专利名称：陆英药材及其制剂中山奈素的质量检测方法陆英为忍冬科接木属植物陆英(feffltocm Chinensis Lindl.)的全草，又名接骨 草、蒴藿、走马风等，是我国民间常用草药，有活血散瘀、祛风活络、发汗利尿等作用，主要用 于跌打损伤、风湿、肾炎水肿、脚气水肿、肺炎、黄疸性肝炎等症。70年代末，江西宜春地区即 创用陆英煎剂、糖浆、冲级治疗急性病毒性肝炎1115例，治愈率83. 95%，有效率98. 2%，明显 优于同期中西药综合治疗对照组的效果。卫生部药品标准中药成方制剂第二册收载的陆英 片、陆英糖浆和陆英冲剂用于急性病毒性肝炎的治疗。但陆英制剂质量标准低，无含量测定 项，质量可控性较差，在一定程度上影响了陆英制剂的临床应用.陆英中主要有效成分为熊果酸、齐墩果酸、黄酮等成分。现有文献报道最多的是有 关熊果酸和齐墩果酸的含量测定方法，由于熊果酸和齐墩果酸结构相似，两者分离度较 差，分析结果差异大。廖琼峰等人报道了陆英中绿原酸的含量测定方法；专利申请号为 “200610023189. 1”的中药陆英颗粒有效成分及含量的测定方法，该专利公开了采用高效液 相色谱法测定多肽类成分含量的方法。由于绿原酸和多肽类成分并非陆英中的主要成分， 对它们的含量进行控制针对性不强。黄酮类成分是陆英主要成分之一，黄酮类成分含量高 低能够较好反映陆英药材及其制剂的质量。汪玢等人报道了采用紫外分光光度法测定以 芦丁计总黄酮含量的方法，由于显色反应干扰因素多，该方法专属性较差，测定结果差异较 大；同时申请人经过研究发现，陆英中主要黄酮苷元为山奈素。
本发明的目的在于提供一种陆英药材及其制剂的质量检测方法，该方法先将样品 中的黄酮苷酸水解成苷元山奈素，再采用高效液相色谱法测定山奈素的含量，目的在于控 制陆英药材及其制剂的质量。本发明陆英药材及其制剂中山奈素的质量检测方法内容如下色谱条件采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇一酸水溶液(35飞0:65 40)为 流动相，流速为0. 8 1. 5ml/min，柱温1(T40°C，检测波长为367士2nm，理论板数按山柰素计 算应不低于4000 ；对照品溶液的制备取山奈素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含 l.(Tl5.0yg的溶液，即得；供试品溶液的制备取样品纩40重量份，精密称定，精密加入4(Γ100%甲醇或乙醇 40^240重量份，称定重量，超声或回流提取0. 5^2小时，冷却，补足失重，摇勻，滤过，取续滤 液5 15重量份，加入酸水2、重量份，8(Γ100 水浴加热0. 5^1. 5小时，冷却，定容至25重 量份，摇勻，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得。每毫升供试品溶液相当于原药材0. Γ0. 5g ；测定法取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。其中，优选的色谱条件为采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇一0. 4%磷酸 溶液(45:55)为流动相，流速为1. Oml/min，柱温30°C，检测波长为367nm，理论板数按山柰 素计算应不低于4000。其中，供试品溶液制备过程，酸水解所采用酸水是浓度为5 35%的盐酸、硫酸或磷 酸水溶液中的任一种。其中，陆英药材供试品溶液优选制备方法为取陆英药材粉末20g，精密称定，精 密加入75%乙醇120ml，称定重量，回流提取2小时，冷却，补足失重，摇勻，滤过，取续滤液 15ml，加入15%盐酸水溶液5ml，80°C水浴加热0. 5小时，冷却，定容至25ml，摇勻，0. 45 μ m 微孔滤膜过滤，即得。其中，陆英片供试品溶液优选制备方法为取陆英片，除去包衣，研细，取3g，精密 称定，精密加入75%乙醇60ml，称定重量，超声提取0. 5小时，冷却，补足失重，摇勻，滤过，取 续滤液10ml，加入15%盐酸水溶液;3ml，8(TC水浴加热0. 5小时，冷却，定容至25ml，摇勻， 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得。其中，陆英颗粒供试品溶液优选制备方法为取陆英颗粒，研细，取30g，精密称 定，精密加入75%乙醇120ml，称定重量，超声提取0. 5小时，冷却，补足失重，摇勻，滤过，取 续滤液15ml，加入15%盐酸水溶液5ml，80°C水浴加热0. 5小时，冷却，定容至25ml，摇勻， 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得。其中，陆英冲剂供试品溶液优选制备方法为取陆英冲剂，研细，取30g，精密称 定，精密加入75%乙醇120ml，称定重量，超声提取0. 5小时，冷却，补足失重，摇勻，滤过，取 续滤液15ml，加入15%盐酸水溶液5ml，80°C水浴加热0. 5小时，冷却，定容至25ml，摇勻， 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得。其中，陆英糖浆供试品溶液优选制备方法为精密量取陆英糖浆30ml，精密加入 乙醇80ml，称定重量，回流提取2小时，冷却，补足失重，摇勻，滤过，取续滤液15ml，加入15% 盐酸水溶液5ml，80°C水浴加热0. 5小时，冷却，定容至25ml，摇勻，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得。其中，陆英胶囊供试品溶液优选制备方法为取陆英胶囊内容物，研细，取3g，精 密称定，精密加入75%乙醇60ml，称定重量，超声提取0. 5小时，冷却，补足失重，摇勻，滤过， 取续滤液IOml，加入15%盐酸水溶液3ml，80°C水浴加热0. 5小时，冷却，定容至25ml，摇勻， 0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得。本发明所提供的质量检测方法解决了陆英药材及其制剂质量可控性差的问题，经 系统方法学研究，该方法专属性强、准确可靠，能够很好满足实际生产产品的质量控制。
高效液相色谱仪AgilentllOO (G1311A QuatPump、G1314A VWD.G1322A DEGASSER)；紫 外分光光度计TU1901(北京普析通用仪器有限责任公司);电子天平AB^55-S(梅特勒-托利多仪器有限公司)；山柰素对照品中国药品生物制品检定所(批号110861-200808)；甲 醇(色谱纯，上海陆都化学试剂厂)；其余试剂均为分析纯.
