一种含刺五加提取物的健脑复方软胶囊及其制备方法[0002]紫丁香苷广泛存在于五加科植物中，具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗疲劳等作用，还可以治疗心脑血管疾病、糖尿病和神经衰弱。刺五加(Eleutherococcussenticosus)为常见的五加科(Araliaceae)植物,在我国本草医籍中均有记载,具有扶正固本、补肾健脾、益智安神。主要用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦等病症。 [0003]动物脑提取物含有多种具有药用或保健价值的物质，例如，中国科学院生物物理所王荫亭等人的研究证明:纟鸟脑含有丰富的血管活性肠肽(vasoactine intrestinalpeptide, VIP)和乙酰胆碱酯酶(acetylcholine esterase, AchE)(王荫亭等，血管活性肠肽免疫阳性神经元在家鸽中脑和间脑中的分布[J]，生物物理学报，1994，10 (3):103-110)。近期研究表明:血管VIP可以显著降低慢性实验变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE,一种以中枢神经系统多发性硬化症(multiplesclerosi^MS)建立的动物模型)的发病率和疾病的严重程度。VIP通过调节多种炎性介质功能、封闭嗜脑性T细胞的活性，降低中枢神经系统的炎性改变。VIP不仅可以治疗中枢神经系统疾病，而且可以预防中枢神经系统病情复发。国内外学者普遍认为VIP可能会成为一个新的治疗多发性硬化的药物。乙酰胆碱酯酶(AchE)不仅参与胆碱能神经递质的传递，还具有调节和促进神经组织的发育和神经再生的神经营养因子样作用。江苏大学的李永金等人研究证明:猪脑提取物可提高痴呆大鼠学习记忆能力(李永金等，猪脑提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的保护作用[J]，时珍国医国药，2010，7(21):1700-1702)。河南工业大学粮油食品学院谢朝顺等通过实验证实:猪脑含有丰富的磷脂酰胆碱，并且通过薄层色谱分离，得到了 PA、PE、PC、PS、PI等组分。鸡脑磷脂中不饱和脂肪酸占67.78%，猪脑磷脂中不饱和脂肪酸占58.84% (谢朝顺等，羊、猪、鸡脑中磷脂及磷脂脂肪酸组成分析[J]，河南工业大学学报(自然科学版)，2010，4 (31):29-31 )。[0004]大豆磷脂是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸等混合物。不同分子构型磷脂具有不同的生物学功能。研究证明:二亚油酰磷脂酰胆碱也称“多烯磷脂酰胆碱”具有改善神经功能，减少损伤，促进了神经细胞对于外源性的β -淀粉样蛋白的吞噬和代谢降解(张晓辉等，多烯磷脂酰胆碱对β_淀粉样蛋白(Αβ 1-40)致阿尔茨海默病模型大鼠的治疗作用[J]，现代生物医学进展，2011，11 (13):2438-2442)。二亚油酰磷脂酰胆碱含有丰富油酸成分也是脂溶性化合物非常好的乳化剂和表面活性剂。近几年更以脑专一性营养物质引起大家的广泛关注。[0005]植物油含有丰富的不饱和脂肪酸，研究证明罂粟籽油中的不饱和脂肪酸占88%以上，棕榈酸占9.7 %，(祖新，罂粟籽油脂肪酸组成分析[J ]，粮油食品科技，2 OIO，18 (6):20-21)。罂粟籽油具有软化血管防止血脂在血管壁上沉积、抑制肝脏低密度脂蛋白的合成改善睡眠质量。不仅如此，罂粟籽油还具有极好的脂溶性作用和特殊的清香味。[0006]橄榄油单不饱和脂肪酸的含量为80%以上，必需脂肪酸亚油酸和亚麻酸的比例为1:4，正好完全符合人体对于摄入脂肪的科学标准。橄榄油被誉为最有益于人类健康长寿的植物油。[0007]月见草油不饱和脂肪酸高达85%以上，其中最重要的成分是Y-亚麻酸，Y-亚麻酸含量在10%左右，Y-亚麻酸具有抗炎、抗氧化、抗血栓、降脂、降糖、减肥等作用，对多种慢性疾病具有医疗保健功能。
