专利名称：舌上疫苗和施用器的制作方法舌上疫苗和施用器本发明涉及将疫苗给予动物甚至新生动物的方法、组合物和装置。具体来讲，本发明提供固体和半固体含有抗原的疫苗制剂，使用呈“棒棒糖样”或类似设计的舌上施用器给予所述疫苗制剂。通过动物吮吸或舔舐施用器而舌上递送抗原。犬细小病毒(CPV)是狗的头号杀手。新生幼犬通过用哺育母犬初乳中传给幼犬的抗体哺育(尤其是生命头两天内)而获得针对CPV的被动免疫。对于包括狗在内的许多哺乳动物，由初乳提供的被动免疫在约第5周龄的某个时候失去其保护作用。因此，建议在第6周开始接种以提供幼犬注射的效力。然而，现行幼犬接种系统的ー个问题是，早期注射(例如相隔2周给予3-4次注射)常常不会立即诱导主动保护性免疫应答。直到已给予一系列注射(例如在6、9、12和15周)的大多数或全部，保护性免疫应答才可呈现。遗憾的 是，幼犬因CPV所致的最高死亡率(80%)是在8周龄，此时母犬的抗体逐渐減少，而幼犬还未建立其自身的主动免疫。CPV感染的这个易感期出现在约7周龄至约11周龄，并且与高CPV相关死亡率相关联。一个简单答案可能是更早给幼犬接种。然而，但已经证实这是有问题的，因为由母犬提供的抗体还中和现有市售疫苗制品中的CPV，因此在例如2周或3周接种的幼犬不独立地诱导主动免疫应答。在诸如猫和甚至人等其它物种中也观察到母体抗体干扰现象。发明概述本发明提供将疫苗舌上给予(即给予至舌表面)哺乳动物的组合物、装置、方法和方案。按照本发明的一个实施方案，通过舌上施用器将抗原递送或施用于舌背侧面，所述施用器通常包含含有一种或多种目标抗原的固体或半固体基质(其可原位胶化或固化)。与舌的唾液接触时，以及受吮吸或舔舐动作促进，基质溶解并释放包覆或部分包覆舌背侧面的抗原。在一些实施方案中，利用新生儿的先天吮吸反射，使用舌上施用器给新生哺乳动物接种。在某些实施方案中，本发明的施用器/装置可以是手持的。在其它实施方案中，施用器/装置可以是悬挂的。在一些实施方案中，舌上施用器将病毒递送到动物舌上，而在具体实施方案中，病毒可以是感染舌基细胞的减毒病毒。本发明提供ー种免疫动物的方法，所述方法包括将至少ー种抗原舌上给予动物的步骤。在一个实施方案中，至少ー种抗原是减毒病毒，例如感染动物舌细胞的减毒病毒或感染动物舌基细胞的减毒病毒。在一个实施方案中，减毒病毒是犬细小病毒(CPV)。在其它实施方案中，减毒病毒选自ロ蹄疫病毒、猫杯状病毒、猫泛白细胞减少症病毒和猫细小病毒。在本发明的一个实施方案中，对减毒病毒进行遗传改造以提呈对动物中的ー种或多种感染物有特异性的ー种或多种抗原。在该方法的一个实施方案中，舌上给予的步骤包括以制剂形式将至少ー种抗原提呈给动物，所述制剂包含具有至少ー种抗原分散在固体基质中和具有研磨材料分散在固体基质中的固体基质。在一些实施方案中，舌上给予的步骤包括使动物的舌与固体基质接触选自以下的一段时间的步骤1分钟、2分钟、3分钟、4分钟和5分钟。在另ー个实施方案中，舌上给予的步骤在数周时间内进行多次。在又一实施方案中，动物为新生儿，而在一些情况下，舌上给予的步骤在新生儿出生后并且在首次供给新生儿母体初乳前立即进行。在另ー些实施方案中，进行舌上给予的步骤后，不允许新生儿吃奶一段时间。