专利名称：一种甘草多糖颗粒剂及其制备方法甘草属(Glycyrrhiza)植物系豆科蝶形花亚科多年生草本植物，植物细胞悬浮培养的研究是植物组织培养走向工业化生产的重要步骤。植物细胞液体悬浮培养的具有突出的优点细胞增殖速度快，能提供大量均勻一致的培养物以及能进行大规模培养。因此，自本世纪初，利用植物细胞，组织和器官培养的方法生产药用活性物质的研究取得了惊人的进展，已有近1000种植物进行过细胞培养方面的研究，据估计，已经从400多种植物中建立了组织和细胞培养物，并从中分离出600多种代谢产物。甘草作为一种传统中药，自古以来就有“十方九草”的美誉，甘草的主要活性成分有甘草酸、甘草黄铜和甘草多糖，前两者已经有比较深入的研究，而甘草多糖的功能研究主要集中在抗肿瘤，抗病毒，调节免疫活性和清除自由基方面，在甘草多糖应用方面开发很少。
为了解决现有技术中的问题，本发明提供了一种甘草多糖颗粒剂及其制备方法， 解决了甘草多糖在保健品研发领域空白的问题。本发明是通过如下技术方案实现的一种甘草多糖颗粒剂，采用组织培养的方法生产出甘草多糖，辅以其它辅料制成甘草多糖颗粒剂，其各成分配比如下甘草多糖 100-150份缓释材料 100-300份填充剂 100-200份粘合剂 5-10份所述的缓释材料选自羟丙甲基纤维素或乙基纤维素或醋酸纤维素或乙基纤维素水分散体中的一种或多种混合物。所述的填充剂选自微晶纤维素或蔗糖或乳糖或淀粉或甘露醇或山梨醇或木糖醇或糊精或β-环糊精或碳酸钙或磷酸钙或磷酸氢钙中的一种或多种混合物。所述的粘合剂选自1-5 %的乙基纤维素的乙醇溶液或2-5 %的聚乙烯吡咯烷酮的乙醇溶液。一种甘草多糖颗粒剂的制备方法，包括如下步骤(1)甘草多糖的提取取甘草细胞粉末，加入15-25倍重量的蒸馏水，静置5-12h， 水浴1-5次，每次l_3h。重复水浴2-5次，合并滤液，浓缩到一定体积，以无水乙醇调制终浓度为50-90%，0-6°C静置过夜，去上清液，用sevage法去蛋白，干燥，粉碎，得到甘草多糖粉末；(2)取甘草多糖粉末、填充剂、粘合剂、水进行制粒，干燥，即得甘草多糖颗粒制剂。所述甘草多糖是由甘草悬浮细胞中提取得到，其制备方法为(1)甘草无菌苗的获得挑选颗粒饱满，呈深绿色的甘草种子，用5% 15%的次氯酸钠在磁力搅拌器上对种子进行搅拌灭菌，转速为200r/min 500r/min，温度为20°C 30°C，灭菌时间20min 40min，MS培养中含2% 蔗糖，灭菌前pH 5 6，接种在含MS 固体培养基50ml的三角瓶内，放在20 光照培养箱中，培养30 35天，得到甘草无菌苗；(2)甘草愈伤组织的获得甘草愈伤组织是从甘草无菌苗下胚轴诱导得来，经多次筛选继代后，生长状态稳定，愈伤组织继代培养基为MS培养基，附加2，4-D(0. 5 2mg · Γ1)，NAA (0. 5 2mg · Γ1)，6_BA(0. 1 0. 3mg · Γ1)，2 5%蔗糖，灭菌前 ρΗ5 6， 继代周期25 30天；(3)甘草悬浮细胞的获得选择生长速度快、质地松散、淡黄色的甘草愈伤组织， 用镊子夹碎后转移到液体培养基中进行悬浮培养；培养及成分为3/4MS培养基，附加2， 4-D (0. 5 2mg · L-1)，NAA (0. 5 2mg · L-1), 6-BA (0. 1 0. 