[0008]黑加仑籽油富含Y-亚麻酸、生育酚、留醇等功能性成分，具有降低血液胆固醇水平、清除自由基、防治癌症等作用。葡萄籽油营养丰富，脂肪酸组成合理，含有较高的亚油酸、维生素A和维生素E活性成分，具有抗氧化、抗衰老、降血脂等作用。
[0009]泊洛沙姆(poloxamer)是聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段共聚物。泊洛沙姆是一种具有药理活性的多功能药用辅料，研究发现泊洛沙姆具有稳定细胞膜、明显减少了肝、脾摄取。泊洛沙姆可通过不同的的作用机制帮助药物穿越血脑屏障，抑制血脑屏障上P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白等外派泵系统；吸附血浆中的不同载脂蛋白后，使其通过受体介导的结合，促进药物穿越血脑屏障使泊洛沙姆包被的纳米粒药物主动转入脑内，提高药物在脑内的生物利用度(张伟和方晓玲，泊洛沙姆在药物穿越血脑屏障中的重要作用[J]，药学学报，2008，43 (9):890-897)。
[0010]老年性痴呆又称阿尔茨海默症(AD)已经成为继肿瘤、心脏病、脑血管病引起成人死亡的第四大病因，随着社会人口老龄化的迅猛发展，老年人在人群中的比重越来越大，AD必将成为一个不可忽视的卫生和社会问题。中国从上世纪90年代起，提前进入老龄化社会的行列，60岁以上的占全国总人口的10%，并以年均3.3%的速度上升，有关方面统计60岁以上老人到2025年可达2.8亿，占总人口的18.4%。一直以来，我国在预防老年性痴呆的保健品开发和食用方面受到极大的重视。研究证明，服用辅助改善记忆和/或辅助改善睡眠的保健药物能够有效地预防AD。
[0011]目前，常见的有关辅助改善记忆、辅助改善睡眠和预防老年痴呆症的保健品主要分为三大类，第一类是以不饱和脂肪酸植物油为主要成分辅以其他药食两用成分，如CN101283797A涉及以核桃油为基质的促智健脑保健品；第二类是以药食两用的重要原料为主要成分的保健品，如CN102178664A涉及五味子醇甲、五味子甲素及五味子醇提取物防治老年痴呆的新用途；第三类是以哺乳动物脑组织主要是猪脑提取物为主要成分的保健品，如CN1535974A涉及一种生产以神经节苷脂为主的糖脂类物质的方法。
[0012]由于肝脏首过效应及血脑屏障的外排作用等，人体对上述三类保健品的吸收有限，因而其辅助改善记忆和/或改善睡眠的效果并不显著。而且，磷脂酰丝氨酸不稳定(易氧化)且具异味，动物脑提取物也一般有异味。因此，研究保健效果较佳且无异味的辅助改善记忆和/或改善睡眠的健脑复方软胶囊具有重大意义。


[0013]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种保健效果较佳且无异味的用于辅助改善记忆和/或改善睡眠的健脑复方软胶囊及其制备方法。
[0014]为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种制备含刺五加提取物的健脑复方软胶囊的方法，该方法包括:在惰性气氛中，将刺五加提取物、混合磷脂和植物油依次溶于泊洛沙姆的乙醇液中，除去乙醇得到软胶囊的内容物，将该内容物封装于软胶囊囊壳中，其中，相对于100重量份的刺五加提取物，混合磷脂的用量为90-240重量份，植物油的用量为140-300重量份，泊洛沙姆的用量为10-50重量份，其中，所述混合磷脂由动物脑提取物和补加成分组成，动物脑提取物与补加成分的重量比为1:2-6，且所述补加成分包括磷脂酰丝氨酸(PE)和/或二亚油酰磷脂酰胆碱(DIPC);所述植物油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量％。
