专利名称：作为s1p1/edg1受体促效剂的新型噻吩衍生物的制作方法 人类免疫统设计成保卫人体以对抗导致感染或疾病的外来微生物及物质。复杂的调节机制确保该免疫反应针对于对抗入侵的物质或有机体，而非对抗宿主。某些情况下，此等控制机制未经调节，而发展出自体免疫反应。未经控制的发炎反应的结果为严重的器官、细胞、组织或关节受损。目前的治疗通常是抑制全身免疫系统，亦严重危及人体对感染的反应能力。此类药物一般包括硫唑嘌呤(azathioprine)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、环孢灵(cyclosporin)或甲胺喋呤(methotrexate)。减少发炎且抑制免疫反应的皮质类固醇在长期治疗使用时，可能导致副作用。非类固醇抗发炎药物(NSAIDs)可减轻疼痛及发炎，然而，其具有相当程度的副作用。备择治疗包括活化或阻断细胞激素讯息传递的药剂。 具有免疫调节性质而不牺牲免疫反应且副作用较低的经口活性化合物可大幅改善目前对于未经控制发炎疾病的治疗。 在器官移植领域中，宿主免疫反应必须加以抑制，以防止器官排斥。器官移植的接受者即使服用免疫抑制药物，仍可能遭受某些排斥作用。排斥最常发生在移植后的最初几周，但排斥反应亦可在移植数个月或甚至数年后发生。一般使用最多达三或四种药剂的组合，以在使副作用减至最小的情况下对排斥产生最大保护作用。目前用于治疗移植器官排斥的标准药物干扰T型或B型白血球细胞的活化中的不同胞内路径。该等药物的实例有干扰细胞激素释出或讯息传递的环孢灵(cyclosporin)、罗植平(daclizumab)、巴利昔单抗(basiliximab)、依维莫司(everolimus)或FK506；抑制核苷酸合成的硫唑嘌呤(azathioprine)或莱氟米特(leflunomide)；或白血球分化抑制剂15-脱氧司伽林(deoxyspergualin)。 广泛的免疫抑制疗法的优点为其效果；然而，此等药物产生的整体性免疫抑制降低免疫系统对抗感染及恶疾的防卫性。此外，标准免疫抑制药物经常于高剂量下使用，可导致或加速器官损坏。
本发明提供新颖的式(I)化合物，其为G-蛋白偶合受体S1P1/EDG1的促效剂，在不影响循环及浸润性T-及B-淋巴细胞的成熟、记忆或增殖的情况下藉由减少其数目来达成强效且长期的免疫抑制效果。循环T-/B-淋巴细胞因S1P1/EDG1促效而减少，可能同时观察到与S1P1/EDG1活化有关的内皮细胞层功能改善，使得该等化合物可用于治疗未经控制的发炎疾病且改善血管功能。 本发明化合物可单独或与抑制T-细胞活化的标准药物结合使用，以提供感染倾向低于标准免疫抑制疗法的新颖免疫抑制疗法。此外，本发明化合物可与低剂量的习用免疫抑制剂疗法结合使用，一方面提供有效的免疫抑制活性，另一方向降低与较高剂量标准免疫抑制药物有关的末期器官受损。与S1P1/EDG1活化有关的改良内皮细胞层功能的发现使化合物具有另一项改善血管功能的优点。
人类S1P1/EDG1受体的核苷酸序列及胺基酸序列技术界已知且公开于例如Hla，T.及Maciag，T.J.Biol Chem.265(1990)，9308-9313；1991年10月17日公告的WO 91/15583；1999年9月16日公告的WO 99/46277。式(I)化合物的效价强度及功效于经口投药后分别使用GTPγS检测决定EC50值且测量大白鼠的循环淋巴细胞而评估(参见实施例)。
前文及后文所使用的一般术语于此揭示内容中较佳具有以下意义，除非另有陈述 当化合物、盐类、医药组合物、疾病及诸如此类者使用复数形式时，亦表示单数化合物、盐或诸如此类者。
应理解前文或后文中任一次提及式(I)、(II)或(III)化合物时皆亦适当且适宜地表示式(I)、(II)或(III)化合物的适当盐类，尤其是医药上可接受的盐类。
术语C1-4-烷基，单独或与其它基团结合时，表示具有一至四个碳原子(较佳一至三个碳原子)的饱和、分支链或较佳直链基团。C1-4-烷基的实例有甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、及叔丁基。
术语C1-4-烷氧基，单独或与其它基团结合时，表示R-O-基团，其中R为C1-4-烷基。C1-4-烷氧基的较佳实例有甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、异丁氧基、仲丁氧基及叔丁氧基。
术语羟基-C2-4-烷氧基表示带有羟基，使得该羟基与C2-4-烷氧基的氧间存在至少两个碳原子的直链或分支链烷氧链。羟基-C2-4-烷氧基的实例有2-羟基-乙氧基、3-羟基-丙氧基、2-羟基-丙氧基、4-羟基-丁氧基、3-羟基-1-甲基-丙氧基及3-羟基-丁氧基。
术语C1-4-烷基胺基或二-(C1-4-烷基)胺基，单独或与其它基团结合时，表示R′-NH-或R′-NR＂-基团，其中R′及R＂各独立地为C1-4-烷基。C1-4-烷基胺基或二-(C1-4-烷基)胺基的较佳实例有甲基胺基、乙基胺基、N，N-二甲基胺基及N-甲基-N-乙基-胺基。
术语卤素表示氟、氯、溴或碘，较佳为氟或氯。
盐类较佳为式(I)化合物的医药上可接受的盐。
形成盐的基团为具有碱或酸性质的基团或原子团。具有至少一个碱性基团或至少一个碱性原子团(例如胺基、不形成肽键的二级胺基或吡啶基原子团)的化合物可与例如无机酸形成酸加成盐。当存有数个碱性基团时，可形成单-或多-酸加成盐。
具有酸性基团诸如羧基或酚羟基的化合物可以形成金属或铵盐，诸如碱金属或碱土金属盐，例如钠、钾、镁或钙盐，或与氨或适当的有机胺形成铵盐，诸如三级单胺，例如三乙基胺或三-(2-羟乙基)-胺，或杂环性碱，例如N-乙基-哌啶或N，N′-二甲基哌嗪。可为盐类的混合物。
兼具有酸性及碱性基团的化合物可形成内盐。
为了隔离或纯化，以及若为进一步作为中间层的化合物，则亦可使用医药上不可接受的盐类，例如苦味酸盐。然而，仅有医药上可接受、无毒性的盐类可使用于治疗目的，因此该等盐类较佳。
医药上可接受的盐一词涵盖与以下对生物无毒性的无机或有机酸的盐类如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、胺基磺酸、磷酸、硝酸、亚磷酸、亚硝酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、草酸、顺丁烯二酸、乳酸、酒石酸、反丁烯二酸、苯甲酸、扁桃酸、肉桂酸、棕榈酸、硬脂酸、谷胺酸、天冬胺酸、甲磺酸、乙磺酸、乙二磺酸、对-甲苯磺酸、水杨酸、琥珀酸、三氟乙酸及诸如此类者，或若式(I)、(II)或式(III)化合物为酸性，则为与无机碱如碱金属或碱土金属碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙及诸如此类者的盐类。医药上可接受的盐类的其它实例可参见＂Salt selection forbasic drugs＂，Int.J.Pharm.(1986)，33，201-217。
式(I)及(III)的化合物可含一或多个立体源或不对称中心，诸如一或多个不对称碳原子。除非另有陈述，否则双键或环上的取代可存在于顺式-或反式-形式(E-或Z-形式)。式(I)及(III)的化合物因此可为立体异构物的混合物或较佳为纯立体异构物。立体异构物的混合物可依熟习此技术者已知的方式分离。
i)本发明有关新颖的式(I)噻吩化合物，
式(I) 其中 A表示*-CO-CH＝CH-、*-CO-CH2CH2-、*-CO-CH2-NH-，

