一种从黄杞叶中制备花旗松素单体的方法及用途制作方法

侯文彬, 单淇, 周福军, 张新鑫, 徐旭, 高贤

2012年5月30日

2010年11月22日

2010年11月22日

天津药物研究院

A61P3/06GK102477453SQ201010551639

黄杞 叶中 松素 花旗 单体 制备

1.一种从黄杞叶中制备花旗松素单体的方法，包括以下步骤A、提取将干燥黄杞叶粉碎或切段，加入溶剂提取，提取液浓缩得浸膏B、酶解将上述浸膏按每克加入30-100ml的比例加入一定pH值的缓冲液混悬或溶解， 在一定的温度下加入适量的酶进行酶解反应C、分离与纯化酶解液醇沉除杂，得上清液或滤液，上清液或滤液浓缩至无醇味所得上清液或滤液采用一定的分离纯化方法即可得到花旗松素粗品D、重结晶花旗松素粗品经重结晶，即得纯度>99%的花旗松素单体2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于提取方法可以是回流、超声、渗辘、浸泡等，其中优选回流提取；所用溶剂为质量百分比浓度为30% -90%的乙醇，优选 50% -80%的乙醇3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于B步骤中酶解反应的缓冲液的pH值为3-6，优选pH值为4. 5-5. 54.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于B步骤中所选的缓冲液可以是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液和柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液中的任意一种5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于B步骤中所用的酶可以是β-糖苷酶、纤维素酶、蜗牛酶、柚苷酶、果胶酶中的一种或几种混合其中优选糖苷酶和纤维素酶6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于Β步骤中按酶/膏状物质量比= 0. 01-5加入酶进行酶解，其中优选酶/膏状物质量比=0. 1-0. 5反应的温度为15-70°C， 优选37-50°C，反应时间为4-72h7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于C步骤中的醇沉除杂，所用的醇为乙醇或甲醇8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于C步骤中的一定的分离纯化方法可采用有机溶剂萃取的分离纯化方法酶解上清液或滤液先用石油醚或与之极性相当的低极性的有机溶剂脱脂，然后再用乙酸乙酯、正丁醇或与之极性相当的有机溶剂反复萃取完全，浓缩萃取液至有固体析出，放置过夜，滤出固体即为花旗松素粗品9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于C步骤中的一定的分离纯化方法可采用色谱分离纯化的方法其色谱分离介质包括大孔树脂、聚酰胺和硅胶其中所用的大孔树脂型号可以是 D101，D201, HPD-100, HPD-200, AB-8, NK-9, NK-II, FL-I 中的任意一种 其中优选树脂型号为FL-1，D101, HPD-100和AB-810.根据权利要求9所述的方法，其特征在于大孔树脂和聚酰胺柱具体的分离纯化方法为将水解后的上清液或滤液以2 4倍柱体积的流速通过大孔吸附树脂柱或聚酰胺柱， 直到吸附饱和；用纯水及10%乙醇洗脱杂质，直到洗流出液近无色；再用40%的乙醇洗脱至花旗松素洗脱完全，收集乙醇溶液洗脱液，回收乙醇，继续浓缩回收溶剂至有固体析出， 该固体即为花旗松素粗品11.根据权利要求9所述的方法，其特征是硅胶色谱的分离纯化的方法是将水解后的上清液或滤液蒸干，拌样、装柱、有机溶剂洗脱或梯度洗脱至花旗松素洗脱完全，回收溶剂至有固体析出，该固体即为花旗松素粗品12.根据权利要求11所述的方法，其特征是洗脱所用的有机溶剂为石油醚、低碳链的卤代烷、低碳链的醇和低碳链的酯，低碳链的酮，或其中二类溶剂的混合物其中，低碳链的卤代烷包括卤代甲烷、卤代乙烷等，如三氯甲烷、二氯甲烷、二溴乙烷、三溴乙烷等低碳链的醇指Cu的醇，如甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇等低碳链的酯指Cp5的酯，如甲酸甲酯、甲酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯等低碳链的酮指CV5的酮，如丙酮、丁酮等13.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于重结晶溶剂为乙醇、甲醇、丙酮与水的混合溶液14.一种花旗松素单体的用途，其特征在于用于脂肪肝的预防和治疗

本发明属于医药技术领域，涉及采用酶解技术对黄杞叶提取物进行酶解，从酶解产物中分离制备花旗松素单体的方法，并将其用于预防和治疗脂肪肝