3mg · L-1)，2 5% 蔗糖，初次培养3 5天后，将悬浮的大块愈伤组织过滤除去，悬浮细胞每隔15 20天继代一次，摇床转速110 120r · mirT1，培养温度(20 28) °C，经过数次传代筛选，最终获得性能优异的细胞系；(4)甘草悬浮细胞鼓泡式反应器培养利用自行设计的5L鼓泡式反应器，接种量为5 % 10 %的鲜重甘草细胞，发酵罐通气量为200L/min 500L/min，培养及成分为 3/4MS 培养基，附加 2，4-D (0. 5 2mg .171)，NAA (0. 5 2mg .171)，6-BA (0. 1 0. 3mg .171)， 2 5%蔗糖，PH值为5 9，培养周期为15 20天。本发明的优势在于优点本发明利用发酵罐培养的培养方式生产甘草多糖，开发出甘草多糖颗粒剂，使用方便，可直接吞服，也可冲水服用，生产出甘草多糖具有明显的免疫调剂活性，它能激活巨噬细胞，TB淋巴细胞，增强体液免疫和细胞免疫，改进全身免疫功能和更有效地抑制肿瘤和爱滋病的目的，利用此多糖开发出产品具有明显保健功能，极具开发空间。本发明提供的保健食品颗粒的包装规格为10g/袋，稀释至200ml热水中。服法每天早晚各服一袋。(3)甘草悬浮细胞的获得选择生长速度快、质地松散、淡黄色的甘草愈伤组织， 用镊子夹碎后转移到液体培养基中进行悬浮培养。培养及成分为3/4MS培养基，附加2， 4-D (Img · L—1)，NAAdmg · L—1)，6_BA(0. 2mg · L—1)，3 %蔗糖，初次培养 3 天后，将悬浮的大块愈伤组织过滤除去，悬浮细胞每隔18天继代一次。摇床转速110 120r ^mirT1,培养温度Q0 ^)°C。经过数次传代筛选，最终获得性能优异的细胞系。(4)甘草悬浮细胞鼓泡式反应器培养利用自行设计的5L鼓泡式反应器，接种量为8%的鲜重甘草细胞，发酵罐通气量为300L//min，培养及成分为3/4MS培养基，附加2， 4-D (Img · L-1)，NAAdmg · L-1)，6-BA (0. 2mg · L-1)，3%蔗糖，PH 值为 5. 9，培养周期为 18 天。实施例1 以甘草悬浮细胞为原料，取细胞粉末^cg,加入20倍甘草细胞粉末质量的水，浸泡 12h，加热水浴提取，温度100°C，提取lh，重复提取2次，浓缩至一定体积，加入4倍体积量无水乙醇，在4°C环境下静置12h，去上清液，用sevage法除去蛋白，45°C鼓风干燥Mh，研磨，得到甘草多糖粉末。取IOOg上述甘草多糖，200g羟丙甲基纤维素，150g乳糖，混合均勻后，过100目筛，加入20gl-5%的乙基纤维素的乙醇溶液，60°C干燥证，然后过20目筛子整粒，即得到甘草多糖颗粒制剂。实施例2 以甘草悬浮细胞为原料，取细胞粉末^cg,加入15倍甘草细胞粉末质量的水，浸泡证，加热水浴提取，温度100°c，提取池，重复提取1次，浓缩至一定体积，加入4倍体积量无水乙醇，在4°C环境下静置12h，去上清液，用sevage法除去蛋白，45°C鼓风干燥Mh，研磨， 得到白色甘草多糖粉末。取IOOg上述甘草多糖，200g乙基纤维素，150g甘露醇，混合均勻后，过100目筛， 加入20gl-5%的乙基纤维素的乙醇溶液，60°C干燥证，然后过20目筛子整粒，即得到甘草多糖颗粒制剂。实施例3 以甘草悬浮细胞为原料，取细胞粉末^cg,加入25倍甘草细胞粉末质量的水，浸泡 8h,加热水浴提取，温度100°C，提取lh，重复提取5次，浓缩至一定体积，加入4倍体积量无水乙醇，在4°C环境下静置12h，去上清液，用sevage法除去蛋白，45°C鼓风干燥Mh，研磨， 得到白色甘草多糖粉末。