专利名称：肠道微生态制剂及其制备方法益生菌(Probiotics)一词来源于拉丁文，意思为“有利于生命(for life)。”在20世纪60年代，由于抗生素的广泛使用以及畜牧业中抗生素应用引起的副作用，人们开始注意到一些活菌制剂在改善动物健康中的作用。Lilly和Stillwell最初创造该词时，是用来指一种原生动物分泌的用于刺激另一种原生动物(Protozoan)生长的物质。1974年Parker则用它来描述那些能通过促进动物肠道菌群平衡从而改善动物健康的动物饲料制剂，包括各种生物或化学物质，如抗生素等。1992年，Havenaar等人将Probiotics定义为“由单一或多种微生物组成的活菌制剂，当应用于人或动物后，能通过改善宿主土著菌群的组成，从而促进人或动物的健康”。该定义从多方面发展了益生菌这一概念。首先，它不再将益生菌的作用仅局限于肠道菌群，还有可能作用于其他部位的菌群组成，例如呼吸道、泌尿生殖道和皮肤等部位；其次，它首次明确地提出了益生菌在人体中应用的概念；第三，益生菌可以由一种以上的微生物组成。后来，为了区分普通的酸奶菌种(或酸奶产品)与益生菌及其产品，Sehrezenmier等(2001)将Huis in’t Veld和Havenaar(1992)所提出的Probiotics定义进行了修订，修订后的“益生菌”的定义为含有足够数量活菌、组成明确的微生物制剂或产品，能通过定殖作用改变宿主某一部位菌群组成、从而产生有利于宿主健康作用。该定义的不足之处在于仍然没有区分特定的微生物与产品的具体形式。目前采用以下的定义通过定殖作用改变宿主某一部位菌群的组成、从而产生有利于宿主健康作用的单一或组成明确的混合微生物。Probiotics(益生性或益生作用)则是指某种微生物制剂或发酵制品通过调节宿主黏膜与系统免疫功能以及改善肠道营养与菌群平衡对宿主所产生的有益的生理作用。尽管部分乳杆菌和双歧杆菌不能以活菌状态到达肠道，并在那里定殖，但其细胞壁成份仍可以发挥抗瘤变和免疫调节作用，例如热灭活的Lb.casei LC9018仍对人体健康具有促进作用。1907年Metchmikoff根据他对保加利亚杆菌(Bulgarianbacillus)的研究结果，认为经常食用发酵乳有利于人体的健康，该菌与现代酸奶生长中所用的Lactobaillus delbruekii subsp.bulgaricus非常相近。至今为止，乳杆菌仍然是应用最广泛的益生菌。目前常用作益生菌的乳杆菌有L.delbruekiisubsp.bulgaricus、Lb.acidophilus、Lb.casei、Lb.fermentum、Lb.reuteri、Lb.rhamnosus、Lb.plantarum、Lb.lactis、Lb.gasseri、Lb.johnsonii等。将链球菌以酸奶的形式用作益生菌，则始于Fuller(1993年)，作为酸奶发酵剂菌种之一的S.thermophilus。也是常用的益生性乳酸菌之一。具有益生作用的乳酸菌通常都是肠道细菌，它们被认为具有改善人体胃肠消化道微生态环境的功能。益生作用的范围可以分为营养、生理作用和抗菌作用等三个方面。在这些方面研究及观察到的作用直接导致了各种含有乳酸菌的食品及饲料在人和动物中的应用。乳酸菌还具有潜在免疫辅助作用，口服乳酸菌可以激发黏膜和系统性免疫反应。双歧杆菌和嗜酸乳杆菌是人体中固有的有益菌，双歧杆菌和嗜酸乳杆菌占人体肠道内益生菌的95％以上，它们主要是通过维护肠道的微生态平衡而起到促进人体健康的作用的。二者在肠道中的作用是相似的，但存在的部位不同，嗜酸乳杆菌在肠道的上半部，而双歧杆菌在肠道的下半部。因此，双歧杆菌和嗜酸乳杆菌相辅相成，共同维护着整个肠道的健康。益生菌综合起来具有以下几方面的作用(1)提高免疫力双歧杆菌和嗜酸乳杆菌可产生大量的免疫球蛋白。从而激活机体的免疫细胞，使得外在菌难以留存体内，达到免疫调节作用。(2)改善胃肠道功能双歧杆菌和嗜酸乳杆菌在肠道粘膜表面形成保护屏障，抵御有害菌对肠道粘膜的侵袭破坏，能产生乳酸和醋酸等酸性物质，造成不利于有害菌生长的环境，抑制有害菌的生长、繁殖，起到调节肠道菌群的作用。(3)营养作用双歧杆菌和嗜酸乳杆菌在人体肠道内发酵后可产生乳酸和醋酸，能提高钙、磷、铁的利用率，促进铁和维生素D的吸收，产生维生素K及维生素B，产生乳糖酶帮助消化乳糖。(4)通肠润便双歧杆菌和嗜酸乳杆菌在肠内可产生大量的短链脂肪酸等酸性物质，能刺激肠道蠕动，增加粪便湿度，起到通便的效果。(5)恢复因使用抗生素后而被破坏的肠道正常微生物菌群抗生素是引起肠道菌群失调的重要因素。抗生素在杀灭有害菌的同时，也杀灭了很多的有益菌，及时补充双岐杆菌和嗜酸乳杆菌，对帮助肠道恢复菌群平衡、提高营养吸收能力是非常必要的。