本发明还提供一种用于舌上递送给动物的免疫原性制剂，所述免疫原性制剂包 含基质；和分散在基质中的至少ー种抗原。在一些实施方案中，基质是固体；而在ー些实施方案中，研磨材料分散在基质中。在免疫原性制剂的ー个实施方案中，至少ー种抗原是减毒病毒，例如感染动物舌细胞的减毒病毒或感染动物舌基细胞的减毒病毒。在一个实施方案中，减毒病毒是犬细小病毒(CPV)。在其它实施方案中，减毒病毒选自ロ蹄疫病毒、猫杯状病毒、猫泛白细胞减少症病毒和猫细小病毒。在本发明的一个实施方案中，对减毒病毒进行遗传改造以提呈对动物中的ー种或多种感染物有特异性的ー种或多种抗原。本发明还提供ー种用于将免疫原性组合物给予幼犬的舌上施用器。舌上施用器包括至少包括基质的基材；和分散在基质中的至少ー种抗原。在一些实施方案中，基质是固体，该基质可包含分散在其中的研磨材料。在舌上施用器的一些实施方案中，至少ー种抗原是减毒病毒，例如选自以下的病毒CPV、ロ蹄疫病毒、猫杯状病毒、猫泛白细胞减少症病毒和猫细小病毒。在其它实施方案中，舌上施用器包括位于基质的ー个表面上的保护板。附图简述图I.幼犬舌纵剖面示意图。图2A-G.示例性疫苗递送施用器。A，保持结构10与固体制剂球12连接的舌上施用器，固体制剂球12具有掺入制剂13的研磨颗粒；B，具有带硬毛(例如丝瓜络(LufTabristle)) 14的保持结构10的递送载体的剖视图，硬毛14从包覆有固体制剂12的支座15上伸出；C，包覆有固体制剂12的指套16的外观图，固体制剂12包含研磨颗粒13 ;D，“安抚奶嘴”的剖视图，其具有支承结构17和包覆有含研磨颗粒13的固体制剂12的邻接或连接支座18 ;E，“安抚奶嘴”侧视图，其具有带含研磨颗粒13的连接的固体制剂12的支承结构17 ;F，具有研磨“齿”的舌上施用器的剖视图；G，具有研磨“凸起”或“块”的舌上施用器的剖视图。在一些实施方案中，抗原也存在于或仅存在于凸起或块上。图3A-C.递送本发明疫苗制剂的装置的不同实施方案的示意图。A，包括保持结构10和基质12的舌上施用器的“顶”面的示图，其不与舌接触；B，具有保持结构10和基质12的舌上施用器的侧视图；C，舌上施用器“底”面(其与舌接触)及保持结构10和基质12的示图，并具有呈网格形式的沟槽19。图4A-G.递送本发明疫苗制剂的装置的不同实施方案的示意图。A，显示各表面的基质的示图B，椭圆形舌上施用器；C，矩形舌上施用器；D，圆锥形舌上施用器；E，大致为正方形的舌上施用器；F，仿形舌上施用器；G，具有基质20和保持结构10的舌上施用器的侧视图。图5A-D.本发明的示例性实施方案。A，分层基质；B，具有支座或背衬的基质；C，有保护板覆盖基质的舌上施用器；D，示例性舔砖(lick block)。图6A-D.舌上施用器的有孔实施方案。A，具有垂直通道的基质；B，具有多种不同形状的通道的基质；C和D，具有在基质一面开ロ的通道[C]和整个穿过基质的通道(D)的基质的实施方案。手柄90通过铰链91连接。图7A和B.给予疫苗的示例性方案。A,出生时开始；B,在4周开始。LP =舌上施用器。图8A和B. A,猫舌不意图，显不丝状乳头具有广生于尾突的尾部定向的角化棘；100=固有层；101=支承前乳头(rosta papilla) ;B,狗舌示意图，显示丝状乳头具有尾部定向的顶端；200 =顶端；201 =固有层。