对由属于AGE的羧甲基赖氨酰化胶原(CML化胶原,CarboxymethyI lysine-collagen)所引起的成纤维细胞的细胞凋亡具有有效的抑制作用，从而完成了本发明。为解决上述课题，本发明的目的在于提供有效抑制AGE生成、及提高生体安全性的AGE生成抑制剂。作为其他目的，本发明提供一种抑制由属于AGE的CML化胶原(Carboxymethyllysine-collagen)所引起的人成纤维细胞细胞凋亡的细胞凋亡抑制剂。作为其他目的，本发明提供成纤维细胞中的胶原网格形成促进剂。作为其他目的，本发明提供可在成纤维细胞中有效阻碍AGE生成的AGE生成抑制剂。为解决上述课题，本发明的特征如下所述。I.本发明的AGE生成抑制剂含有樱的提取物和/或其处理物作为有效成分。2.本发明的AGE生成抑制剂含有樱的花的提取物和/或其处理物作为有效成分。3.本发明的AGE生成抑制剂含有樱的叶的提取物和/或其处理物作为有效成分。4.本发明的AGE生成抑制剂含有选自由下述化合物、S卩、I-O-(E)-咖啡酰基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(1-0-(E)-Caffeoyl-β -D-glucopyranoside)、1_0_(E)-香豆酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(1-0-(E) -Coumaroyl- β -D-glucopyranoside)、1_0_(E)-桂皮酰基- β -D- fl比喃葡萄糖苷(1-0-(E)-CinnamoyU -D-glucopyranoside)、山萘酷3-0- β -D- fl比喃葡萄糖苷(Kaempferol 3-0- β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3_0_β -D- fl比喃葡萄糖苷(Quercetin 3_0_β-D-glucopyranoside)、山萘酌· 3_0_(6”-丙二酰基)-β -D-卩比喃葡萄糖苷(Kaempferol 3_0_ (6”-malony) - β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3-0-(6”_ 丙二酰基)_β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin3-O-(6”_malony)-0 -D-glucopyranoside)构成的组中的至少一种作为有效成分。5.本发明的AGE生成抑制剂含有1_0_ (E)-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(1_0_(E)-Caffeoyl-β -D-glucopyranoside)作为有效成分。6.本发明的AGE生成抑制剂含有槲皮素3_0_β -D-吡喃葡萄糖苷(Quercetin3-0-β -D-glucopyranoside)作为有效成分。根据上述I 6所涉及的本发明的AGE生成抑制剂，利用作为食用材料安全的樱来源的提取物可有效抑制AGE的生成、以及避免副作用。由此，可提供对糖尿病并发症有效 预防或治疗的食品、医药品、化妆品等的素材。7.本发明的细胞凋亡抑制剂为含有樱的提取物和/或其处理物作为有效成分的细胞凋亡抑制剂，对由属于AGE的CML化胶原(Carboxymethyl lysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡具有抑制作用。8.本发明的细胞凋亡抑制剂为含有樱的花的提取物和/或其处理物作为有效成分的细胞凋亡抑制剂，对由属于AGE的CML化胶原(Carboxymethyl lysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡具有抑制作用。9.本发明的细胞凋亡抑制剂为含有樱的叶的提取物和/或其处理物作为有效成分的细胞凋亡抑制剂，对由属于AGE的CML化胶原(Carboxymethyl lysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡具有抑制作用。10.本发明的细胞凋亡抑制剂为含有选自由下述化合物、即、I-O-(E)-咖啡酰基- β -D-批喃葡萄糖苷(1-0-(E)-CaffeoyU -D-glucopyranoside)、1_0_(E)-香豆酉先基 _β -D-批喃葡萄糖苷(1-0-(E)-Coumaroyl-P -D-glucopyranoside)、1_0_(E)-桂皮酰基- β -D- fl比喃葡萄糖苷(1-0-(E)-CinnamoyU -D-glucopyranoside)、山萘酷3-0- β -D- fl比喃葡萄糖苷(Kaempferol 3-0- β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3_0_β -D- fl比喃葡萄糖苷(Quercetin 3_0_β-D-glucopyranoside)、山萘酌· 3_0_(6”-丙二酰基)-β -D-卩比喃葡萄糖苷(Kaempferol 3_0_ (6”-malony) - β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3-0-(6”_ 丙二酰基)_β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin3-O-(6”_malony)-0 -D-glucopyranoside)构成的组中的至少一种作为有效成分的细胞凋亡抑制剂，对由属于AGE的CML化胶原(Carboxymethyl lysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡具有抑制作用。