谷氨酸脱氢酶的提取方法_高聚霞专利（脱氢酶,谷氨酸,提取）-早鸽网

谷氨酸脱氢酶的一种提取方法

专利名称

谷氨酸脱氢酶的一种提取方法
发明者

高聚霞
公开日

2012年4月11日
申请日期

2011年12月16日
优先权日

2011年12月16日
申请人

西藏金稞集团有限责任公司
文档编号

C12N9/06GK102409030SQ20111042283
关键字

脱氢酶谷氨酸提取
权利要求

1.谷氨酸脱氢酶的一种提取方法，其特征在于以动物肝脏为原料提取获得谷氨酸脱氢酶粗酶液，依次经酸沉淀、硫酸铵盐析、磷酸钙凝胶吸附、透析、柱层析及冷冻干燥后获得谷氨酸脱氢酶成品2.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶的一种提取方法，其特征在于动物肝脏包括猪、牛、羊、鸡等畜禽3.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶的一种提取方法，其特征在于粗酶制备工艺为称取定量动物新鲜肝脏，在高速组织捣碎机中捣碎10分钟QOOOrmp)，加入0. 05M, pH 7. 6 磷酸盐缓冲液(内含0. 15M NaCl)，充分搅拌，置4°C冰箱中过夜抽提，SOOOrmp离心20分钟，收集上清液获得粗酶液，其中加入的磷酸缓冲液体积为动物肝脏的3 5倍4.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶的一种提取方法，其特征在于酸沉淀工艺为谷氨酸脱氢酶粗酶液用10%酸溶液调节pH，4°C放置1小时(期间缓慢搅拌数次)，8000rmp离心15分钟，沉淀用0. IM pH值7. 6磷酸缓冲液溶解，其中10%的酸溶液可以为甲酸、乙酸、盐酸，PH值调节为4. 5 4. 85.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶的一种提取方法，其特征在于硫酸铵盐析工艺为第一次盐析在室温下将酸沉淀定量样品慢慢加入固体(NH4)2SO4到饱和度，4°C 过夜，8000rmp离心10分钟第二次盐析取(NH4)2SO4盐析后的上清液定量，加固体(NH4)2SO4到48%饱和度， 4°C过夜，离心，沉淀溶解在pH 7.6的磷酸缓冲液中第三次盐析在48%硫酸铵饱和度盐析沉淀溶解液中加(NH4) #04至49%饱和度，沉淀溶解在PH 7. 6磷酸盐缓冲液中6.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶的一种提取方法，其特征在于磷酸钙凝胶吸附工艺为取定量49 %硫酸铵盐析沉淀溶解液按比例加Qi3 (PO4) 2凝胶，充分搅拌，4°C冰箱过夜，得上清液，其中硫酸铵盐析液同磷酸钙凝胶的比例为1 0.25 1 0.5(v/w)17.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶的一种提取方法，其特征在于柱层析工艺为磷酸钙凝胶吸附溶液4°C透析后，浓缩上样，用磷酸缓冲液(0.05mol/L，pH 7.6)进行洗脱，流速18mL/h，每管收集3mL ；测定谷氨酸脱氢酶活性，收集活性较高的各管酶液，浓缩后冷冻干燥，制备获得谷氨酸脱氢酶产品，其中柱层析选用柱料为kphadex G-150或kphadex G-2508.如权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶的一种提取方法，其特征在于制备获得的谷氨酸脱氢酶产品的比酶活高于7900U/mg，酶活回收率高于17%
技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及以动物肝脏为原料提取谷氨酸脱氢酶的一种方法
背景技术

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权力要求
说明书
法律状态

专利名称：谷氨酸脱氢酶的一种提取方法谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase)是一种催化使氨还原性地固定到 α-酮戊二酸上形成谷氨酸反应的酶。它广泛分布于细菌、酵母、植物和哺乳动物组织中，其中动物肝脏内含量最高，该酶在氮素代谢中起着中心作用，对细胞内氨的固定或氢的转运起着重要的生物学作用，催化反应如下所示，可将氨固定形成谷氨酸，氨基被用于许多其他氨基酸的合成中。目前，谷氨酸脱氢酶已应用到医疗诊断中，此外，谷氨酸脱氢酶是制备尿素氮试剂盒(速率法)的必需酶之一。本发明公开了一种谷氨酸脱氢酶的提取方法，属于生物技术领域。该方法的主要步骤为动物肝脏原料预处理、粗酶制备、酸沉淀、硫酸铵盐析、磷酸钙凝胶吸附、透析、柱层析、冷冻干燥获得谷氨酸脱氢酶成品。本发明工艺成熟，操作简单、安全，成本低，提取率高，产品回收率可达到17％以上，产品活性高，比酶活可达到7900U/mg以上，同时可实现资源的高效利用，减少废液排放，有效降低环境污染，适合于大规模生产。

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