图9.饼形图，显示在已研究的提交案例中CPV在舌与肠中的分布。 图10.感染CPV的狗舌中的示例性荧光，其表示基细胞中病毒的存在情况。中心圆形凸起区域为味蕾。发明详述本发明提供给哺乳动物舌上施用或给予疫苗的组合物、装置和方法。按照本发明的一个实施方案，通过舌上施用器将抗原递送至舌表面(例如背侧面)，该舌上施用器包括含有ー种或多种目标疫苗抗原的固体或半固体基质载体。舌上施用器可为一次性的。舌的吮吸和/或舔舐动作以及与唾液的接触溶解基质，从而将抗原释放到舌上。舌和ロ的强有力的咀嚼肌发力，并因此在基质和舌之间产生摩擦，这有助于递送疫苗抗原。由于哺乳动物在很小的时候(例如刚出生后)便具有先天的天然吮吸能力，因此甚至可使用本发明的舌上疫苗施用器将疫苗抗原安全有效地递送给新生儿。这种强的吮吸反射还趋于夹住基质，使之保持适当位置。而且，固体和半固体施用器不会出现像ロ服滴剂/液体剂ー样可能发生的吸入风险。动物的主人在不需要使用注射器或其它疫苗递送器的情况下，便可以容易的方式将疫苗递送给动物。因此，舌上递送有助干与接种方案的顺应性，尤其在产后必须立即给予的围产期疫苗，例如在可能缺乏兽医和医疗服务的地方。在一个实施方案中，方法用来给哺乳动物接种针对能够感染ー种或多种舌细胞(例如基细胞或其它舌中和舌周围的靶组织)的病毒的疫苗，即使舌可能不是感染的主要部位，舌感染可能因此不引起明显的感染症状。这种类型的示例性病毒是CPV。感染舌的其它无包膜病毒包括引起牛ロ蹄疫的病毒和猫杯状病毒。在这个实施方案中，以将减毒病毒直接递送至疫苗接受者舌背(例如在舌/ロ基细胞或其它靶组织上或附近)的方式，给予疫苗制剂。为此，将舌上疫苗施用器放入动物口内，使得施用器的含减毒病毒的基质部分与动物舌背侧面直接接触。该实施方案甚至可用于新生儿，并且在动物刚出生时，基质与上腭同时接触引出先天吮吸反射，舌肌借此以溶解基质且从制剂中机械性释放病毒的方式卷曲。施用器的形状可随动物种类、品种、动物的大小、ロ形等而变化。可通过利用模具(例如烧石膏、硬塑料等)设计合适的施用器用于不同类型、大小、年龄等的动物。虽不受理论束缚，但仍认为在这个实施方案中，舌上疫苗递送的机制如下通过吮吸、舔舐等从施用器基质释放的病毒通过感染舌胚层而转运，并被舌的免疫细胞吸收。舌中的淋巴细胞启动免疫应答。在一个实施方案中，舌的基细胞被病毒感染，并建立抗原库(例如病毒库)。随时间推移(如果疫苗接受者是新生儿则从非常小的年龄起)，分裂的基细胞逐渐不断地释放病毒和/或病毒抗原到周围组织中。在舌上接种的新生儿中，病毒感染最初受到抑制，且由于所释放的病毒被循环的母体抗体中和而局限于基细胞。然而，母体抗体随时间消退，年幼动物的免疫系统逐渐变为主动免疫，并接替抗体产生。由于在整个这种转换过程中病毒从基细胞库的释放继续进行，细小病毒感染的这种低水平的缓慢释出(smoldering)持续存在，且在早期，动物的成熟免疫系统逐渐产生对病毒的主动免疫应答。因此，本发明提供ー种给新生儿接种的方法，该方法使母体抗体起作用的时间与新生儿自身免疫系统有能カ产生保护性主动免疫应答的时间之间的间歇连接起来，即使这些时期重叠。