[0015]第二方面，本发明提供了由第一方面所述的方法制得的含刺五加提取物的健脑复方软胶囊。
[0016]本发明的健脑复方软胶囊能够有效地用于辅助改善记忆、辅助改善睡眠和预防老年痴呆症，保健效果较佳且无异味。而且，磷脂酰丝氨酸在本发明的健脑复方软胶囊中能够稳定存在。
[0017]本发明的其他特征和优点将在随后的
【具体实施方式】
[0018]以下对本发明的【具体实施方式】进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的【具体实施方式】仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
[0019]本发明中，术语“含刺五加提取物的健脑复方软胶囊”、“健脑复方软胶囊”和“软胶
囊”可互换使用。
[0020]本发明提供的制备含刺五加提取物的健脑复方软胶囊的方法包括:在惰性气氛中，将刺五加提取物、混合磷脂和植物油依次溶于泊洛沙姆的乙醇液中，除去乙醇得到软胶囊的内容物，将该内容物封装于软胶囊囊壳中，其中，相对于100重量份的五加科植物提取物，混合磷脂的用量为90-240重量份，植物油的用量为140-300重量份，泊洛沙姆的用量为10-50重量份，其中，所述混合磷脂由动物脑提取物和补加成分组成，动物脑提取物与补加成分的重量比为1:2-6，且所述补加成分包括磷脂酰丝氨酸和/或二亚油酰磷脂酰胆碱；所述植物油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量％ (如70-95重量％)。
[0021]根据本发明，可以利用常规的溶解方式或仪器将上述各个成分溶于泊洛沙姆的乙醇溶液中，例如，借助高速剪切混合设备，如乳化机、胶体磨、均质机和分散机等。
[0022]根据本发明，所述刺五加提取物优选为紫丁香苷含量不低于2重量％ (如2-8重量％)的提取物。也可以选用各种含紫丁香苷的五加科植物(如细柱五加、红毛五加和刺五加等)。优选情况下为刺五加提取物。而且，可以采用各种常规的提取方法制备刺五加提取物，控制所述紫丁香苷含量不低于2重量％ (如2-8重量％)即可，本领域技术人员能够进行适当的选择，在此不再赘述。
[0023]刺五加提取物的制备方法可以为乙醇回流提取法，可以参照《中华人民共和国药典》“关于刺五加浸膏提取方法”进行制备。例如，将60g刺五加粗粉加入到烧瓶(如1000mL烧瓶)中，取75体积％的乙醇溶液420ml，水浴锅上连续回流提取12h，在低温下静置24h，过滤提取液，浓缩，并干燥至质量恒定，得紫丁香苷含量为3重量％刺五加提取物约3g。[0024]本发明中，各种常规方法获得的动物脑提取物均可以用于本发明，优选情况下，所述动物脑提取物中的磷脂酰胆碱(PC)含量不低于12重量％ (如12-20重量％)，且磷脂酰乙醇胺(PE)含量不低于35重量％ (如35-45重量％)。更优选地，所述动物脑提取物为鸽脑提取物、猪脑提取物和鸡脑提取物中的至少一种。
[0025]例如，动物脑提取物的制备方法可以为:在冰冻状态下取出动物的脑组织，用温度在0°C以下的丙酮或乙醇浸泡30分钟，丙酮或乙醇的用量为2.5L/kg脑组织(以湿重计)，研碎，固液分离，将所得液相进行浓缩，除去丙酮(37-40°C)或乙醇(45-50°C)，浓缩物用100mL/kg脑组织的石油醚(等级为60-90°C )分3次萃取，收集石油醚萃取液，去除石油醚后与固液分离所得固相合并，干燥，得动物脑提取物。