或
其中星号表示连接于式(I)的噻吩基团的键； R1表示氢、甲基或三氟甲基； R2表示正丙基、异丁基或环丙基甲基； R3表示氢、甲基、三氟甲基、乙基、正丙基、异丙基或异丁基； R4表示氢、C1-4-烷基、甲氧基或卤素； R5表示氢、C1-4-烷基、C1-4-烷氧基或卤素； R6表示羟基-C1-4-烷基、二-(羟基-C1-4-烷基)-C1-4-烷基、2，3-二羟基丙基、-CH2-(CH2)n-NR61R62、-CH2-(CH2)n-NHCOR64、-CH2-(CH2)n-NHSO2R63、-(CH2)k-(CHR65)p-CHR66-CONR61R62、-(CH2)nCH(OH)-CH2-NR61R62、-(CH2)nCH(OH)-CH2-NHCOR64、-(CH2)nCH(OH)-CH2-NHSO2R63、-CO-NHR61、羟基、羟基-C2-4-烷氧基、二-(羟基-C1-4-烷基)-C1-4-烷氧基、1-甘油基、2，3-二羟基丙氧基、2-羟基-3-甲氧基-丙氧基、-OCH2-(CH2)m-NR61R62、-OCH2-(CH2)m-NHCOR64、-OCH2-(CH2)m-NHSO2R63、-OCH2-CH(OH)-CH2-NR61R62、-OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64、-OCH2-CH(OH)-CH2-NHSO2R63、-NR61R62、-NHCO-R64或-SO2NH-R61； R61表示氢、甲基、乙基、2-羟乙基、2-羟基-1-羟甲基-乙基、2，3-二羟基-丙基、2-C1-4-烷氧基乙基、3-羟基丙基、3-C1-4-烷氧基丙基、2-胺基乙基、2-(C1-4-烷基胺基)乙基、2-(二-(C1-4-烷基)胺基)乙基、羧基甲基、C1-4-烷基羧基甲基、2-羧基乙基或2-(C1-4-烷基羧基)乙基； R62表示氢或甲基； R63表示甲基、乙基、2-羟乙基、2-甲氧基乙基、甲基胺基、乙基胺基或二甲基胺基； R64表示羟甲基、胺基甲基、甲基胺基甲基、二甲基胺基甲基、2-胺基乙基或2-甲基胺基-乙基； R65表示氢； R66表示氢或羟基；且 若R66表示羟基，则R65可亦表示羟基； m表示整数1或2； n表示0、1或2； k表示0； p表示0或1；且 若p表示1，则k可亦表示1；且 R7表示氢、C1-4-烷基或卤素； 及其盐类。
ii)本发明亦有关
方式i)的噻吩衍生物，其中R6表示羟基-C1-4-烷基、二-(羟基-C1-4-烷基)-C1-4-烷基、2，3-二羟基丙基、-CH2-(CH2)n-NR61R62、-CH2-(CH2)n-NHCOR64、-CH2-(CH2)n-NHSO2R63、-(CH2)k-(CHR65)p-CHR66-CONR61R62、-(CH2)nCH(OH)-CH2-NR61R62、-(CH2)nCH(OH)-CH2-NHCOR64、-(CH2)nCH(OH)-CH2-NHSO2R63、-CO-NHR61、羟基、羟基-C2-4-烷氧基、二-(羟基-C1-4-烷基)-C1-4-烷氧基、1-甘油基、2-羟基-3-甲氧基-丙氧基、-OCH2-(CH2)m-NR61R62、-OCH2-(CH2)m-NHCOR64、-OCH2-(CH2)m-NHSO2R63、-OCH2-CH(OH)-CH2-NR61R62、-OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64、-OCH2-CH(OH)-CH2-NHSO2R63、-NR61R62、-NHCO-R64或-SO2NH-R61。
iii)本发明特定
有关
i)或ii)的噻吩衍生物，其中A表示*-CO-CH2-CH2-、