(6)降低胆固醇、防止动脉硬化。
(7)抑制内毒素的产生，延缓衰老。
(8)抑制肠道中致癌因子的产生，预防肿瘤的发生。
(9)抗辐射等。
因此，肠道微生态制剂的研究已成为当前世界微生物学领域一个研究重点，益生菌产品的研究和开发会给人类的健康带来积极的促进意义，因此具有重要的经济价值和社会效益。


本发明的目的是这样实现的本发明中所涉及的百分比均为重量百分比。
每100g产品中含有两歧双歧杆菌1.0g-20.0、嗜酸乳杆菌1.0-25.0g、嗜热链球菌1.0-25.0g、德氏乳杆菌保加利亚亚种1.0-25.0g、酵母菌1.0-35.0g以及低聚异麦芽糖、低聚果糖、多种维生素。
每100g产品中还可以还有枯草芽胞杆菌1.0-25.0g。
每100g产品中还可以还有纳豆芽胞杆菌1.0-25.0g。
本发明的产品是采用如下方法来制备的1、两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养培养基配方玉米浆0.1-15.0克、大豆肽0.1-15.0克、西红柿汁1.0％-35％、乳清粉0.1-15.0克、大豆浸汁1.0％-35％、葡萄糖0.5-15.0克、乳糖0.5-15.0克、胰酶水解酪蛋白0.1-15.0克、牛肉膏0.1-20.0克、酵母膏0.1-25.0克、柠檬酸钠0.01-5.0克、醋酸钠0.01-5.5克、磷酸氢二钾0.01-5.5克、硫酸镁0.1-2.5克、L-半胱氨酸盐酸盐0.001-2.5克、吐温-80 0.1-10.0毫升、加水定容至1000毫升，pH5.0-7.5，105℃灭菌15分钟。
首先分别培养试管斜面菌种，斜面菌种培养基中加入2％的琼脂，培养10-24小时，然后接入三角瓶液体培养基中进行分别培养，20℃-45℃培养10-72小时，接种量为0.5％-25％，再逐级进行扩大培养，然后再分别进行大罐发酵培养，20℃-45℃培养10-72小时。
2、枯草芽胞杆菌、纳豆芽胞杆菌的培养培养基配方大豆肽0.1-15.0克、葡萄糖0.1-15.0克、牛肉膏0.1-15.0克、蛋白胨0.1-25克、玉米浆0.1-15.0克、氯化钠0.05-5.0克、水1000毫升，pH5.0-7.5，105℃灭菌15分钟。
首先分别培养试管斜面菌种，斜面菌种培养基中加入2％的琼脂，培养16-24小时，然后接入三角瓶液体培养基中进行分别培养，20℃-45℃培养18-72小时，接种量为0.5％-25％，再逐级进行扩大培养，然后再分别进行大罐发酵培养，20℃-45℃培养18-72小时。
3、培养结束后，用离心机3500-8000r/min进行离心，用无菌水洗涤1-2次，得到活性菌泥。
4、保护液的制备称取谷氨酸钠0.1-15.0克、乳糖0.1克-20.0克、甘油0.1-25.0克、聚乙烯吡咯烷酮0.1-20.0克、Vc 0.01-15.0克、水100mL，加热搅拌使其溶化，然后，105℃温度灭菌15分钟，冷却至10℃-35℃，此溶液为保护液。
5、活性菌泥—保护液的制备在无菌操作条件下，称取一定量的活性菌泥加入保护液中，活性菌泥保护液应为0.5∶1-8∶1，彻底搅拌均匀，此为A液。
6、微胶囊包埋剂的配制称取海藻酸钠0.1-15.0克、κ-卡拉胶0.1-10.0克，加水100毫升，搅拌10分钟，静止2-6小时，105℃温度灭菌15分钟，冷却至10℃-35℃，此为包埋液。
7、包埋固化液的制备称取氯化钙0.1-15.0克、氯化钾0.1-10.0克、加水100毫升，彻底溶解，105℃温度灭菌15分钟，冷却至10℃-35℃，此为包埋固化液。