[0026]本发明中，采用动物脑提取物和补加成分作为本发明的混合磷脂能够获得更为优异的改善记忆、辅助改善睡眠或预防老年痴呆症的效果。市售的各种常用于保健品中的磷脂酰丝氨酸(PS)或二亚油酰磷脂酰胆碱(DIPC)都可以用于本发明，需要说明的是，市售的磷脂酰丝氨酸或二亚油酰磷脂酰胆碱通常并非纯物质，而还含有磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰甘油等成分(磷脂酰丝氨酸含量不低于50重量％，二亚油酰磷脂酰胆碱含量不低于30重量％)，但是这些成分并不会对本发明的健脑复方软胶囊的保健效果产生影响，因此，可以直接用于制备本发明的健脑复方软胶囊。
[0027]根据本发明，不饱和脂肪酸含量不低于70重量％的植物油均可以用于本发明，但优选情况下，所述植物油为罂粟籽油、橄榄油、月见草油、黑加仑籽油和葡萄籽油中至少一种。可以通过常规的压榨法、浸出法、超临界萃取法或水代法从植物中获取上述植物油，且这些方法均为本领域技术人员所熟知，在此不再赘述。 [0028]本发明中，泊洛沙姆优选为泊洛沙姆188。泊洛沙姆188是由环氧丙烷和丙二醇反应，形成聚氧丙烯二醇，然后加入环氧乙烷而形成的嵌段共聚物，可以通过商购获得。
[0029]根据本发明，可以采用常规的方法制备泊洛沙姆的乙醇溶液，为了使泊洛沙姆溶解更为充分，泊洛沙姆的乙醇溶液的方法优选为:在60-70 V下，将泊洛沙姆溶于乙醇中。泊洛沙姆的乙醇溶液中泊洛沙姆的浓度可以为0.05-0.lg/mL。
[0030]根据本发明，为了增强健脑复方软胶囊的抗氧化性能，从而延长保质期，所述方法优选还包括往体系中添加抗氧化剂。所述抗氧化剂可以为本领域常用的各种能够抗氧化的物质，更优选地，所述抗氧化剂为维生素E。
[0031]根据本发明，所述惰性气氛可以由各种常规的惰性气体提供，例如，氮气。
[0032]本发明还提供了由上述方法制得的含刺五加提取物的健脑复方软胶囊。
[0033]本发明中，所述软胶囊囊壳可以采用常规的方式制备，例如，将明胶、纯净水、甘油、山梨醇、甘氨酸和二氧化钛加入适量色素(柠檬黄或亮蓝)进行化胶获得。继而可以采用常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸、制成半成品，包装。
[0034]在实际使用时，本发明的健脑复方软胶囊的服用量可以根据服用者的具体身体状况而定，以80kg重的人为例，每天口服2-3次，每次600-900mg。
[0035]以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，刺五加提取物参照本说明上述刺五加浸膏提取方法制得，紫丁香苷含量为3重量％;鸽脑提取物(PC含量为15重量％且PE含量为40重量％)、猪脑提取物(PC含量为15重量％且PE含量为35重量％)、鸡脑提取物(PC含量为15重量％且PE含量为35重量％)均购自长春市现代生物技术有限责任公司；磷脂酰丝氨酸、二亚油酰磷脂酰胆碱购自长春市现代生物技术有限责任公司(磷脂酰丝氨酸的含量为50重量％，二亚油酰磷脂酰胆碱含量为45重量％);罂粟籽油购自上海万代制药有限公司，意大利进口欧丽薇兰牌橄榄油购自长春市沃尔玛超市；月见草油、黑加仑籽油、葡萄籽油购自长春市现代生物技术有限责任公司；泊洛沙姆购自长春市现代生物技术有限责任公司；FAR-25型高剪切分散乳化机为上海弗鲁克公司制造，使用转速lOOOOrpm。
[0036]实施例1
[0037]按1000粒计，取药用乙醇300mL水浴加热至60°C，加入泊洛沙姆20g至完全溶解；在氮气保护下，依次加入80g刺五加提取物、100g磷脂酰丝氨酸、20g鸽脑提取物、165g罂粟籽油(不饱和脂肪酸含量为85重量％)和0.2g维生素E，高速剪切至溶解；减压去除乙醇和水分，作为软胶囊的内容物待用；