或
其中星号表示连接于式(I)的噻吩基团的键结。
iv)本发明另一特定
有关
i)或ii)的噻吩衍生物，其中A表示*-CO-CH2-CH2-，其中星号表示连接于式(I)的噻吩基团的键结。
v)本发明另一特定
有关
i)或ii)的噻吩衍生物，其中A表示
其中星号表示连接于式(I)的噻吩基团的键结。
vi)本发明另一特定
有关
i)或ii)的噻吩衍生物，其中A表示
vii)本发明另一特定
有关
i)至vi)中任一项的噻吩衍生物，其中R1表示氢或甲基。
viii)本发明另一特定
有关
i)至vi)中任一项的噻吩衍生物，其中R1表示氢。
ix)本发明另一特定
有关
i)至vi)中任一项的噻吩衍生物，其中R1表示甲基。
x)本发明较佳
有关
i)至ix)中任一项的噻吩衍生物，其中R2表示异丁基。
xi)本发明另一较佳
有关
i)至x)中任一项的噻吩衍生物，其中R3表示甲基、乙基、正丙基或异丁基。
xii)本发明另一较佳
有关
i)至x)中任一项的噻吩衍生物，其中R3表示甲基。
xiii)本发明另一较佳
有关
i)至xii)中任一项的噻吩衍生物，其中R4表示甲氧基且R5及R7表示氢或其中R4表示氢且R5表示甲基、乙基或甲氧基且R7表示甲基、乙基或卤素。
xiv)本发明另一较佳
有关
i)至xii)中任一项的噻吩衍生物，其中R4表示甲氧基且R5及R7表示氢。
xv)本发明另一较佳
有关
i)至xii)中任一项的噻吩衍生物，其中R4表示氢且R5及R7表示甲基。
xvi)本发明另一较佳
有关
i)至xii)中任一项的噻吩衍生物，其中R4表示氢且R5及R7表示乙基。
xvii)本发明特佳
有关
i)至xii)中任一项的噻吩衍生物，其中R4表示氢，R5表示甲基且R7表示乙基。
xviii)本发明另一较佳
有关
i)至xii)中任一项的噻吩衍生物，其中R4表示氢，R5表示甲氧基且R7表示氯原子。
xix)本发明另一较佳
有关体实施方式i)至xii)中任一项的噻吩衍生物，其中R4表示氢，R5表示甲基且R7表示氯原子。
xx)本发明另一较佳
有关
i)至xix)中任一项的噻吩衍生物，其中R6表示-(CH2)k-(CHR65)p-CHR66-CONR61R62。
xxi)本发明特佳
有关
i)至xix)中任一项的噻吩衍生物，其中R6表示-(CH2)k-(CHR65)p-CHR66-CONR61R62，其中k表示0，p表示1且R65及R66表示氢。
xxii)本发明较佳
有关
i)至xix)中任一项的噻吩衍生物，其中R6表示-OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64。
xxiii)本发明特佳
有关
i)至xix)中任一项的噻吩衍生物，其中R6表示-OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64，其中R64表示羟甲基。
xxiv)本发明特定
有关
i)及iii)至xix)中任一项的噻吩衍生物，其中R6表示2，3-二羟基丙氧基。
xxv)本发明另一特定
有关
ii)至xix)中任一项的噻吩衍生物，其中R6表示1-甘油基。
xxvi)本发明特佳
有关
i)的噻吩衍生物，其中 A表示*-CO-CH＝CH-、*-CO-CH2CH2-、

或
其中星号表示连接于式(I)的噻吩基团的键结； R1表示氢或甲基； R2表示正丙基或异丁基； R3表示氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基或异丁基； R4表示氢或甲氧基； R5表示氢、C1-4-烷基或C1-4-烷氧基； R6表示羟基；羟基-C2-4-烷氧基；2，3-二羟基丙氧基；-OCH2-(CH2)m-NHCOR64；-OCH2-CH(OH)-CH2-NR61R62；-OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64；-OCH2-CH(OH)-CH2-NHSO2R63；或-CH2-CH2-CONHR’，其中R′为2-羟乙基、2-羟基-1-羟甲基-乙基、羟基羰基甲基或甲氧基羰基甲基； R61及R62表示氢； R63表示甲基； R64表示羟甲基、甲基胺基甲基或2-甲基胺基-乙基； m表示整数1或2；且 R7表示氢、C1-4-烷基或卤素。
xxvii)本发明另一特佳
有关
ii)的噻吩衍生物，其中 A表示*-CO-CH＝CH-、*-CO-CH2CH2-、

或
其中星号表示连接于式(I)的噻吩基团的键结； R1表示氢或甲基； R2表示正丙基或异丁基； R3表示氢、甲基、乙基、正丙基、异丙基或异丁基； R4表示氢或甲氧基； R5表示氢或C1-4-烷基； R6表示羟基，羟基-C2-4-烷氧基、1-甘油基、-OCH2-(CH2)m-NHCOR64、-OCH2-CH(OH)-CH2-NR61R62或-OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64； R61及R62表示氢； R64表示羟甲基、甲基胺基甲基或2-甲基胺基-乙基； m表示整数2；且 R7表示氢或C1-4-烷基。
xxviii)本发明较佳
有关
i)或ii)的噻吩衍生物，其中R1表示氢或甲基，R2表示异丁基，R3表示氢或甲基，R4表示氢，R5及R7表示C1-4-烷基、R6表示-OCH2-CH(OH)-CH2-NHCOR64且A表示

