蕨菜黄酮在制备抗高尿酸血症药物中的应用的制作方法[0002]尿酸是人类嘌呤代谢的终末产物，由次黄嘌呤、黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶(XO)的作用下生成。由于人体内缺乏尿酸氧化酶，不能将其进一步分解成可溶性的尿囊素，而使人类极易形成高尿酸血症。任何原因引起尿酸生成增多和(或)排泄减少均可导致高尿酸血症。通常高尿酸血症被认为是痛风的标志，据统计约有5%_12%的高尿酸血症最终可发展为痛风。近年的研究表明，高尿酸血症不仅是痛风最重要的生化基础，而且与高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖、胰岛素抵抗的发生密切相关，已成为威胁人类健康的严重代谢性疾病。[0003]目前治疗高尿酸血症的药物非常有限，主要依赖于XO抑制剂别嘌醇和促尿酸排泄药丙磺舒、苯溴马隆、非布司他和培格洛替酶等，但这些药物毒副作用大，患者常常不能耐受，在一定程度上限制了其使用。因此，寻找新型高效低毒的抗高尿酸血症药物依然是目前药学研究的一个热点。[0004]中药具有较高的安全性,便于在临床上长期使用，目前已成为治疗高尿酸血症的一种趋势，已有较多中药抗高尿酸血症的报道，如，通过HEK293转染hURATl体外细胞模型研究了桑黄素对尿酸重吸收的抑制作用，明确了 hURATl的靶点作用。四妙丸能够降低其mRNA和蛋白表达水平，从 而降低模型大鼠体内尿酸浓度，治疗高尿酸血症。[0005]蕨菜为蕨科蕨属植物蕨Pteridium aquilinum (L.) Kuhn的幼嫩叶,具清热化痰、利尿安神等功效。课题组前期深入研究了蕨菜的化学成分，发现黄酮类化合物含量高达7.28%，并对黄酮类化合物进行了分离鉴定；药理学研究发现蕨菜黄酮具有改善高血脂大鼠的脂代谢紊乱，免疫调节等等功能。但目前尚无蕨菜黄酮抗高尿酸血症的相关研究报道。本发明提供一种蕨菜黄酮抗高尿酸血症的新用途及其制剂。[0006]
本发明通过制备蕨菜黄酮片剂，通过抗高尿酸血症的动物实验和临床实验，观察其对高尿酸血症大鼠模型的抗高尿酸血症作用，旨在提供一种安全有效，服用方便的抗高尿酸血症药物。
[0007]蕨菜为蕨科蕨属植物蕨Pteridium aquilinum (L.) Kuhn的幼嫩叶,蕨菜黄酮是从蕨菜中提取的有效部位，检索文献未见其抗高尿酸血症方面的研究，本课题组研究发现蕨菜黄酮有显著的抗高尿酸血症作用。
[0008]蕨菜黄酮的具体制备操作方法如下:将新鲜蕨菜在温度103°C条件下烘干，研成蕨菜粉末；用乙醚对蕨菜粉末进行脱脂，得到蕨菜干粉，加入3~5倍质量的体积分数为70~90%乙醇，回流提取I~3小时，提取3~5次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮，所述蕨菜黄酮中黄酮的含量为15~30wt%。[0009]蕨菜黄酮中黄酮含量测定:采用紫外分光光度法测定黄酮含量，即利用黄酮类化合物与铝盐生成红色络合物，以芦丁为标准品，在510nm出测定吸光度，所得数据经线性回归处理可得到标准曲线回归方程。取一定体积样品溶液按标准曲线相同方法操作测得吸光度值后，由回归方程计算出蕨菜黄酮含量。
[0010]本发明中蕨菜黄酮中黄酮含量:黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为15-30%。
[0011]蕨菜黄酮抗高尿酸血症药物由质量百分比为50%~70%的上述蕨菜黄酮和50%~30%的赋形剂组成，其中所述的赋形剂为淀粉、糖粉、聚乙二醇、硬脂酸、明胶、石蜡、滑石粉、微晶纤维素、乙基纤维素中的一种以上。
[0012]蕨菜黄酮片剂的制备方法:将蕨菜黄酮与赋形剂如淀粉混合均匀，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒，用压片机压片，封装制成成品。
[0013]蕨菜黄酮抗高尿酸血症作用强，安全无毒、服用方便，有极好的开发前景。
[0014]蕨菜黄酮在抗高尿酸血症的应用:按每公斤体重每日食用30~300mg (蕨菜黄酮的使用量以测定出的黄酮含量计算)的量进行服用，可以达到显著的抗高尿酸血症效果。
[0015]本发明的有益效果是:提供的蕨菜黄酮在抗高尿酸血症药物中的应用，可以将本发明的蕨菜黄酮制备成多种临床药物剂型作为抗高尿酸血症药物，市场应用广泛，具有重大经济与社会效益。
[0016]
实施例1
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨菜40000g于103°C烘干后，研成蕨菜粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入3倍质量的体积分数为90%乙醇，回流提取I小时，提取5次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮1000g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定:采用紫外分光光度法测定黄酮含量，即利用黄酮类化合物与铝盐生成红色络合物，以芦丁为标准品，在510nm出测定吸光度，所得数据经线性回归处理可得到标准曲线回归方程。取一定体积样品溶液按标准曲线相同方法操作测得吸光度值后，由回归方程计算出蕨菜黄酮含量。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为15% ；
3、蕨菜黄酮片剂制备:
(1)混均:蕨菜黄酮700g，淀粉300g，混合均匀；
(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与淀粉混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0017]实施例2
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨菜40000g于103°C烘干后，研成蕨菜粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入4倍质量的体积分数为80%乙醇，回流提取2小时，提取4次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮1050g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定 方法同实施例1。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为20%;
3、蕨菜黄酮片剂制备:(1)混均:蕨菜黄酮600g,糖粉400g,混合均匀；
(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与糖粉混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0018]实施例3
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨菜40000g于103°C烘干后，研成蕨菜粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入5倍质量的体积分数为70%乙醇，回流提取3小时，提取3次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮1040g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定方法同实施例1。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为30%;
3、蕨菜黄酮片剂制备:
(1)混均:蕨菜黄酮500g,聚乙二醇500g,混合均匀；
(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与聚乙二醇混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0019]实施例4
