专利名称：液态发酵真菌α-淀粉酶及其制备方法来自微生物源的a-淀粉酶(a-l， 4-葡聚糖-4-葡糖苷水解酶酶，EC3.2丄1)是 一类可以催化淀粉和其它直链或支链1.4-葡糖苷寡糖和多糖水解的酶。热稳定性高，能 催化淀粉等大分子中的a-l， 4键段键水解，产生分子量较小的麦芽糖糊精。完成淀粉 段键液化，因此也被称为液化型淀粉酶。 传统的淀粉糖化工业普遍采用双酶法水解淀粉制糖。即先用a-淀粉酶将淀粉 液化，再加糖化酶糖化来生产葡萄糖。目前市售a-淀粉酶的最适PH为6.5-9.0，而糖化 酶最适pH为4.5左右；显然，pH 4.0-5.0的淀粉浆须经历两次pH调节过程。这不仅使 得水解工艺操作变得繁琐，而且外源离子的引入，减低了酶的活性、影响了糖的收率、 加重了系统循环水及废水处理负担，不利于环境保护，同时增加了生产成本。 真菌a -淀粉酶是第一个应用于面包制作的微生物酶，它取代了麦芽是由于麦芽 中的淀粉酶含量不稳定，而且含有蛋白水解酶，真菌a-淀粉酶具有更稳定的活性而不 含蛋白酶活性，在食品加工行业中的应用效果尤为独特，不可替代。市场需求量增长迅 速，供不应求。 真菌a -淀粉酶是由米曲霉(Aspergillus oryzae)发酵产生的一种a -淀粉酶(Novo Nordisk，丹麦生产的Fungamyl)酶的最适作用温度为55t:左右；最适pH 5.5-7.0;其水解淀粉的产物主要是麦芽糖和一些低聚糖及少量的葡萄糖。适用于淀粉糖浆、低聚糖、啤 酒、烘焙食品、面制品、面粉加工等工艺过程。但其热稳定性较低，不适用于较高温度 的处理过程，例如，酿造工业用的糖浆，如果在6(TC左右进行，加入酶量必须加倍，在 55t:下有可能会出现污染问题。另外，其最适pH在5.5-7.0，而不在4.5左右，故必须调 节pH。 —种最适pH较低条件下，热稳定性较高的真菌a-淀粉酶及其设备投资省、生 产能力高、工艺操作方便、酶产率高、成本较低的液态发酵真菌a-淀粉酶的制备方法。 是人们所期待的。
本发明的目的在于避免上述现有技术中的不足之处，而提供一种最适pH较低条 件下，热稳定性较高，适应性强的真菌a-淀粉酶。 本发明的目的还在于提供一种设备投资省、生产能力高、工艺操作方便、酶产率高、成本较低的液态发酵真菌a-淀粉酶的制备方法。 本发明的目的可以通过如下措施来达到 本发明的液态发酵真菌a -淀粉酶，其特征在于a.酶学特性最适pH 6.0，稳定pH 5.5-7.0 ;最适作用温度为50°C -60°C ;b.选用米曲霉菌种(Aspergillus oryzae)保藏于CICC编号M;3e为产酶菌种，采用液态发酵工艺制备，达到如下工艺技术指标 ①发酵产酶水平27200u/ml ; ②压滤提取、澄清过滤、超滤、精滤后，液体酶回收率^80%，达到食品级卫生 标准。 发明人选用的米曲霉菌种(Aspergillus oryzae)保藏于CICC编号2436菌种，与自 主开发的液态发酵工艺巧妙结合，产生了意想不到的技术效果，从而完成了本发明的任务。 本发明的目的还可以通过如下措施来达到 本发明的液态发酵真菌a-淀粉酶，其特征在于b中所述之米曲霉菌种 (Aspergillus oryzae)，保藏于CICC编号2436产酶菌种以钴60射线、超量紫外诱变处理， 能够赋予其遗传性状稳定好、产酶速度快、产酶水平高等优良特性。