8、在无菌操作条件下，同时称取一定量的A液和包埋液，A液包埋液为0.1∶1-15∶1，彻底搅拌均匀，此为B液。
将B液灌入包埋喷射器中，高压注入固化液中，并需要不断搅拌，B液与包埋固化液的比例按1∶1-1∶5，经2-8小时的包埋固化处理，过滤，并用无菌水洗涤1次。然后，再采用冷冻干燥技术进行冷冻干燥，制成单一的粉末状活性微生物菌粉，必要时再进行粉碎。
9、活性微生态制剂的配制将上述微生物活性菌粉，按比例混合，再配以低聚异麦芽糖、多种维生素及其他益生元制成活性微生态制剂。
此产品能提高肠道中的益生菌的数量，改善微生态环境，防止有害菌的滋生，增强肠道的抗病能力，润肠通便，保证肠道处于一种健康状态，促进人体键健康。本制备方法能更有效的保证益生菌活菌的数量和益生菌的活性以及益生菌的保藏时间。

下面举例对本发明作更详细的描述配方1(含量g/100g)两歧双歧杆菌1.0g、嗜酸乳杆菌1.0g、嗜热链球菌2.0g、保加利亚乳杆菌2.5g、酵母菌3.5g、低聚异麦芽糖50.5g、奶粉38.15g、VB12mg、VB22mg、VB62mg、VC200mg、叶酸500μg、蛋白糖0.01g、草莓香精0.04g。
配方2两歧双歧杆菌1.0g、嗜酸乳杆菌2.5g、嗜热链球菌2.5g、保加利亚乳杆菌2.5g、枯草芽胞杆菌2.0g、酵母菌6.5g、低聚异麦芽糖50.5g、大豆蛋白粉10.5g、食用纤维素10.0g、VB12mg、VB22mg、β-胡萝卜素2mg、VE2mg、VC500mg、叶酸500μg、木糖醇10.5g、草莓香精0.04g。
配方3纳豆芽胞杆菌2.5g、两歧双歧杆菌1.0g、嗜酸乳杆菌2.0g、嗜热链球菌2.0g、保加利亚乳杆菌2.5g、枯草芽胞杆菌2.0g、酵母菌6.5g、低聚异麦芽糖30.5g、低聚果糖20.0g、大豆蛋白粉10.0g、食用纤维素10.0g、VB12mg、VB22mg、VE 2mg、VC 500mg、叶酸500μg、木糖醇10.5g、草莓香精0.04g。
配方4两歧双歧杆菌1.0g、嗜酸乳杆菌2.0g、嗜热链球菌2.0g、保加利亚乳杆菌2.5g、枯草芽胞杆菌2.0g、酵母菌6.5g、低聚异麦芽糖20.0g、低聚果糖10.0g、大豆蛋白粉40.5g、赖氨酸1.5g、VB12mg、VB22mg、VB62mg、VC 500mg、叶酸500μg、CaCO35mg、ZnSO42mg、木糖醇10.5g草莓香精0.04g。
配方5纳豆芽胞杆菌15g、两歧双歧杆菌5g、嗜酸乳杆菌10g、嗜热链球菌10g、保加利亚乳杆菌15g、枯草芽胞杆菌10g、酵母菌15g、低聚异麦芽糖4.5g、低聚果糖2.0g、大豆蛋白粉2.0g、食用纤维素1.0g、VB12mg、VB22mg、VE2mg、VC500mg、叶酸500μg、木糖醇10.5g、草莓香精0.04g。
产品中活菌总数为2.0×104cfu/g-2.0×1010cfu/g，-18℃-30℃保存，保存期为3-18个月。
本发明产品是采用下述的方法来制备的1、两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养培养基配方玉米浆0.1-15.0克、大豆肽0.1-15.0克、西红柿汁1.0％-35％、乳清粉0.1-15.0克、大豆浸汁1.0％-35％、葡萄糖0.5-15.0克、乳糖0.5-15.0克、胰酶水解酪蛋白0.1-15.0克、牛肉膏0.1-20.0克、酵母膏0.1-25.0克、柠檬酸钠0.01-5.0克、醋酸钠0.01-5.5克、磷酸氢二钾0.01-5.5克、硫酸镁0.1-2.5克、L-半胱氨酸盐酸盐0.001-2.5克、吐温-800.1-10.0毫升、加水定容至1000毫升，pH5.0-7.5，105℃灭菌15分钟。
首先分别培养试管斜面菌种，斜面菌种培养基中加入2％的琼脂，培养10-24小时，然后接入三角瓶液体培养基中进行分别培养，20℃-45℃培养10-72小时，接种量为0.5％-25％，再逐级进行扩大培养，然后再分别进行大罐发酵培养，20℃-45℃培养10-72小时。