或
其中星号表示连接于式(I)的噻吩基团的键结。
xxix)特佳的式(I)噻吩化合物有 3-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-1-(4-异丁基-3-丙基-噻吩-2-基)-丙烯酮； 1-(3，4-二异丁基-噻吩-2-基)-3-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-丙烯酮； 1-(3，4-二异丁基-噻吩-2-基)-3-(4-羟基-3，5-二甲基-苯基)-丙烷-1-酮； 3-[4-((S)-2，3-二羟基-丙氧基)-3，5-二甲基-苯基]-1-(4-异丁基-3-丙基-噻吩-2-基)-丙烷-1-酮； 3-[4-((S)-2，3-二羟基-丙氧基)-3，5-二甲基-苯基]-1-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-丙烷-1-酮； 2-羟基-N-(2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-(3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-(3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； 2-羟基-N-(2-羟基-3-{4-[3-(4-异丁基-3-丙基-噻吩-2-基)-3-酮基-丙基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-(3-{4-[3-(3，4-二异丁基-噻吩-2-基)-3-酮基-丙基]-2，6-二甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； 2-羟基-N-(2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-(2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-2-甲基胺基-乙酰胺； 2-羟基-N-(3-{4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； 3-{4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙烷-1，2-二醇； 3-{4-[5-(3-乙基-4-异丁基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙烷-1，2-二醇； 3-{4-[5-(4-异丁基-3-丙基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙烷-1，2-二醇； 3-{4-[5-(3，4-二异丁基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙烷-1，2-二醇； 2-羟基-N-(2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-(3-{4-[5-(3-乙基-4-异丁基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； 2-羟基-N-(2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3-丙基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-(3-{4-[5-(3，4-二异丁基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； 3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-3-甲氧基-苯氧基}-丙烷-1，2-二醇； 2-羟基-N-(2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-3-甲氧基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺；及 2-羟基-N-(2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺。
xxx)其它特佳的式(I)噻吩化合物有 N-((S)-3-{2，6-二乙基-4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((S)-3-{2-氯-4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((R)-3-{2-氯-4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； 3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯基}-N-(2-羟基-乙基)-丙酰胺； 2-羟基-N-((S)-2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； 2-羟基-N-((R)-2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-((R)-3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((S)-3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-(2-羟基-1-羟甲基-乙基)-3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯基}-丙酰胺； 2-羟基-N-((S)-2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； 2-羟基-N-((R)-2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-((S)-3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((R)-3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((S)-3-{2-氯-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((R)-3-{2-氯-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((S)-3-{2，6-二乙基-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((R)-3-{2，6-二乙基-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((S)-3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((R)-3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； 2-羟基-N-((S)-2-羟基-3-{4-[3-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-5-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； 2-羟基-N-((R)-2-羟基-3-{4-[3-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-5-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； 2-羟基-N-((S)-2-羟基-3-{4-[3-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-3-酮基-丙基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； 2-羟基-N-((R)-2-羟基-3-{4-[3-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-3-酮基-丙基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-((S)-3-{2-乙基-4-[3-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-3-酮基-丙基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((R)-3-{2-乙基-4-[3-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-3-酮基-丙基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((S)-3-{2-氯-4-[5-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； N-((R)-3-{2-氯-4-[5-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺； 2-羟基-N-((S)-2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； 2-羟基-N-((R)-2-羟基-3-{4-[5-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯氧基}-丙基)-乙酰胺； N-((R)-3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺；及 N-((S)-3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-6-甲基-苯氧基}-2-羟基-丙基)-2-羟基-乙酰胺。
xxxi)本发明另一方面有关新颖的式(II)化合物
式(II) 其中R1及R3如前文式(I)所定义，且 R8表示-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3或-CN； 及其盐类。
xxxii)本发明另一方面有关新颖的式(III)化合物
式(III) 其中A、R1、R2、R3、R4、R5、R65、R66、R7、k及p如前文式(I)所定义； 及其盐类。
式(I)化合物及其医药上可接受的盐可于例如用于经肠、非经肠或局部投药的医药组合物形式下作为药剂。其可例如于例如锭剂、涂锭、糖衣锭、硬质及软质明胶胶囊、溶液、乳液或悬浮液形式下经口投药、于例如栓剂形式下直肠投药、于例如注射溶液或输液溶液形式下非经肠投药或于例如软膏、乳霜或油形式下局部投药。
该医药组合物的制造可依熟习此技术者熟悉的方式(参见例如Mark Gibson，Editor，Pharmaceutical Preformulation andFormulation，IHS Health Group，Englewood，CO，USA，2001；Remington，The Science and Practice of Pharmacy，20th Edition，Philadelphia College of Pharmacy and Science)借着使所述的式(I)化合物或其医药上可接受的盐类、视情况结合其它治疗有效物质与适当的无毒性、惰性、医药上可接受的固体或液体载剂材料及(若需要)一般医药佐剂制成一般投药形式而进行。
包含式(I)化合物的医药组合物可用于预防及/或治疗与活化的免疫系统有关的疾病或病症。
该等疾病或病症选自由以下组成的群移植器官、组织或细胞的排斥；因移植产生的移植物抗宿主疾病；自体免疫症候群，包括类风湿性关节炎；全身红斑性狼疮；抗磷脂质症候群；桥本甲状腺炎(Hashimoto′s thyroiditis)；淋巴细胞性甲状腺炎；多发性硬化；重症肌无力；第I型糖尿病；葡萄膜炎；巩膜外层炎；巩膜炎；川畸病(Kawasaki′s disease)、葡萄膜视网膜炎；后部葡萄膜炎；与贝西氏症(Behcet′s disease)有关的葡萄膜炎；葡萄膜脑膜炎症候群；过敏性脑脊髓炎；慢性移植物血管病变；感染后自体免疫疾病包括风湿热及感染后肾小球性肾炎；发炎及过度增殖性皮肤疾病；牛皮癣；牛皮癣性关节炎；异位性皮肤炎；肌肉病变；肌肉发炎；骨髓炎；接触性皮肤炎；湿疹性皮肤炎；脂溢性皮肤炎；扁平苔藓；天疱疮；水疱性类天疱疮；表皮分解性水疱症；荨麻疹；血管水肿；血管炎；红斑症；皮肤嗜酸细胞增多症；痤疮；硬皮病；头皮圆形秃；角结膜炎；春季结膜炎；角膜炎；疱疹性角膜炎；角膜上皮失养症；角膜白斑；眼部天疱疮；侵蚀性角膜溃疡(Mooren′s ulcer)；溃疡性角膜炎；巩膜炎；葛瑞夫兹氏眼病变(Graves′ophthalmopathy)；Vogt-Koyanagi-Harada症候群；类肉瘤病；花粉过敏症；可逆气管阻塞性疾病；支气管性气喘；过敏性气喘；内因性气喘；外因性气喘；粉尘性气喘；慢性或顽固型气喘；迟发性气喘及气管反应过度；细支气管炎；支气管炎；子宫内膜异位；睪丸炎；胃溃疡；缺血性肠疾；发炎性肠疾；坏死性肠炎；与热伤有关的肠损坏；腹腔疾病；直肠炎；嗜酸性粒细胞性肠胃炎；肥大细胞增生症；克隆氏症(Crohn′s disease)；溃疡性结肠炎；因局部缺血疾病及血栓形成所致的血管损伤；动脉硬化；脂肪心；心肌炎；心肌梗塞；主动脉炎症候群；因病毒性疾病所致的恶质病；血管栓塞；偏头痛；鼻炎；湿疹；间质性肾炎；由IgA引发的肾病变；Goodpasture氏症候群；溶血性尿毒症症候群；糖尿病性肾病变；肾小球性硬化症；肾小球性肾炎；肾小管间质性肾炎；间质性膀胱炎；多发性肌肉发炎；Guillain-Barré症候群；Meniere氏症；多神经炎；多发性神经炎；脊髓炎；单神经炎；神经根病变；甲状腺机能亢进；Basedow氏症；甲状腺毒症；单纯红血球再生不良；再生不良性贫血；先天性再生不良性贫血；自发性血小板缺乏紫斑症；自体免疫性溶血性贫血；自体免疫性血小板过低症；颗粒性白血球缺乏症；恶性贫血；巨红血球性贫血；红血球发生不能；骨质疏松；纤维性肺；特发性间质性肺炎；皮肌炎；寻常白斑症；寻常鱼鳞病；光变态过敏症；皮肤T细胞淋巴瘤；结节性多动脉炎；亨丁顿氏舞蹈症；西德纳姆氏舞蹈症；心肌病；心肌炎；硬皮病；韦格纳肉芽肿(Wegener′sgranuloma)；Sjogren氏症候群；肥胖症；嗜酸性粒细胞性筋膜炎；牙龈、牙周组织、齿槽骨、牙骨质损伤；男性秃发或老年性儿发；肌肉萎缩症；脓皮症；Sezary氏症候群；垂体炎；慢性肾上腺功能不全；阿狄森氏症(Addison′s disease)；在保存时发生的器官局部缺血-再灌流损伤；内毒素休克；伪膜性结肠炎；因药物或放射线引发的结肠炎；缺血性急性肾功能不全；慢性肾功能不全；肺癌；淋巴来源的恶性变化；急性或慢性淋巴细胞白血病；淋巴瘤；肺气肿；白内障；铁质沉着症；视网膜色素变性；老年性黄斑变性；玻璃体结疤；角膜碱灼伤；皮肤炎红斑症；大疱性皮肤炎；水泥皮肤炎；齿龈炎；牙周发炎；败血症；胰腺炎；外周动脉疾病；癌变；实体癌瘤；癌症转移；高空症；自体免疫性肝炎；原发性胆汁郁积性肝硬化；硬化性胆管炎；肝脏部分切除；急性肝坏死；肝硬化；酒精性肝硬化；肝衰竭；重症肝衰竭；晚发性肝衰竭；及＂慢加急性＂肝衰竭。
待以式(I)化合物治疗及/或预防的较佳疾病或病症选自由以下组成的群移植器官诸如肾脏、肝脏、心脏、肺脏、胰脏、角膜及皮肤的排斥；由干细胞移植所造成的移植物抗宿主疾病；自体免疫症候群包括类风湿性关节炎、多发性硬化、发炎性肠疾诸如克隆氏症(Crohn′s disease)及溃疡性结肠炎、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、甲状腺炎诸如桥本甲状腺炎(Hashimoto′s thyroiditis)、葡萄膜视网膜炎；特异性疾病诸如鼻炎、结膜炎、皮肤炎；气喘；第I型糖尿病；感染后自体免疫疾病包括风湿热及感染后肾小球性肾炎；实体癌症及肿瘤转移。
待以式(I)化合物治疗及/或预防的特佳佳疾病或病症选自由以下组成的群选自肾脏、肝脏、心脏、肺脏、胰脏、角膜及皮肤的移植器官的排斥；由干细胞移植所造成的移植物抗宿主疾病；选自类风湿性关节炎、多发性硬化、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、克隆氏症(Crohn′s disease)及桥本甲状腺炎(Hashimoto′sthyroiditis)的自体免疫症候群；及异位性皮肤炎。
本发明亦有关预防或治疗本文所提及的疾病或病症的方法，其包含将医药活性量的式(I)化合物投予个体。
此外，式(I)化合物亦可与一或数种免疫调节剂结合使用于预防及/或治疗本文所提及的疾病及病症。根据本发明较佳
，该等药剂选自由以下组成的群免疫抑制剂、皮质类固醇、NSAID′s、胞毒性药物、粘着分子抑制剂、细胞激素、细胞激素抑制剂、细胞激素受体促效剂及重组细胞激素受体。
本发明亦有关式(I)化合物用于制备医药组合物的用途，其视情况与一或数种免疫调节剂结合使用，以预防或治疗本文所提及的疾病及病症。
本发明亦有关式(I)化合物的前药，其于体内转化成式(I)化合物本身。因此，应理解任何提及式(I)化合物时皆亦提及对应的适当式(I)化合物前药。
式(I)化合物可藉以下方法、实施例所示方法或藉类似方法制造。最佳反应条件可视所使用的特定反应物或溶剂而改变，但该等条件可由熟习此技术者藉例行最佳化方法决定。
本发明式(I)化合物可根据以下所列的一般反应序列制备。仅描述数种产生式(I)化合物的合成可能性。