2、色谱条件与系统适用性试验
2. 1检测波长的选择
取山柰素对照品5. Omg，精密称定，置IOOml容量瓶中，加甲醇适量使溶解并至刻度，摇 勻，于紫外分光光度计200 SOOnm波长下扫描，山柰素甲醇溶液在367nm波长下有最大吸 收，因此选择367nm波长为检测波长.
2.2色谱条件
色谱柱Hypersil—OD&0· 6 mm X 250 mm，5 μ m)，甲醇一0· 4%磷酸溶液(45 55)为 流动相，流速为1. Oml/min，柱温30°C，检测波长为367nm，理论板数按山柰素计算应不低于 4000.
3、线性关系试验
取山柰素对照品适量，精密称定，加甲醇配制成70 μ g/ml的溶液，分别精密量取，并 用甲醇稀释成含山柰素对照品l、3、5、10、20、30、50yg/ml的对照品溶液，根据山柰素对 照品说明书的95. 9%含量说明，即得实际含量为0. 959,2. 877,4. 795,9. 59,19. 18,28. 77、 47. 95 μ g/ml的对照品溶液，分别注入液相色谱仪10μ 1，测定峰面积，以对照品浓度为横 坐标(C，μ g/ml)，峰面积为纵坐标(Α)，结果见表1.
表1山柰素含量测定线性相关性试验结果
浓度(μ g/ml)峰面积0. 95928. 12. 877103. 54. 795174. 89. 590369. 619. 18732. 828. 771110.147. 951877. 3
山柰素线性回归方程为 A = 39. 266*C - 12. 122(R2 = 0. 9999)，在 0. 959 47. 95yg/ ml浓度范围内呈线性关系.
4、供试品制备的方法研究
取20090122批号样品进行实验，操作如下
方法1 精密量取样品30ml，精密加入甲醇80ml，称定重量，加热回流两小时，冷却，再 称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，量取续滤液15ml于平底烧瓶中，加15%盐酸 溶液5ml，80°C水浴30min，立即放冷，转移到25ml量瓶中，加甲醇至刻度，过0. 45 μ m微孔 滤膜，即得.
方法2 精密量取样品30ml，精密加入乙醇80ml，称定重量，加热回流两小时，冷却，再 称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，量取续滤液15ml于平底烧瓶中，加15%盐酸 溶液5ml，80°C水浴30min，立即放冷，转移到25ml量瓶中，加乙醇至刻度，过0. 45 μ m微孔 滤膜，即得.
方法3 精密量取样品30ml，精密加入甲醇80ml，称定重量，超声处理两小时，冷却，再 称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，量取续滤液15ml于平底烧瓶中，加15%盐酸 溶液5ml，80°C水浴30min，立即放冷，转移到25ml量瓶中，加甲醇至刻度，过0. 45 μ m微孔滤膜，即得.
方法4 精密量取样品30ml，精密加入乙醇80ml，称定重量，超声处理两小时，冷却，再 称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇勻，滤过，量取续滤液15ml于平底烧瓶中，加15%盐酸 溶液5ml，80°C水浴30min，立即放冷，转移到25ml量瓶中，加乙醇至刻度，过0. 45 μ m微孔 滤膜，即得.
分别吸取以上样品各10μ 1，分别注入色谱仪，测定峰面积，结果见表2. 表2陆英糖浆含量测定样品溶液制备方法研究结果


陆英药材及其制剂中山奈素的质量检测方法，包括将样品中黄酮苷酸水解成苷元山奈素，并采用高效液相色谱法测定山奈素含量的方法。本发明方法不仅适用于陆英药材，还适用于由单味陆英药材制成的中药制剂，包括陆英糖浆、陆英颗粒、陆英冲剂、陆英片、陆英胶囊等制剂。