这种观点与以下出人意料的观察结果一致在CPV感染的动物中，病毒不仅位于肠和其它可预测的消化道部位(例如食管)，而且还预料不到地存在于舌的基底层中。该研究结果详述于实施例I。图I表示舌内层(包括基细胞)的侧视图。 定义 给不同类型的疫苗下定义将是有用的。胃肠外疫苗传统上是最普遍的疫苗类型，其借助针和注射器经皮下或肌内或真皮内给予。疫苗制剂通常呈溶液或液体形式。已经使用这些疫苗200多年(Edward Jenner于1796提出)，一些疫苗一直有效。最成功的疫苗之ー是天花疫苗，其通过放泄针在皮肤上递送。因为痘病毒是嗜皮性病毒，所以正确的免疫应答类型提供稳定的終身免疫。通过胃肠外途径给予的大多数针对粘膜感染的疫苗可能不诱导正确的免疫应答类型。因此，这些疫苗有时无效。而且，在许多猫和狗中，胃肠外疫苗可因例如佐剂存在而引起不良反应(例如猫中的注射部位肉瘤)。ロ服疫苗ー些ロ服递送的疫苗(例如脊髄灰质炎滴剂)一直有效。ロ服递送的疫苗的ー个限制是胃酸的低PH对疫苗抗原的降解。鼻内疫苗这些是通常用于呼吸病原体的用作例如鼻内滴剂或用作气雾剂的疫苗。虽然有时有效，但由于抗原转运到脑，因此鼻疫苗也可导致不良反应。舌下疫苗接种的另ー种方法是舌下接种。可使用液体剂或固体片剂在舌下给予来实现。舌下疫苗的一个优势是它可提供针对ー些变应原的耐受性，因为放置在舌下的疫苗的体积减小。然而，舌下途径不方便，因为不得不将舌抬起以放入疫苗。舌上疫苗本发明的舌上疫苗克服了前述接种途径的限制，允许更容易地施用疫苗。ー个目的是允许足够的接触时间以给予足够剂量的抗原，以免疫例如新生哺乳动物。舌上递送制剂与舌充分接触，并持续足够长的时间以供抗原递送。此外，接触是密切的，并具有由颌肌的強大咀嚼カ产生的压力，可促使抗原更快地扩散，因此促进抗原递送。这可通过舌上疫苗递送装置即舌上施用器的设计特征来实现和/或促迸。舌上方法利用天然吮吸反射和例如舌背(上表面)上天然的机械刷样结构。舌上疫苗作为例如固体、半固体或凝胶(例如原位形成的凝胶)，以缩小的体积原位递送。而且，舌上腔隙大于舌下间隙，这就允许将施用器做成促进均匀施用的形状，例如易在舌上滚动的圆形。舌上方法的另ー个优势是较低的口腔温度(低约1_2°C )，这使弱病毒能得到较高稳定性。ー些病毒(例如细小病毒)异常稳定，因此易掺入施用器基质中。唾液的蛋白水解但非变性的作用也有助于疫苗的适当完整性。此外，与例如全身性或鼻疫苗给予相比，以这种方式给予导致病毒递送到动物脑的风险降低。此外，不存在佐剂减少成本或生产以及不良反应的发生。而且，目前可获得非常少(如果有的话)的安全的食品级或饲料级佐剂。大多数胃肠外佐剂引起严重炎症，因此对于施用于舌而言是不舒服和不合适的。舌上接种解决了母体抗体效价(例如抗CPV)变化的问题。实际上，在母体抗体效价低的情况下，舌上接种的动物中可更早地发生主动免疫。可通过若干方法中的任ー种实现将疫苗递送到例如舌的背侧面。例如，可使用手持“舌上施用器”递送疫苗。施用器通常包括含有目标抗原的固体或半固体基质/载体，基质呈适干与哺乳动物的舌背面接触的形式或形状。在一个实施方案中，如此形成基质，使之适于以使基质表面位于舌背侧面上的方式放入口中，即例如通过吮吸、舔舐或舌肌的其它卷曲动作使基质的至少一面与舌背侧面直接接触(或可直接接触)。