%3CIMG%20SRC= 若A表示-CO-CH2-CH2-，则式(I)化合物可借着结构1的化合物与结构2的化合物于Grignard条件下(较佳于低于室温的温度下)反应而制备。结构2的Grignard试剂根据标准方法制备。存在于残基R4至R7中的官能基可能需要暂时性保护或甚至可在Grignard反应的后于附加步骤中导入。结构1的Weinreb酰胺化合物借着于偶合剂诸如EDC、DCC等存在下，以N，O-二甲基羟基胺盐酸盐处理结构3化合物而制备。(M.Mentzel，H.M.R.Hoffmann，N-Methoxy N-Methyl amides(Weinreb amides)in modern organicsynthesis，Journal fuer Praktische Chemie/Chemiker-Zeitung 339(1997)，517-524；J.Singh，N.Satyamurthi，I.S.Aidhen，Thegrowing synthetic utility of Weinreb′s amide，Journal fuerPraktische Chemie(Weinheim，Germany)342(2000)340-347；V.K.Khlestkin，D.G.Mazhukin，Recent advances in the applicationof N，O-dialkylhydroxylamines in organic chemistry，CurrentOrganic Chemistry 7(2003)，967-993)。

结构4结构5 若A表示-CO-CH＝CH-，则式(I)化合物可借着结构4化合物与结构5化合物于碱或酸存在下反应而制备。其中A表示-CO-CH2-CH2-的式(I)化合物亦可借着其中A表示-CO-CH＝CH-的式(I)化合物(结构6)与氢于催化剂诸如Pd/C、Pt/C、PtO2等存在下于溶剂诸如乙醇、甲醇、THF等中进行反应而制备。

结构6 其中A表示-CO-CH2-NH-的式(I)化合物可借着结构7化合物与结构8化合物于碱诸如K2CO3、Na2CO3、第三丁醇钾、NaOH、NaH、三乙基胺、DIPEA等存在或不存在下，于溶剂诸如丙酮、DMF、THF、二恶烷等或其混合物中进行反应而制备。结构7化合物可借着结构4化合物与溴化剂诸如二溴化苯基三甲基溴化铵、苄基三甲基三溴化铵、二溴三苯膦等于溶剂诸如DCM、氯仿、THF、二乙醚、甲醇、乙醇等或其混合物中进行反应而制备。