2、枯草芽胞杆菌、纳豆芽胞杆菌的培养培养基配方大豆肽0.1-15.0克、葡萄糖0.1-15.0克、牛肉膏0.1-15.0克、蛋白胨0.1-25克、玉米浆0.1-15.0克、氯化钠0.05-5.0克、水1000毫升，pH5.0-7.5，105℃灭菌15分钟。
首先分别培养试管斜面菌种，斜面菌种培养基中加入2％的琼脂，培养16-24小时，然后接入三角瓶液体培养基中进行分别培养，20℃-45℃培养18-72小时，接种量为0.5％-25％，再逐级进行扩大培养，然后再分别进行大罐发酵培养，20℃-45℃培养18-72小时。
3、培养结束后，用离心机3500-8000r/min进行离心，用无菌水洗涤1-2次，得到活性菌泥。
4、保护液的制备称取谷氨酸钠0.1-15.0克、乳糖0.1克-20.0克、甘油0.1-25.0克、聚乙烯吡咯烷酮0.1-20.0克、Vc 0.01-15.0克、水100mL，加热搅拌使其溶化，然后，105℃温度灭菌15分钟，冷却至10℃-35℃，此溶液为保护液。
5、活性菌泥—保护液的制备在无菌操作条件下，称取一定量的活性菌泥加入保护液中，活性菌泥保护液应为0.5∶1-8∶1，彻底搅拌均匀，此为A液。
6、微胶囊包埋剂的配制称取海藻酸钠0.1-15.0克、κ-卡拉胶0.1-10.0克，加水100毫升，搅拌10分钟，静止2-6小时，105℃温度灭菌15分钟，冷却至10℃-35℃，此为包埋液。
7、包埋固化液的制备称取氯化钙0.1-15.0克、氯化钾0.1-10.0克、加水100毫升，彻底溶解，105℃温度灭菌15分钟，冷却至10℃-35℃，此为包埋固化液。
8、在无菌操作条件下，同时称取一定量的A液和包埋液，A液包埋液为0.1∶1-15∶1，彻底搅拌均匀，此为B液。
将B液灌入包埋喷射器中，高压注入固化液中，并需要不断搅拌，B液与包埋固化液的比例按1∶1-1∶5，经2-8小时的包埋固化处理，过滤，并用无菌水洗涤1次。然后，再采用冷冻干燥技术进行冷冻干燥，制成单一的粉末状活性微生物菌粉，必要时再进行粉碎。
9、活性微生态制剂的配制将上述微生物活性菌粉，按上述4个配方中的任何一个比例混合，再配以低聚异麦芽糖、低聚果糖、多种维生素及其他益生元制成活性微生态制剂。
培养基的具体成份可以选择1、两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养培养基配方玉米浆3.0克、大豆肽0.5克、西红柿汁15％、乳清粉5.0克、大豆浸汁10％、葡萄糖3.0克、乳糖2.0克、胰酶水解酪蛋白2.0克、牛肉膏10.0克、酵母膏5.0克、柠檬酸钠0.02克、醋酸钠0.1克、磷酸氢二钾0.5克、硫酸镁0.2克、L-半胱氨酸盐酸盐2.5克、吐温-803.0毫升、加水定容至1000毫升，pH6.5，105℃灭菌15分钟。
首先分别培养试管斜面菌种，斜面菌种培养基中加入2％的琼脂，培养24小时，然后接入三角瓶液体培养基中进行分别培养，35℃培养18小时，接种量为10％，再逐级进行扩大培养，然后再分别进行大罐发酵培养，35℃培养48小时。
2、枯草芽胞杆菌、纳豆芽胞杆菌的培养培养基配方大豆肽1.0克、葡萄糖5.0克、牛肉膏10克、蛋白胨5.0克、玉米浆5.0克、氯化钠2.0克、水1000毫升，pH7.0，105℃灭菌15分钟。


本发明提供的是一种肠道微生态制剂及其制备方法。每100g产品中含有两歧双歧杆菌1.0g－20.0、嗜酸乳杆菌1.0－25.0g、嗜热链球菌1.0－25.0g、德氏乳杆菌保加利亚亚种1.0－25.0g、酵母菌1.0－35.0g以及低聚异麦芽糖、低聚果糖、多种维生素。两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种、枯草芽胞杆菌、纳豆芽胞杆菌、啤酒酵母经培养、活菌离心洗涤、添加保护剂、微胶囊包埋、冷冻干燥配制成产品。此产品能提高肠道中的益生菌的数量，改善微生态环境，防止有害菌的滋生，增强肠道的抗病能力，润肠通便，保证肠道处于一种健康状态，促进人体键健康。本制备方法能更有效的保证益生菌活菌的数量和益生菌的活性以及益生菌的保藏时间。