在这个实施方案中，可将手柄或其它保持结构与基质连接以利于或控制给药，并防止吞入基质。在其它实施方案中，基质主要制成用于舔舐的形式，而不一定非要是哺乳动物ロ可容纳的大小或形状。在一些实施方案中，选择施用器的设计和大小以允许或有利于与舌背侧面最大接触接触，在ー些情况下为最大接触(例如舌背面的至少约 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或 95%或甚至更高)。大多数成年动物具有与生俱来的伸舌本能以品尝和/或舔舐物质。本文所述基质的硬度一般防止咬破，但却促进或鼓励舔舐施用器。基质和/或施用器在真空包装物中的包装有助于保持新鲜滋味并防止腐败。下面对这些和其它实施方案进行详尽论述。在一些实施方案中，舌上施用器包括可吃的或可食用的(例如食品级或饲料级)基质/载体，其中存在一种或多种目标抗原。基质与动物舌背内或舌背上的唾液接触时，基质溶解或崩解，从而释放抗原至舌背侧面。这种类型的示例性基质包括但不限于可放在舌 上并允许溶解的固体/半固体“棒棒糖”型装置(其可被划痕以使能通过分解成更小的块来縮小尺寸)；当施用于舌时固化或胶化的液体(对于原位形成聚合物药物递送系统的描述例如參见 B. Madan, Bajaj 等 Indian Journal of Pharmaceutical Sciences 2009.71:242-251 ;可溶材料的薄片；冻结的“冰棒”型基质等。这种基质一般是完全可消耗的，例如在完成充分的舌接触之后。在这个实施方案中，施用器用于单独的ー个动物，因此防止ロ感染传播给其它动物。可根据例如接受疫苗的动物的品种、ロ的大小、体重、咀嚼力和喜好，定制施用器的大小、形状和尺寸。在其它实施方案中，舌上施用器可包括相当耐用的固体或半固体基材或支座，其是不可消耗/不可食用/不可吃的并且与唾液接触时不溶解，但其用作将抗原递送至舌的载体。在这个实施方案中，通过舌的吮吸或舔舐动作从耐用载体释放抗原。基材可以是手柄或保持结构，其一部分(例如一端)嵌入基质中，其另一部分(例如另一端)从基质伸出，并可被施用器用户抓住以便将疫苗给予动物。抗原可存在于固体或半固体基质中，基质与支座连接或者位于支座上或位于支座内，或者基质本身可不存在，含有抗原的疫苗制剂直接包覆(例如干燥)在支座上或者注入或浸入支座。该实施方案的实例包括但不限干给动物提供的指套或护套的涂层；用疫苗制剂包覆或浸透的硬毛(例如丝瓜络)；用疫苗制剂包覆或浸透的海绵或似海绵的材料；用疫苗制剂包覆或浸透的幼犬安抚奶嘴；用基质或疫苗制剂包覆或浸透的不可溶解的材料片等。基材可为一次性的或可再用的。可再用基材可重复地用基质包覆、给予、清洁、再次包覆、给予、清洁等。在其它实施方案中，以涂刷或滚到舌上的液体制剂或半固体制剂(例如粘稠液体、糖浆剂或糊剂)给予疫苗制剂。这与立即被咽下且不提供抗原与舌背侧面充分接触时间的滴剂不一样。给予本发明的抗原通过与舌表面(例如背侧面)直接接触并在一段时间内发生。一般来讲，接触时间大于I分钟，可为5分钟以上，例如通常约10分钟，并可长至15-20分钟。可通过调节基质的硬度，和/或通过限制基质与舌接触的时间(抽出施用器)等，来调整接触时间。