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨`菜40000g于103°C烘干后，研成蕨菜粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入5倍质量的体积分数为90%乙醇，回流提取3小时，提取3次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮1020g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定方法同实施例1。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为28%;
3、蕨菜黄酮片剂制备:
(1)混均:蕨菜黄酮650g,硬脂酸350g,混合均匀；
(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与硬脂酸混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0020]实施例5
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨菜40000g于103°C烘干后，研成蕨菜粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入3倍质量的体积分数为90%乙醇，回流提取3小时，提取4次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮1019g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定方法同实施例1。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为23%;
3、蕨菜黄酮片剂制备:
(O混均:蕨菜黄酮600g，淀粉200g，明胶200g，混合均匀；
(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与淀粉、明胶混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0021]实施例6
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨菜40000g于103°C烘干后，研成粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入4倍质量的体积分数为85%乙醇，回流提取2小时，提取3次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮 1020g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定方法同实施例1。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为15%;
3、蕨菜黄酮片剂制备:
(1)混均:蕨菜黄酮700g,糖粉100g,石腊200g,混合均匀；
(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与糖粉、石蜡混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0022]实施例7
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨菜40000g于103°C烘干后，研成粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入5倍质量的体积分数为70%乙醇，回流提取3小时，提取5次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮 1020g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定方法同实施例1。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为30%；
3、蕨菜黄酮片剂制备:
(1)混均:蕨菜黄酮500g，淀粉300g，滑石粉200g，混合均匀
(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与淀粉、滑石粉混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0023]实施例8
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨菜40000g于103°C烘干后，研成粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入4倍质量的体积分数为90%乙醇，回流提取3小时，提取3次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮 1020g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定方法同实施例1。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为28%;
3、蕨菜黄酮片剂制备:
(O混均:蕨菜黄酮550g，微晶纤维素300g，乙基纤维素150g，混合均匀；
(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与微晶纤维素、乙基纤维素混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0024]实施例9
1、蕨菜黄酮的获得:新鲜蕨菜40000g于103°C烘干后，研成粉末，蕨菜粉末的粒度为40目。称取6500g蕨菜粉末，用乙醚脱脂，得到蕨菜干粉，加入4倍质量的体积分数为90%乙醇，回流提取3小时，提取3次，合并滤液，减压浓缩干燥得褐色蕨菜黄酮提取物，即蕨菜黄酮 1020g ；
2、蕨菜黄酮中黄酮含量测定方法同实施例1。黄酮占蕨菜黄酮的质量分数为19%;
3、蕨菜黄酮片剂制备:
(!)混均:蕨菜黄酮600g，石蜡100g，乙基纤维素300g，混合均匀；(2)制粒整粒:蕨菜黄酮与石蜡、乙基纤维素混均后，用适量乙醇制粒(以用手握之可成团块，手指轻压时又能散裂而不成粉状为度)，经整粒机制得颗粒；
(3)压片:将颗粒用压片机压片，每片0.25 g。封装制成成品。
[0025]蕨菜黄酮片抗高尿酸血症的动物实验
将上述实施例1所得蕨菜黄酮片，用于抗大鼠高尿酸血症作用的动物实验，结果表明蕨菜黄酮片具有抗高尿酸血症活性。实验过程及结论如下:
大鼠清洁级成年雄性昆明种小鼠。
[0026]试药尿酸试剂盒(南京建成生物工程研究所)，氧嗪酸钾盐(SIGMA公司)，别嘌呤醇片(上海信宜万象药业股份有限公司生产);水为双蒸水，自制。蕨菜黄酮片粉碎后溶解于水用于大鼠灌胃。
[0027]仪器高速冷冻离心机(美国Beckman公司),超低温冰箱(美国Thermo公司)，电热恒温水温箱(上海博迅实业有限公司)，UV2100紫外可见分光光度仪(北京瑞利分析仪器公司)。
[0028]方法将大鼠随机分为6组，分别为空白对照组、高尿酸血症组(模型组)、别嘌呤醇组(阳性药组)、蕨菜黄酮片高、中、低剂量组。根据参考文献造模方法，模型组饲以10%高酵母饲料，并给予腺嘌呤溶液灌胃，制备高尿酸血症模型；对照组饲以普通大鼠颗粒饲料，并给予同体积蒸馏水灌胃。治疗组在给予高嘌呤饲养及腺嘌呤灌胃的同时给予蕨菜黄酮高、中、低三个剂量灌胃。
[0029]造模I h后再次给各组大鼠相应药物，给药I h后摘眼球取血；收集造模后I h及给药后I h各组大鼠的尿液。将血样离心(3000 r.min-1,10 min),取上清液,按试剂盒说明书所示测定尿酸含量。`
[0030]表1不同剂量蕨菜黄酮对大鼠高尿酸血症的影响_