11.本发明的细胞凋亡抑制剂为含有I-O-(E)-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷(I-ο- (E) -Caffeoyl- β -D-glucopyranoside)作为有效成分的细胞凋亡抑制剂，对由属于AGE的CML化胶原(Carboxymethyl lysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡具有抑制作用。12.本发明的细胞凋亡抑制剂为含有槲皮素3-0-β -D-吡喃葡萄糖苷(Quercetin3-0-β -D-glucopyranoside)和/或槲皮素3_0_(6”-丙二酰基)_β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin 3-0- (6"-malony) - β -D-glucopyranoside)作为有效成分的细胞凋亡抑制剂，对由属于AGE的CML化胶原(Carboxymethyl lysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡具有抑制作用。根据上述7 12所涉及的本发明的AGE生成抑制剂，利用作为食用材料安全的樱来源的提取物可有效抑制由CML化胶原(Carboxymethyl lysine-collagen)引起的成纤维细胞的细胞凋亡。由此，可提供有助于防止和改善皮肤老化的食品、医药品、化妆品等的素材。13.本发明的人成纤维细胞的胶原网格形成促进剂含有樱的提取物和/或其处理物作为有效成分。14.本发明的人成纤维细胞的胶原网格形成促进剂含有樱的花的提取物和/或其处理物作为有效成分。 15.本发明的人成纤维细胞的胶原网格形成促进剂含有樱的叶的提取物和/或其处理物作为有效成分。16.本发明的人成纤维细胞的胶原网格形成促进剂含有选自由下述化合物、即、1-0- (E)-咖啡酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Caffeoyl- β -D-glucopyranoside)、1-0- (E)-香豆酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Coumaroyl- β -D-glucopyranoside)、1-0- (E)-桂皮酸基-β -D-批喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Cinnamoyl- β -D-glucopyranoside)、山萘酌· 3-0-β -D-卩比喃葡萄糖苷(KaempferoI 3-0-β -D-glucopyranoside)、槲皮素3-0- β -D-批喃葡萄糖苷(Quercetin 3-0- β -D-glucopyranoside)、山萘酌· 3-0- (6”_ 丙二酸基)_ β -D-卩比喃葡萄糖苷(Kaempferol 3-0- (6，，-malony) - β -D-glucopyranoside)、懈皮素 3-0-(6”_ 丙二酰基)_β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin3-O-(6”_malony)-0 -D-glucopyranoside)构成的组中的至少一种作为有效成分。17.本发明的人成纤维细胞的胶原网格形成促进剂含有I-O-(E)-咖啡酰基- β -D-卩比喃葡萄糖苷(I-O-(E) -Caffeoyl- β -D-glucopyranoside)作为有效成分。18.本发明的人成纤维细胞的胶原网格形成促进剂含有槲皮素3-0-β -D-吡喃葡萄糖苷(Quercetin 3-0-β -D-glucopyranoside)作为有效成分。根据上述13 18所涉及发明的人成纤维细胞的胶原网格形成促进剂，利用作为食用材料安全的樱来源的提取物可有效促进人成纤维细胞的胶原网格形成。由此，可提供对皮肤老化的防止改善有益的食品、医药品、化妆品等的素材。19.本发明的成纤维细胞内AGE生成抑制剂含有樱的提取物和/或其处理物作为有效成分。20.本发明的成纤维细胞内AGE生成抑制剂含有樱的花的提取物和/或其处理物作为有效成分。21.本发明的成纤维细胞内AGE生成抑制剂含有樱的叶的提取物和/或其处理物作为有效成分。22.本发明的成纤维细胞内AGE生成抑制剂含有选自由下述化合物、即、1-0- (E)-咖啡酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Caffeoyl- β -D-glucopyranoside)、1-0- (E)-香豆酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Coumaroyl- β -D-glucopyranoside)、1-0- (E)-桂皮酸基-β -D-批喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Cinnamoyl- β -D-glucopyranoside)、山萘酌· 3-0-β -D-卩比喃葡萄糖苷(Kaempferol 3-0-β -D-glucopyranoside)、槲皮素3-0- β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin 3-0- β -D-glucopyranoside)Λ 山萘酌· 3-0- (6”_ 丙二酉先基)_β -D-卩比喃葡萄糖苷(Kaempferol 3_0_ (6”-malony) - β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3-0-(6”_ 丙二酰基)_β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin3-O-(6”_malony)-0 -D-glucopyranoside)构成的组中的至少一种作为有效成分。