在一些实施方案中，固体或半固体制剂含有促进舌的轻度擦伤或磨伤的研磨材料或颗粒，例如“砂粒”或“晶体”。这类物质的实例包括但不限于结晶砂糖、盐、矿物质等；细碎的粗粒或硬化例如脱水(例如烘烤或以别的方式加热)直到极硬的稠度的其它可食用物质等。注意只利用不能伤害动物的物质(例如用于靶物种的食品级或饲料级组分)。在其它实施方案中，当舌上施用器包括耐用的基材或支座时，支座本身可包括在动物的舌吮吸或舔舐时轻轻擦伤舌的突出物，例如短的(例如l_5mm)硬毛或轻轻摩擦舌表面的其它硬表面。当要递送的抗原是病毒时，轻轻损伤、擦伤或以别的方式刺激或磨伤舌(然而是在无疼痛的情况下)的目的是更有效地递送病毒至例如舌的基细胞。基细胞通常位于约10个细胞层深的位置，一般将固体疫苗制剂设计成响应动物的吮吸动作时在基细胞层附近(例如2-5个细胞层以内)产生递送病毒的途径。若干示例性疫苗递送装置概略地示于图 2，其中图2A描述带有保持结构10的“舌上施用器”，保持结构10与具有研磨颗粒13的固体制剂球12连接；图2B表示递送载体的剖视图，其具有保持结构10和从包覆有固体制剂12的支座15中伸出的硬毛14。保持结构一般为手柄，可以是可拆卸的和/或可例如通过电池驱动的机制振动(颤振、脉动，例如500-30，000次冲击(stroke)/分钟)以提高基质在舌上溶出，而在ー些实施方案中，可递送超声波。图2C是包覆有固体制剂12的指套16的外观图，其中固体制剂12包含研磨颗粒
13。图2D是“安抚奶嘴”的剖视图，其具有支承结构/保持结构17和包覆有含研磨颗粒13的固体制剂12的邻接或连接支座18。图2E是“安抚奶嘴”的侧视图，具有支承结构/保持结构17与连接的含研磨颗粒13的固体制剂12。其它实施方案见图2F-G，包括在舌上施用器表面上掺入“齿”或“凸起”或“块”，由固体基质材料本身形成，或在基质所固定的支座或基材上提供，并延伸穿过基质以便在舔舐或吮吸装置期间接触舌。在一些实施方案中，抗原存在于擦伤突出物(例如在凸起、块、硬毛等)中，并可只存在于擦伤突出物中。在其它实施方案中，舌上施用器的ー个或多个表面被开槽或划沟痕(例如具有沿舌上施用器表面延伸的凹槽或开放通道)以供舌乳头的某种“截留”。沟槽或通道的边缘可为不规则或粗糙的，以提供适度的擦伤作用。该实施方案见图3A-C，其中沟槽用舌上施用器底面(与舌接触的表面，图3C)上的网格形式描绘。在一些实施方案中，递送装置是例如为具有韧カ和耐久性而由天然橡胶制成的咀嚼玩具，其用疫苗浸透。在某些实施方案中，给咀嚼玩具调味以确保(鼓励)咀嚼玩具或把玩具放到嘴里嚼。在一些实施方案中，玩具或安抚奶嘴上的凸起块有助于轻轻擦伤舌。疫苗舌上施用器的其它示例性实施方案见图4A-G。例如，舌上施用器可以是任何合适的大小和形状，只要其与动物ロ舒服地相适，并将病毒递送至舌背侧面即可。例如，參照图4A，基质20可具有顶面22、底面22(其在图中看不见，可视为与纸平面一致)和侧面