结构7结构8 结构4化合物可借着于溶剂诸如二乙醚、THF及二恶烷中于-20及50℃之间的温度下，以MeLi处理结构3化合物而制备。或者，结构4化合物可借着结构1化合物与溴化甲基镁反应而制备。
式(I)化合物，其表示5-噻吩-2-基-[1，2，4]恶二唑衍生物，借着结构9化合物于溶剂诸如二甲苯、甲苯、苯、吡啶、DMF、二氯甲烷、乙酸、三氟乙酸等中，于室温或高温下，于辅剂诸如酸(例如TFA、乙酸、HCl等)、碱(例如NaH、NaOAc、Na2CO3、K2CO3、三乙基胺等)、四烷基铵盐或水移除剂(例如草酰氯、羧酸酐、POCl3、PCl5、P4O10、分子筛等)存在或不存在下进行反应而制备(文献例如A.R.Gangloff，J.Litvak，E.J.Shelton，D.Sperandio，V.R.Wang，K.D.Rice，Tetrahedron Lett.42(2001)，1441-1443；T.Suzuki，K.Iwaoka，N.Imanishi，Y.Nagakura，K.Miyta，H.Nakahara，M.Ohta，T.Mase，Chem.Pharm.Bull.47(1999)，120-122；R.F.Poulain，A.L.Tartar，B.P.Déprez，TetrahedronLett.42(2001)，1495-1498；R.M.Srivastava，F.J.S.Oliveira，D.S.Machado，R.M.Souto-Maior，Synthetic Commun.29(1999)，1437-1450；E.O.John，J.M.Shreeve，Inorganic Chemistry 27(1988)，3100-3104；B.Kaboudin，K.Navaee，Heterocycles 60(2003)，2287-2292)。

结构9化合物可借着结构3化合物与结构10化合物于溶剂诸如DMF、THF等中于一或多种偶合剂诸如TBTU、DCC、EDC、HBTU、HOBt、CDI等存在或不存在下且于碱诸如三乙基胺、Hünig′s碱、NaH、K2CO3等存在或不存在下进行反应而制备(文献例如A.Hamze，J.-F.Hernandez，P.Fulcrand，J.Martinez，J.Org.Chem.68(2003)7316-7321；及前文所列的文献)。

结构3 结构10 式(I)化合物，其表示5-噻吩-2-基-[1，3，4]恶二唑或3-噻吩-2-基-[1，2，4]恶二唑衍生物，依类似方式制备(文献例如C.T.Brain，J.M.Paul，Loong，P.J.Oakley，Tetrahedron Lett.40(1999)3275-3278)。因此，式(I)化合物，其表示3-噻吩-2-基-[1，2，4]恶二唑衍生物借着结构11化合物与结构12化合物反应而制备。

结构11结构12 结构10及11的化合物可分别借着结构13及14化合物与羟基胺或其一种盐于溶剂诸如甲醇、乙醇、吡啶等中于碱诸如Na2CO3、K2CO3、三乙基胺等存在或不存在下进行反应而制备(文献例如T.Suzuki，K.Iwaoka，N.Imanishi，Y.Nagakura，K.Miyta，H.Nakahara，M.Ohta，T.Mase，Chem.Pharm.Bull.47(1999)，120-122；J.Cui，D.Crich，D.Wink，M.Lam，A.L.Rheingold，D.A.Case，W.T.Fu，Y.Zhou，M.Rao，A.J.Olson，M.E.Johnson，Bioorg.Med.Chem.11(2003)，3379-3392；R.Miller，F.Lang，Z.J.Song，D.Zewge，WO 2004/035538(Merck & Co.，Inc.，USA)；B.Kaboudin，K.Navaee，Heterocycles 60(2003)，2287-2292)。

结构13 结构14 视存在于结构2、5、6、8、9、10及12中的残基R4至R7的官能基性质而定，此等官能基可能需要暂时性保护。适当的保护基熟习此技术者已知且包括例如用以保护醇的苄基或三烷基甲硅烷基、用以保护二醇等的缩酮。此等保护基可根据标准方法采用(例如T.W.Greene，P.G.M.Wuts，Protective Groups in OrganicSynthesis，3rd Edition，Wiley New York，1991；P.J.Kocienski，Protecting Groups，Thieme Stuttgart，1994)。或者，所需的残基R4至R7亦可在结构1、4、7、3及11化合物分别与适当的结构2、5、8、12及13化合物前驱物反应的后的稍后步骤中导入。结构2、5、8、12及13的化合物或其前驱物为市售品或根据熟习此技术者已知的方法制备。
式(I)化合物，其中R6表示-(CH2)k-(CHR65)p-CHR66-CONR61R62，可借着式(III)化合物与适当的胺于偶合剂诸如TBTUEDC等存在下进行反应而制备。式(III)化合物依类似前文针对式(I)化合物制备的方法而制备。

结构15 结构3化合物可借着结构15的化合物与碱水溶液诸如NaOH水溶液、LiOH水溶液、KOH水溶液等或酸诸如HCl水溶液、TFA等于溶剂诸如水、乙醇、甲醇、THF等或其混合物中进行反应而制备。

结构16 结构15 结构15的化合物借着于溶剂诸如甲醇、乙醇、THF、DMF等或其混合物中，较佳于高温下，以非水性碱诸如NaOMe、NaOEt、KOtBu、DBU等处理结构16的化合物而制备。
结构16化合物借着于碱诸如NaH、NaOEt、NaOMe、第三丁醇钾等存在下，于THF、二恶烷、DMF、乙醇、甲醇等或其混合物中，以氢硫基乙酸或氢硫基乙腈(可于原位自硫代乙酸S-氰基甲基酯生成)处理结构17的化合物而制备。此外，结构3的化合物亦可以单锅式三阶法依前述反应序列自结构17化合物开始制备。

结构17结构16 结构17的化合物借着于溶剂诸如DCM、CHCl3、THF等中，使结构18化合物与氯化剂诸如草酰氯或CCl4/PPh3反应而制备(文献例如R.E.Mewshaw，Tetrahedron Lett.30(1989)，3753-3756；F.A.Lakhvich，T.S.Khlebnikova，A.A.Akhrem，ZhurnalOrganicheskoi Khimii 25(1989)，2541-2549；S.A.Popov，A.V.Tkachev，Synthetic Communications(2001)，31(2)，233-243)。