取IOOg上述甘草多糖，200g醋酸纤维素，150g山梨醇，混合均勻后，过100目筛， 加入20gl-5%的乙基纤维素的乙醇溶液，60°C干燥证，然后过20目筛子整粒，即得到甘草多糖颗粒制剂。实施例4 以甘草悬浮细胞为原料，取细胞粉末^cg,加入20倍甘草细胞粉末质量的水，浸泡 12h，加热水浴提取，温度10(TC，提取1. 5h，重复提取2次，浓缩至一定体积，加入4倍体积量无水乙醇，在4°C环境下静置12h，去上清液，用sevage法除去蛋白，45°C鼓风干燥Mh，研磨，得到白色甘草多糖粉末。取IOOg上述甘草多糖，200g乙基纤维素水分散体，150g木糖醇，混合均勻后，过 100目筛，加入20gl-5%的乙基纤维素的乙醇溶液，60°C干燥证，然后过20目筛子整粒，即得到甘草多糖颗粒制剂。实施例5 以甘草悬浮细胞为原料，取细胞粉末^cg,加入20倍甘草细胞粉末质量的水，浸泡 12h，加热水浴提取，温度100°C，提取lh，重复提取2次，浓缩至一定体积，加入4倍体积量无水乙醇，在4°C环境下静置12h，去上清液，用sevage法除去蛋白，45°C鼓风干燥Mh，研磨，得到白色甘草多糖粉末。取IOOg上述甘草多糖，200g缓释材料(其中羟丙甲基纤维素100g，乙基纤维素 IOOg)，150g填充剂(其中乳糖100g，蔗糖50g)，混合均勻后，过100目筛，加入20gl_5%的乙基纤维素的乙醇溶液，60°C干燥证，然后过20目筛子整粒，即得到甘草多糖颗粒制剂。试验例由天津大学现代中药质量研究开发中心对本发明的免疫调节、抗氧化的保健食品颗粒按《保健食品功能学评价程序和检验方法法》所做的动物试验报告如下1.每日对昆明白鼠经口服分别给予发明颗粒相当于人推荐量的5倍、10倍和30 倍推荐量的低、中、高三个剂量组，另外设置一个对照组，共喂食三十天，进行碳廓清试验和二硝基氟苯诱导小鼠DTH试验，结果获得①以吞服指数标书小鼠的碳廓清能力，经统计学分析，三个剂量组的吞服指数显著高于对照组的吞服指数。②以小鼠左右耳重量之差表示 DHT的程度，经统计学分析，剂量组的差值显著高于对照组的差值。上述动物试验结果表明本发明的保健颗粒具有明显的调节免疫的能力。2.每日对黑腹果蝇经口服分别给予发明颗粒相当于人推荐量的5倍、10倍和30 倍推荐量的低、中、高三个剂量组，另外设置一个对照老龄组，至果蝇寿命终止。每日对18 月大鼠分别给予本发明颗粒相当于人推荐量的5倍、10倍和30倍推荐量的低、中、高三个剂量组，另外设计一个对照组，共45天，结果显示①剂量组与对照组比较，受试果蝇的半数死亡、平均寿命和最高寿命经统计学分析，差异有显著性(P < 0. 05)。②剂量组和对照老龄组比较，大鼠血清中的SOD (超氧化物歧化酶)活力升高经统计学分析，差异有显著性(P < 0. 05)。上述动物试验证明本发明颗粒具有明显具有抗氧化性。


本发明公开了一种甘草多糖颗粒剂及其制备方法，采用组织培养的方法生产出甘草多糖，辅以其它辅料制成甘草多糖颗粒剂，其各成分配比如下甘草多糖100-150份，缓释材料100-300份，填充剂100-200份，粘合剂5-10份。本发明利用发酵罐培养的培养方式生产甘草多糖，开发出甘草多糖颗粒剂，使用方便，可直接吞服，也可冲水服用，生产出甘草多糖具有明显的免疫调剂活性，它能激活巨噬细胞，TB淋巴细胞，增强体液免疫和细胞免疫，改进全身免疫功能和更有效地抑制肿瘤和爱滋病的目的，利用此多糖开发出产品具有明显保健功能，极具开发空间。