本发明的液态发酵真菌a -淀粉酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤
a.菌种培养 培养基包括按照重量份数计的原料组分 麦芽糖浆0-6 蛋白胨1 淀粉 0-5 麦芽糊精0-6 玉米桨2 豆饼粉 1.2-2.2 氯化钙 0.05 硫酸铵0.33 ; 按照以上配方准确称量培养基原料计10-12重量份，加水至100重量份，调节pH 5-6， 121。C灭菌30-35分钟，冷却至30°C-35°C ，接入米曲霉(Aspergillus oryzae)，保藏于 CICC编号2436菌种，得液体菌种预培养液；控制温度30°C -40°C，通风量45-60m3/h， 压力0.05Mpa-0.08Mpa，培养28-32小时，得液体菌种，备液态发酵用；
b.液态发酵 包括如下按照重量份数计的原料组分 淀粉 0-9 豆饼粉 3-4.5 麦芽糊精0-8 玉米桨 2 磷酸二氢钾 0.5 氯化钙 0.05 硫酸铵 0.33 ; 按照以上配方准确称量发酵原料原料计10-12重量份，投入发酵罐，加水至IOO
5重量份，调节pH5-6， 12rC灭菌30-35分钟，冷却至30°C-35°C ，接入步骤a制备的米曲 霉(Aspergillus oryzae)，保藏于CICC编号2436菌种培养液，控制温度30°C-40°C ，通风 量450-600m3/11，压力0.05Mpa-0.08Mpa，搅拌下培养100-120小时，得发酵液；发酵水平 7200u/ml ;
c.提取
①压滤提取 在步骤b制备的发酵液中加入硅藻土，搅拌下，混匀，然后压滤，固液分离， 得提取液，备用；
②澄清过滤 步骤①制备的提取液，计量体积、取样测定酶活力并调节pH至5.2士0.1，加入 821#硅藻土，澄清过滤，得澄清过滤液，备用；
③超滤、精滤，pH精调 将步骤②制备的澄清过滤液，超滤、精滤后，用稀释后的柠檬酸或纯碱精调pH
至5.2±0.1 ; 调配灌装 按产品规格的要求，进行酶活力的调配，灌装，提取收率280%。 本发明的液态发酵真菌a-淀粉酶，其特征在于适用于淀粉糖浆、低聚糖、啤
酒、烘焙食品、面制品、面粉加及工酿造工业等工艺过程。 本发明的液态发酵真菌a -淀粉酶及其制备方法相比现有技术具有突出的实质性 特点和显著的进步，并能产生如下技术效果 l.提供了一种最适pH较低条件下，热稳定性较高、适应性强的真菌a-淀粉酶
A 口 广PR 5 2.提供了一种设备投资省、生产能力高、工艺操作方便、酶产率高、成本较低 的液态发酵真菌a-淀粉酶的制备方法； 3.为市场急需的真菌a -淀粉酶的生产提供了技术支持； 4.发酵水平27200u/ml、液体酶回收率^80%，符合食品级卫生标准； 5.适用于淀粉糖浆、低聚糖、啤酒、烘焙食品、面制品、面粉加及工酿造工业
等工艺过程。

本发明下面将结合实施例作进一步详述 实施例l按照本发明的制备方法，制备本发明的液态发酵真菌a-淀粉酶，包括
如下步骤 a.菌种培养 培养基包括按照重量份数计的原料组分
麦芽糖浆6
蛋白胨 1
玉米桨2
豆饼粉 1.2
氯化钙 0.05
硫酸铵0.33 ; 按照以上配方准确称量培养基原料计10-12重量份，加水至100重量份，调节pH 5-6， 121。C灭菌30-35分钟，冷却至30°C-35°C ，接入米曲霉(Aspergillus oryzae)，保藏于 CICC编号2436菌种，得液体菌种预培养液；控制温度30°C -40°C，通风量45-60m3/h， 压力0.05Mpa-0.08Mpa，培养28-32小时，得液体菌种，备液态发酵用；