结构18 结构17
结构19 结构16的化合物亦可借着结构18化合物与例如三氟甲磺酸酐于DCM中于碱存在下反应，产生结构19化合物(文献例如G.T.Crisp，A.G.Meyer，J.Org.Chem.57(1992)6972-6975；R.M.Keenan，et al.J.Med.Chem.35(1992)3858-3872)，的后藉以氢硫基乙酸酯或氢硫基乙腈如前述般处理而制得。
结构18化合物可借着于碱诸如第三丁醇钾、NaOMe、NaH、LDA等存在下，于溶剂诸如THF、甲苯、EtOH等中，于介于0及60℃间的温度下，以适当的酰化剂诸如甲酸乙酯或甲酯、乙酸甲酯或乙酯、丙酸甲酯或乙酯、氯甲酸酯、乙酰氯等将结构20化合物酰化而制备。(文献例如Ch.Kashima，S.Shibata，H.Yokoyama，T.Nishio，Journal of Heterocyclic Chemistry 40(2003)，773-782；I.Yavari，Issa，M.Bayat，Tetrahedron 59(2003)，2001-2005；J.P.Konopelski，J.Lin，P.J.Wenzel，H.Deng，G.I.Elliott，B.S.Gerstenberger，Organic Letters 4(2002)4121-4124；C.Wiles，P.Watts，S.J.Haswell，E.Pombo-Villar，TetrahedronLetters 43(2002)，2945-2948；R.Faure，A.Frideling，J.-P.Galy，I.Alkorta，J.Elguero，Heterocycles 57(2002)307-316；via imineM.Hammadi，D.Villemin，Synthetic Communications 26(1996)2901-2904)。

结构20 结构18 结构18的化合物亦可借着于熟习此技术者已知的条件下将适当的结构21二羰基化合物烷基化而制备。

结构21 结构20及21的化合物或为市售品或根据熟习此技术者已知方法制备。其中R3表示氢的结构17化合物亦可借着含所需残基R1的结构20化合物于Vilsmeyer条件下于诸如DCM溶剂中与POCl3/DMF反应而制备(例如G.Alvernhe，D.Greif，B.Langlois，A.Laurent，I.Le Dréan，M.Pulst，A.Selmi，M.Weissenfels，Bull.Soc.Chim.Fr.131(1994)167-172)。
实施方式 实施例 以下实施例用以说明本发明，但完全不限制其范围。
所有温度皆以℃表示。化合物以1H-NMR(300MHz)或13C-NMR(75MHz)描述特性(Varian Oxford；化学位移以相对于所使用溶剂的ppm表示；多重性s＝单重峰，d＝双重峰，t＝三重峰；p＝五重峰，hex＝六重峰，hept＝七重峰，m＝多重峰，br＝宽峰，耦合常数以Hz表示)；以LC-MS描特性(Finnigan Navigator，具有HP 1100二元泵及DAD，管柱4.6×50毫米，Zorbax SB-AQ，5微米，120

