专利名称：毛冬青总皂苷在制备防治短暂脑缺血综合症药物中的应用的制作方法毛冬青为冬青科植物毛冬青的根，含有皂苷、黄酮等成分，具有清热解毒、活血通 脉之功用，主要用于治风热感冒、肺热喘咳、冠心病、脑血管意外所致的偏瘫、血栓闭塞性脉 管炎、、中心性视网膜炎，以及皮肤急性化脓性炎症等。现代医学研究还表明毛冬青对心血 管疾病有较好治疗作用，临床上有用于降压，缓慢而持久。随着医学研究的深入，毛冬青的 医用药物价值有了新开始，但毛冬青在防治短暂脑缺血综合症的应用中末见有报导，特别 是毛冬青有效成分总皂苷作为制备治疗短暂脑缺血综合症药物应用无有报导。
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种，毛冬青总皂苷 在制备防治短暂脑缺血综合症药物中的应用，可有效解决制备防治短暂脑缺血综合症药物 的问题。本发明解决的技术方案是，取毛冬青药材加药材重量10倍量的质量浓度为70% 的乙醇，浸泡30min，提取lh，回收药液，药渣再加毛冬青重量8倍量的质量浓度为70 %的 乙醇，浸泡30min，提取lh，回收药液，合并第一次和第二次的药液；将两次的药液pH调到 4-5后，上大孔树脂；用质量浓度为35%的乙醇冲树脂柱得毛冬青总黄酮，再用质量浓度为 70 %的乙醇冲树脂柱得毛冬青总皂苷，该毛冬青总皂苷可有效解决制备治疗短暂脑缺血综 合症的药物，实现对短暂脑缺血综合症的防治问题。本发明制备方法简单，原材料丰富，应用效果好，有效解决了短暂脑缺血治疗的用 药问题，是中药上的创新。作详细说明。本发明在具体实施时，取毛冬青800g药材加药材重量10倍量的质量浓度为70% 的乙醇8000g，浸泡30min，提取lh，回收药液，药渣再加毛冬青重量8倍的质量浓度为70% 的乙醇6400g，浸泡30min，提取lh，回收药液，合并第一次和第二次的药液；将两次的药液 PH调到4-5后，上大孔树脂；用质量浓度为35%的乙醇冲树脂柱得毛冬青总黄酮，再用质量 浓度为70%的乙醇冲树脂柱得毛冬青总皂苷。该毛冬青总皂苷具有防治短暂脑缺血综合症的功能，有效用于治疗制备防治短暂 脑缺血综合症药物的问题，实现毛冬青总皂苷在制备防治短暂脑缺血综合症药物中的应 用，并经实验资料得到了充分的证明，有关实验资料如下1.毛冬青总皂苷对小鼠血瘀合并缺血再灌注模型的影响1. 1.实验材料1.1.1药物试剂本发明毛冬青总皂苷，由河南中医学院分析化学实验室提供，方法为，取毛冬青 800g药材加10倍量70%的乙醇，浸泡30min，提取lh，回收药液。药渣再加8倍量70% 的乙醇，浸泡30min，提取lh，合并第一次和第二次的药液；将两次的药液PH调到4_5后上 大孔树脂；用35%的乙醇冲树脂柱得毛冬青总黄酮，在用70%的乙醇冲树脂柱得毛冬青 总皂苷。尼莫地平，山东新华制药股份有限公司生产，批号0808170;华佗再造丸，广州奇 星药业有限公司；氯化钠注射液，由郑州永和制药有限公司生产；水合氯醛，由上海山浦化 工有限公司生产；甲醛溶液，天津市科密欧化学试剂有限公司；考马斯亮兰检测试剂盒，由 南京建成生物工程研究所生产；ATP(Adenosine-triphosphate)检测试剂盒，由南京建成 生物工程研究所生产；NO (Nitric oxide)检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产； NOS(Nitric oxide synthetase)检测试剂盒，由南京建成生物工程研究所生产。1.1. 