23.本发明的成纤维细胞内AGE生成抑制剂含有1_0_(E)-咖啡酰基-β -D-吡喃葡萄糖苷(I-O-(E) -Caffeoyl-β -D-glucopyranoside)作为有效成分。24.本 发明的成纤维细胞内AGE生成抑制剂含有槲皮素3_0_β -D-吡喃葡萄糖苷(Quercetin 3-0-β -D-glucopyranoside)作为有效成分。根据上述19 24所涉及发明的成纤维细胞内AGE生成抑制剂，基于作为食用材料安全的樱来源的提取物可在成纤维细胞中有效抑制AGE的生成。由此，可提供对皮肤老化的防止改善有益的食品、医药品、化妆品等的素材。25.本发明的樱提取物含有选自由下述化合物、即、I-O-(E)-咖啡酰基- β -D-吡喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Caffeoyl- β -D-glucopyranoside)、1_0_ (E)-香豆酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(I-O-(E) -Coumaroyl- β -D-glucopyranoside)Λ 1-0- (E)-桂皮酸基- β -D-批喃葡萄糖苷(1-0-(E) -Cinnamoyl-β -D-glucopyranoside)、山萘酷 3-0-β -D-批喃葡萄糖苷(KaempferoI 3_0_β-D-glucopyranoside)、樹皮素 3_0-β~0-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin3-0-β -D-glucopyranoside)λ 山萘酌·3_0-(6”_丙二酰基)-β -D-fl比喃葡萄糖苷(Kaempferο 13-0- (6”_malony) - β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3_0_ (6”_ 丙二酸基)-β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin 3-0- (6” -malony) - β -D-glucopyranoside)构成的组中的至少一种。26.本发明的樱提取物含有选自由下述化合物、即、I-O-(E)-咖啡酰基- β -D-吡喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Caffeoyl- β -D-glucopyranoside)、1_0_ (E)-香豆酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(I-O-(E) -Coumaroyl- β -D-glucopyranoside)Λ 1-0- (E)-桂皮酸基- β -D-批喃葡萄糖苷(1-0-(E) -Cinnamoyl-β -D-glucopyranoside)、山萘酷 3-0-β -D-批喃葡萄糖苷(KaempferoI 3-0-β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3_0_β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin3-0- β -D-glucopyranoside)λ 山萘酌· 3-0- (6”_丙二酰基)-β -D- fl比喃葡萄糖苷(Kaempferο 13-0- (6”_malony) - β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3_0_ (6”_ 丙二酸基)-β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin 3_0_ (6”_malony) - β -D-glucopyranoside)构成的组中的所有化合物。27.本发明的樱提取物为含有选自由下述化合物、即、I-O-(E)-咖啡酰基- β -D-批喃葡萄糖苷(1-0-(E)-CaffeoyU -D-glucopyranoside)、1_0_(E)-香豆酉先基 _β -D-批喃葡萄糖苷(1-0-(E)-Coumaroyl-P -D-glucopyranoside)、1_0_(E)-桂皮酰基- β -D- fl比喃葡萄糖苷(1-0-(E)-CinnamoyU -D-glucopyranoside)、山萘酷3-0- β -D- fl比喃葡萄糖苷(Kaempferol 3-0- β -D-glucopyranoside)、樹皮素 3_0_β -D- fl比喃葡萄糖苷(Quercetin 3_0_β-D-glucopyranoside)、山萘酌· 3_0_(6”-丙二酰基)-β -D-卩比喃葡萄糖音(Kaempferol3_0- (6”_malony) - β -D-glucopyranoside)、樹皮素3-0- (6”_ 丙二酸基)-β -D-卩比喃葡萄糖苷(Quercetin 3-0- (6”_malony) - β -D-glucopyranoside)构成的组中的所有化合物的樱提取物，由包括以下步骤(a) (c)的制备方法制备而得(a)用20 50wt%的含水乙醇提取樱的花和/或叶的步骤，(b)使由所述步骤(a)得到的提取物吸附在吸附剂上后，用水洗脱并去除水洗脱组分的步骤，(c)在所述步骤(b)之后，用水溶性溶剂洗脱所述提取物，进而浓缩该洗脱液的步骤。