23。从上方(或下方)观察时，舌上施用器顶(上)面和底(下)面的形状可基本为以下形状，例如椭圆形(图4B)、圆形；正多边形(例如同图4E —样的大致上的正方形,或同图4C中一样的长方形等)或不规则多边形、或圆锥形(图4D)等。可采用任何合适的形状。在一些实施方案中，设计递送载体，以便适应动物ロ的大小和解剖结构。在一些实施方案中，设计递送载体用于口内递送，即为了适应动物ロ的大小和解剖结构。最长尺寸(例如顶面或底面的最长尺寸)的范围一般可为约I-约5cm，通常范围为约I. 5-约3cm，例如约1、2、
3、4、5cm以上(例如10-20cm以上)，这取决于疫苗接受者口和舌的大小。在成年狗中，舌长可为20cm。对于成年动物可使用较长和较大的施用器。至于厚度，舌上施用器在舌上施用器的最厚部分的范围一般为约0. 25-约I. 5cm，通常范围为约0. 5-约1cm，即约0. 3,0.4,
0.5,0. 6,0. 7,0. 8,0. 9或1cm。整个舌上施用器可具有基本一致的厚度，即舌上施用器的顶面和底面可基本平行，或者顶面和底面的一个或两个可为弧形的。例如，舌上施用器的总体形状可大致为球形、卵圆形等，在此情况下不存在“面”本身。或者，可对舌上施用器塑形或使舌上施用器成形，以便大致为动物ロ的内部形状，例如图4F所示，该图表示具有前弧形段30和后弧形段31的舌上施用器的侧视图。在一些实施方案中，舌上施用器包括保持结构(图4G中的10)，例如手柄，以有利于该装置的制造、操作和给药。手柄一般可为笔直的，长度范围为约5-约10厘米，或者有时 更短，并且可为刚性或柔性的。然而，各种其它设计是可行的，例如其中保持结构是弯的或弧形的，或缠在给予疫苗的人的手指或手上等。施用器的一次性实施方案防止幼犬间发生交叉污染。例如，狗主人可根据有关品种和怀孕雌性动物乳腺乳头的大小的经验，在幼犬出生前订购正确尺寸的施用器，以便可获得出生不久使用的疫苗施用器。本发明的舌上疫苗施用器可包含固体或半固体基质，其含有分散或分布在整个基质中的抗原，基质与唾液接触时可溶解。可通过在制造期间使用的温度控制基质的硬度。本领域技术人员应了解的是，可以采用若干合适的基质类型中的任ー种。例如，可以使用“棒棒糖”或硬糖型制剂。像大多数硬糖配方一祥，接种施用器可通过煮糖产生。示例性组合为糖(2杯)、淡玉米糖浆(约2/3杯)、3/4杯水和盐(1/3茶匙)。也可加入着色剂和不同的调味品，例如肉或花生。先在煮器不盖盖子的情况下，将各成分煮沸至300°C。应当小心，因为这种混合物有大量潜伏热，并可灼伤皮肤。使混合物冷却。在温度降至约125°C后，接着可均匀混合入抗原以便均匀分散。将混合物倒入模具中硬化。可通过公知的冷水试验和更准确(精确)地用糖果温度计监测糖果的硬度，以达到所需硬度水平。根据所需硬度或脆度水平，可调整糖果混合物的煮沸时间和所达到的温度，并监测硬度阶段，例如采用本领域已知的且在表I中所述的“冷水试验”进行。然而，另用温度计测量温度是可取的。示例性冷水试验阶段和相应的温度如下表I.冷水试验


使用固体和半固体制剂将疫苗舌上给予动物。通过舌上施用器递送包含分散在固体或半固体基质或糊中的抗原的制剂。设计舌上施用器使得在疫苗递送期间将含有抗原的基质直接放在舌背侧面。在暴露于唾液和暴露于舌的吮吸和/或舔舐动作时，基质溶解并将抗原释放到舌上。在一些实施方案中，抗原是病毒，例如能够感染舌细胞的减毒病毒，例如感染舌基细胞的犬细小病毒。舌上施用器尤其可用于将疫苗递送给新生动物。