b.液态发酵 包括如下按照重量份数计的原料组分 淀粉 6 豆饼粉 3 玉米桨 2 磷酸二氢钾 0.5 氯化钙 0.05 硫酸铵 0.33 ; 按照以上配方准确称量发酵原料原料计10-12重量份，投入发酵罐，加水至IOO 重量份，调节pH5-6， 12rC灭菌30-35分钟，冷却至30°C-35°C ，接入步骤a制备的米曲 霉(Aspergillus oryzae)，保藏于CICC编号2436菌种培养液，控制温度30°C-40°C，通风 量450-600m3/11，压力0.05Mpa-0.08Mpa，搅拌下培养100-120小时，得发酵液；发酵水平 27200u/ml ;
C.提取
①压滤提取 在步骤b制备的发酵液中加入硅藻土，搅拌下，混匀，然后压滤，固液分离， 得提取液，备用；
②澄清过滤 步骤①制备的提取液，计量体积、取样测定酶活力并调节pH至5.2士0.1，加入 821#硅藻土，澄清过滤，得澄清过滤液，备用；
③超滤、精滤，pH精调 将步骤②制备的澄清过滤液，超滤、精滤后，用稀释后的柠檬酸或纯碱精调pH
至5.2±0.1 ; 调配灌装 按产品规格的要求，进行酶活力的调配，灌装，提取收率^80%，符合食品级卫 生标准。 实施例2 按照实施例1的方法和步骤，按照如下配方，制备本发明的液态发酵真菌a-淀 粉酶 a.菌种培养 培养基包括按照重量份数计的原料组分
蛋白胨 1
淀粉 5
玉米桨 2 豆饼粉 1.2 氯化钙 0.05 硫酸铵 0.33 ; b.液态发酵 包括如下按照重量份数计的原料组分 淀粉 9 豆饼粉 3 玉米桨 2 磷酸二氢钾 0.5 氯化f丐 0.05 硫酸铵 0.33 ; 发酵水平27200u/ml ;液体酶回收率^80%，符合食品级卫生标准。 实施例3 按照实施例1的方法和步骤，按照如下配方，制备本发明的液态发酵真菌a-淀 粉酶 a.菌种培养 培养基包括按照重量份数计的原料组分 蛋白胨1 麦芽糊精6 玉米桨2 豆饼粉 2.2 氯化钙 0.05 硫酸铵0.33; b.液态发酵 包括如下按照重量份数计的原料组分 麦芽糊精 8 豆饼粉 4.5 玉米桨 2 磷酸二氢钾 0.5 氯化钙 0.05 硫酸铵 0.33 ; 发酵水平27200u/ml ;液体酶回收率^80%，符合食品级卫生标准。
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本发明是一种液态发酵真菌α-淀粉酶及其制备方法，属于来自微生物源的α-淀粉酶。其特征在于a.酶学特性最适pH 6.0，稳定pH 5.5-7.0；最适作用温度为50℃-60℃；b.选用米曲霉菌种(Aspergillus oryzae)保藏于CICC编号2436为产酶菌种，采用液态发酵工艺制备，达到如下工艺技术指标①发酵产酶水平≥7200u/ml；②压滤提取、澄清过滤、超滤、精滤后，液体酶回收率≥80％，达到食品级卫生标准。提供了一种最适pH较低条件下，热稳定性较高、适应性强的真菌α-淀粉酶产品；及其设备投资省、生产能力高、工艺操作方便、酶产率高、成本较低的液态发酵真菌α-淀粉酶的制备方法；符合食品级卫生标准；适用于淀粉糖浆、低聚糖、啤酒、烘焙食品、面制品、面粉加工及酿造工业。