28.本发明的AGE生成抑制剂含有上述27所述的樱提取物和/或其处理物作为有效成分。29.本发明的细胞凋亡抑制剂为含有上述27所述的樱提取物和/或其处理物作为有效成分的细胞凋亡抑制剂，对由属于AGE的CML化胶原(Carboxymethyllysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡具有抑制作用。30.本发明的人成纤维细胞的胶原网格形成促进剂含有上述27所述的樱提取物和/或其处理物作为有效成分。 31.本发明的成纤维细胞内AGE生成抑制剂含有上述27所述的樱提取物和/或其处理物作为有效成分。32.本发明的糖尿病并发症的预防治疗剂含有上述27所述的樱提取物和/或其处理物作为有效成分。33.本发明的皮肤老化防止改善剂含有上述27所述的樱提取物和/或其处理物作为有效成分。根据上述25 33所涉及的本发明，基于作为食用材料安全的樱来源的提取物可有效抑制AGE的生成、并避免副作用。由此，可提供对糖尿病并发症的有效预防或治疗有益的食品、医药品、化妆品等的素材。并且，根据上述25 33所涉及的本发明，可有效抑制由CML化胶原(Carboxymethyl lysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡、有效促进人成纤维细胞的胶原网格形成、及有效抑制成纤维细胞中AGE的生成。由此，可提供对皮肤老化的防止改善有益的食品、医药品、化妆品等的素材。

图I为示出樱的花提取物含有成分的探索方法的说明图。图2为示出本发明实施例的楼花提取精油/精华对由CML化胶原(Carboxymethyllysine-collagen)引起的成纤维细胞细胞凋亡的影响的镜检照片的图。图3示出用乙二醛(Glyoxal)糖基化的成纤维细胞胶原网格形成的状况，为24及48小时培养后肉眼观察的照片的图。图4为示出图3中24小时培养后的显微镜照片(100倍)的图。图5为示出图3中48小时培养后的显微镜照片(200倍)的图。图6为示出乙二醛(Glyoxal)对成纤维细胞(人正常二倍体成纤维细胞)内AGE (羟甲基赖氨酸蛋白，Carboxymethyl Iysin蛋白)生成的作用(蛋白免疫印迹)的图。图7为示出本发明实施例的樱花提取精油/精华对由乙二醛(Glyoxal)引发的皮内AGE生成的作用(蛋白免疫印迹)的图。图8示出本发明实施例的楼花提取精油/精华对由CML化胶原(Carboxymethyllysine-collagen)引发的真皮细胞细胞凋亡的作用，为TUUNEL染色阳性细胞的显微镜照片(400倍)的图。

进行说明。本发明的AGE生成抑制剂、成纤维细胞的细胞凋亡抑制剂、人成纤维细胞胶原网格形成促进剂、成纤维细胞内AGE生成抑制剂、及樱提取物(以下，将这些概括描述时称为“AGE生成抑制剂等”)含有选自1-0- (E)-咖啡酰基-β -D-吡喃葡萄糖苷(1-0-(E)-Caffeoyl-β-D-glucopyranoside)、1-0-(E)-香豆酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(1-0-(E)-Coumaroyl-β-D-glucopyranoside)、1-0-(E)-桂皮酸基-β-D-批喃葡萄糖苷(1-0-(E)-CinnamoyU -D-glucopyranoside)、山萘酌· 3-0-β -D-批喃葡萄糖苷(Kaempferol 3_0_β-D-glucopyranoside)、懈皮素 3-0-β- -卩比喃葡萄糖苷(Quercetin3-0- β -D-glucopyranoside)、山萘酌· 3-0- (6”_丙二酰基)-β -D-批喃葡萄糖苷(Kaempferο 13-0- (6”_malony) - β -D-glucopyranoside)、懈皮素 3_0_ (6”_ 丙二酸基)-β -D-批喃葡萄糖苷(Quercetin 3-0- (6” -malony) - β -D-glucopyranoside)中的至少一种作为其生理活性的有效成分。 1-0- (E)-咖啡酸基-β -D-卩比喃葡萄糖苷(1-0- (E) -Caffeoyl- β -D-glucopyranoside)为下述化学式(I)所示的化合物。化学式I化学式(I)


本发明提供有效抑制晚期糖基化终产物AGE生成的同时，提高了对生体的安全性的AGE生成抑制剂等。本发明的AGE生成抑制剂等含有樱(优选花或叶)的提取物和/或其处理物作为有效成分。本发明的AGE生成抑制剂等含有选自由下述化合物、即、1-O-(E)-咖啡酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、1-O-(E)-香豆酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、1-O-(E)-桂皮酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷、山萘酚3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山萘酚3-O-(6”-丙二酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素3-O-(6”-丙二酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷构成的组中的至少一种作为有效成分。