2实验仪器UV-2000紫外可见分光光度计，尤尼柯(上海)仪器有限公司生产；TGL-16G台式 离心机，上海安亭科学仪器厂生产；电子分析天平，奥豪斯(上海)公司生产；DZKW-4型电 子恒温水浴锅，北京永光明医疗仪器厂生产；DY89-1型电动玻璃勻浆机，宁波新芝生物科 技有限公司生产；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司生产。1.1. 3实验动物昆明种小鼠，雄性，体重^ 32g，河北省实验动物中心提供。1.2实验方法1.2.1造模与给药取体重为28 32g的昆明种小鼠216只，雄性，随即均勻分为9组，即1组为空 白组、1组为血瘀模型假手术组、1组为不造血瘀模型手术组，另6组小鼠全部造血瘀模型加 手术造血瘀合并脑缺血模型。每组M只。除空白组、血瘀模型假手术组、不造血瘀模型手 术组及1组血瘀模型加手术外，其余8组造小鼠短暂脑缺血再灌注模型。造模型9组分别 灌服大、中、小剂量毛冬青总皂苷混悬液(0. 3g/kg、0. 15g/kg、0. 075g/kg)、华佗再造丸混悬 液(lg/kg)、尼莫地平混悬液(0. 04g/kg)、模型组(灌服同体积生理盐水)，空白对照组灌服 同体积生理盐水。每天给药1次，连续给药16天。在第1天给药同时，造血瘀模型的10组 均每天后腿肌肉注射地塞米松0. 8mg/kg (不造血瘀模型的2组注射等体积生理盐水)，连续 15d。于第16天给药后Ih (禁食不禁水12h)，10%水合氯醛0. 03;3ml/10g腹腔注射麻醉 (小鼠的翻正反射消失)，消毒局部，手术刀作颈部正中切口，逐渐分离周围肌肉，直到见到 双侧颈总动脉(CCA)，再用弯头小镊子剥离周围神经，分离CCA,用微动脉夹夹闭双侧颈总 动脉lOmin，恢复灌流lOmin，再用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉lOmin，恢复供血，缝合小鼠 (此过程注意其保温，室温保持在25°C )。空白对照组及血瘀模型假手术组做假手术，即除 了不结扎CCA外，其它操作同造模各组。各组观察，随时清出死亡小鼠，于手术后24h统计 死亡情况；然后各组小鼠眼眶取血测血液流变学，结果见表6，然后脱颈椎处死，迅速取脑， 在滤纸上吸干净上面的血迹，然后用天平称量其重量，根据此重计算该加入的冰冷的生理 盐水量，以脑组织(g)生理盐水(ml) =1:9的比例在盛有冰块的玻璃勻浆机中勻浆。4°C，3000r/min离心lOmin。取上清液于_20°C以下低温保存。制成10%的脑勻浆按测试盒说明操作，分别测定Na+-K+-ATPase和Ca++-Mg++--ATPase活力、NO含量、NOS酶活力。见表7、表8 试剂盒测定方法
表1考马斯亮兰蛋白测定操作顺序表


本发明涉及毛冬青总皂苷在制备防治短暂脑缺血综合症药物中的应用，可有效解决制备防治短暂脑缺血综合症药物的问题。本发明解决的技术方案是，取毛冬青药材加药材重量10倍量的质量浓度为70％的乙醇，浸泡30min，提取1h，回收药液，药渣再加毛冬青重量8倍量的质量浓度为70％的乙醇，浸泡30min，提取1h，回收药液，合并第一次和第二次的药液；将两次的药液pH调到4-5后上大孔树脂；用质量浓度为35％的乙醇冲树脂柱得毛冬青总黄酮，再用质量浓度为70％的乙醇冲树脂柱得毛冬青总皂苷，该毛冬青总皂苷可有效解决制备治疗短暂脑缺血综合症的药物，实现对短暂脑缺血综合症的防治问题。本发明制备方法简单，原材料丰富，应用效果好，有效解决了短暂脑缺血治疗的用药问题，是中药上的创新。