[0038]按照如下重量比配制软胶囊囊壳:明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到健脑复方软胶囊S-1 (无异味)。
[0039]实施例2
[0040]按1000粒计，取药用乙醇300mL水浴加热至70°C，加入泊洛沙姆20g至完全溶解；在氮气保护下，依次加入100g刺五加提取物、100g磷脂酰丝氨酸、IOg鸽脑提取物、165g罂粟籽油(不饱和脂肪酸含量为85重量％)和0.2g维生素E，高速剪切至溶解；减压去除乙醇和水分，作为软胶囊的内容物待用；
[0041]按照如下重量比配制软胶囊囊壳:明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08: 0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到健脑复方软胶囊S-2 (无异味)。
[0042]实施例3
[0043]按1000粒计，取药用乙醇300mL水浴加热至65°C，加入泊洛沙姆20g至完全溶解；在氮气保护下，依次加入60g刺五加提取物、120g磷脂酰丝氨酸、20g鸽脑提取物、180g罂粟籽油(不饱和脂肪酸含量为85重量％)和0.2g维生素E，高速剪切至溶解；减压去除乙醇和水分，作为软胶囊的内容物待用；
[0044]按照如下重量比配制软胶囊囊壳:明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到健脑复方软胶囊S-3 (无异味)。
[0045]实施例4-7
[0046]按照实施例1的方法制备健脑复方软胶囊S-4至S-7，不同的是，将“罂粟籽油”分别替换为橄榄油(不饱和脂肪酸含量为80重量％)、月见草油(不饱和脂肪酸含量为88重量％)、黑加仑籽油(不饱和脂肪酸含量为85重量％)、和葡萄籽油(不饱和脂肪酸含量为80重量％)，获得的健脑复方软胶囊均无异味。
[0047]实施例8-9
[0048]按照实施例1的方法制备健脑复方软胶囊S-8至S-9，不同的是，将鸽脑提取物分别替换为猪脑提取物和鸡脑提取物，获得的健脑复方软胶囊均无异味。
[0049]实施例10
[0050]按照实施例1的方法制备健脑复方软胶囊S-10，不同的是，将磷脂酰丝氨酸替换为二亚油酰磷脂酰胆碱(含量为45重量％)，获得的健脑复方软胶囊无异味。
[0051]对比例I
[0052]按照实施例1的方法制备健脑复方软胶囊S-D1，不同的是，刺五加提取物的用量为120g，罂粟籽油的用量为105g。
[0053]测试例I
[0054]本测试例用来说明本发明的健脑复方软胶囊在辅助改善睡眠中的作用。
[0055]本测试例按照中国【保健食品功能学评价程序和检验方法】进行。
[0056]实验动物:成年的ICR雄性小鼠(18_22g)，购自吉林大学动物中心，清洁级，动物许可证编号SCXK2007-0003。所有动物在实验期间饲养于屏蔽级动物房，温度25°C，湿度50%-60%，每日明暗室各12小时，通风良好，标准饲料，自由饮水。
[0057]实验方法:将ICR雄性小鼠分成实验组、对照组和空白对照组，每组8只小鼠。实验组服用实施例1-3和对比例I制得的软胶囊，对照组注射巴比妥钠，空白对照组不服用任何保健品。30天后，测定各组小鼠的睡眠时长，结果如表1和表2所示。
[0058]睡眠以翻正反射消失为指标。当小鼠置于仰卧位时，能立即翻正身位。
[0059]如超过30-60秒不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间。
[0060]表1
[0061]