，梯度于水中5-95％乙腈，1分钟，含有0.04％三氟乙酸，流速4.5毫升/分钟)，tR以分钟表示；藉TLC描述特性(来自Merck的TLC-板，硅胶60 F254)；或藉熔点描述特性。化合物藉制备HPLC纯化(管柱X-terra RP18，50×19毫米，5微米，梯度含有0.5％甲酸的10-95％于水中乙腈)或藉MPLC纯化(Labomatic MD-80-100泵，线性UVIS-201侦测器，管柱350 x 18毫米，Labogel-RP-18-5s-100，梯度10％于水中的甲醇至100％甲醇)。缩写(本发明所使用) aq. 溶液 atm 大气压 Boc-肌胺酸 N-第三丁氧羰基-肌胺酸 BSA 牛血清蛋白 Bu 丁基 CC 管柱层析 CDI 羰基二咪唑 DBU 1，8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯 DCC 二环己基碳化二酰亚胺 DCM 二氯甲烷 DIPEA 二异丙基-乙基胺，Hünig氏碱，乙基-二异丙基胺 DMF 二甲基甲酰胺 DMSO 二甲基亚砜 DPPP 1，3-双-(二苯基膦基)-丙烷 EA 乙酸乙酯 EDC N-(3-二甲基胺基丙基)-N′-乙基-碳化二酰亚胺 Et 乙基 EtOH 乙醇 h小时(等) HBTU 六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓 HOBt 1-羟基苯并三唑 HPLC 高效液相层析 HV 高度真空条件 KOtBu第三丁醇钾 LC-MS液体层析-质谱 LDA 二异丙基胺化锂 Me 甲基 MeOH 甲醇 min 分钟(等) MPLC 中压液体层析 NaOAc乙酸钠 NMO N-甲基-吗啉-N-氧化物 OAc 乙酸化物 Ph 苯基 prep.制备 rt 室温 sat. 饱和 S1P 神经鞘胺醇1-磷酸酯 TBTU 四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，2，3，3-四甲基脲鎓 Tf 三氟甲磺酰基 TFA三氟乙酸 THF四氢呋喃 TLC薄层层析 tR 以分钟表示的滞留时间 中间物A1
a)磷酰氯(53.7克，350毫摩尔)缓缓添加于在5℃搅拌的DMF(60毫升)中。完全添加时，澄清溶液于5℃搅拌另外30min，之后逐滴添加5-甲基-2-己酮(20克，175毫摩尔)。黄色溶液于0℃搅拌30min，之后于室温搅拌90min。混合物变温(40℃)且形成浓稠悬浮液。混合物冷却至25℃且持续搅拌1h，之后倒入NaOAc水溶液(80克)/冰混合物。混合物以二乙醚萃取两次。有机萃取液以水洗涤，结合，以MgSO4干燥，过滤并蒸发产生粗制3-氯-2-异丁基-丁-2-烯醛(35.4克)的黄色油，LC-MStR＝0.97min。
b)钠(10.7克，467毫摩尔)溶解于乙醇(500毫升)中，形成的溶液以THF稀释(100毫升)之后于5℃缓缓添加溶解于THF(70毫升)中的氢硫基-乙酸乙基酯(33.7克，280毫摩尔)。混合物于室温搅拌1h，之后于8℃缓缓添加3-氯-2-异丁基-丁-2-烯醛(30克，187毫摩尔)于THF(100毫升)中的溶液。形成的黄色悬浮液于室温搅拌16h。反应混合物以二乙醚稀释(500毫升)以稀NaOCl水溶液洗涤，之后以1 N HCl水溶液及水洗涤。有机萃取液以MgSO4干燥，过滤并蒸发。残留橙色油溶解于乙醇(150毫升)并添加2 N LiOH水溶液(50毫升)。混合物于50℃搅拌16h，以2 N HCl水溶液酸化并以EA萃取。有机萃取液以MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物自EA/庚烷再结晶产生4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-甲酸(10.5克)的无色结晶；LC-MStR＝0.92分钟，[M+1+CH3CN]＝240.16；1H NMR(CDCl3)δ7.59(s，1H)，2.40-2.37(m，5H)，1.84(hept，J＝7.0Hz，1H)，0.90(d，J＝7.0Hz，6H)。
中间物A2
于-78℃下，将第三丁基锂(20毫升，于戊烷中1.5M)缓缓添加于4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-甲酸(2.0克，10.1毫摩尔)于THF(100毫升)中的溶液中。混合物变深色。混合物于-78℃搅拌15分钟，的后添加碘乙烷(6.18克，39.6毫摩尔)于THF(10毫升)中的溶液。混合物于-78℃搅拌1h。添加额外碘乙烷(6.18克，39.6毫摩尔)，混合物以15h时间温至室温。反应藉添加1 M NaH2PO4水溶液(20毫升)及1 N HCl水溶液(50毫升)而中止，混合物以氯仿(1×100毫升，3×30毫升)萃取。结合的有机萃取液以MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物于硅胶上以MPLC纯化，以于己烷中的EA梯度溶离产生3-乙基-4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-甲酸(1.29克)的黄色固体；LC-MStR＝1.00分钟，[M+1+CH3CN]＝268.29；1H NMR(CDCl3)δ 2.92(q，J＝7.0Hz，2H)，2.40(s，3H)，2.37(d，J＝7.6Hz，2H)，1.80(n，J＝7.0Hz，1H)，1.15(t，J＝7.6Hz，3H)，0.92(d，J＝7.0Hz，6H)。
中间物A3
a)KOtBu(50克，446毫摩尔)于THF(400毫升)中的溶液于30分钟期间添加甲酸乙酯(92克，1.25摩尔)。发生剧烈产气。混合物于添加期间以10℃水浴冷却。完全添加之后，混合物搅拌至停止产气(15分钟)。混合物于0℃下以冰冷却，于30分钟期间缓缓添加5-甲基-2-己酮(34.25克，300毫摩尔)与甲酸乙酯(41克，0.55摩尔)的混合物。混合物搅拌15h，以EA稀释(500毫升)以1N HCl水溶液(100毫升)、1 M NaH2PO4水溶液(100毫升)及盐水(100毫升)洗涤。有机萃取液经干燥(MgSO4)，过滤并蒸发产生粗制4-羟基-3-异丁基-丁-3-烯-2-酮(28克)，其不进一步纯化而直接使用；LC-MStR＝0.80分钟，[M+1]＝143.39。
b)4-羟基-3-异丁基-丁-3-烯-2-酮(28克，197毫摩尔)于氯仿(350毫升)中的溶液于5分钟期间缓缓添加草酰氯(44.3克，349毫摩尔)于氯仿(50毫升)的溶液。形成的暗棕色混合物于室温搅拌2h，之后冷却至0℃且以冰处理(100克)，之后以1N NaOH水溶液(100毫升)处理。当停止相当剧烈的气体释出时，分相(丢弃仍为酸性的水相)。有机相以1N NaOH水溶液(3×75毫升)及1 N aq.NaH2PO4(75毫升)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发产生粗制4-氯-3-异丁基-丁-3-烯-2-酮(31.6克)的暗棕色油；LC-MStR＝0.97分钟。
c)KOtBu(44.2克，394毫摩尔)分批添加于乙醇(200毫升)中。混合物于20℃搅拌30分钟以溶解所有KOtBu。添加氢硫基-乙酸乙基酯(47.3克，394毫摩尔)且温度保持于20℃。此溶液于20℃缓缓添加于粗制4-氯-3-异丁基-丁-3-烯-2-酮(31.6克，197毫摩尔)于THF(350毫升)中的溶液中。混合物于室温搅拌15h之后添加乙醇钠(13.4克，197毫摩尔)，于回流下持续搅拌1h。混合物冷却至rt，于旋转蒸发器上蒸发溶剂。残留物以二乙醚湿磨(500毫升)，以1Maq.NaH2PO4(200毫升)、1 N NaOH水溶液(2×100毫升)、含10％ aq.NaOCl(15毫升)的sat.aq.NaHCO3(35毫升)及盐水(100毫升)洗涤，以Na2SO4干燥，过滤并蒸发。形成的残留物(36.3克)溶解于EtOH(250毫升)中，添加2 N LiOH水溶液(100毫升)，混合物于室温搅拌48h，之后以二乙醚萃取(1×400毫升，2×150毫升)。有机萃取液以1 N NaOH水溶液(3 x 100毫升)洗涤。水性萃取液谨慎地以25％ HCl水溶液酸化且随的以DCM萃取(3 x 150毫升)。结合的DCM萃取液以MgSO4干燥，过滤并蒸发。粗产物借着于4℃自乙腈结晶而纯化(150毫升)产生4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-甲酸(16.0克)的黄棕色结晶粉末；LC-MStR＝0.95分钟；1H NMR(CD3OD)δ 7.21(s，1H)，2.43(s，3H)，2.42(d，J＝7.0Hz，2H)，1.83(n，J＝7.0Hz，1H)，0.92(d，J＝7.0Hz，6H)。
中间物A4
4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-甲酸(991mg，5.0毫摩尔)于THF(30毫升)中的溶液于-78℃缓缓添加第三-BuLi(7.3毫升，11毫摩尔，于戊烷中1.5M)。混合物于-78℃搅拌1h，之后添加碘甲烷(1.6毫升，25.7毫摩尔)。搅拌混合物且以15h时间温至室温，之后反应以1 N HCl水溶液(50毫升)中止且以DCM(1×100毫升，2×50毫升)萃取。结合的有机萃取液经干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。残留物于硅胶上藉CC纯化，以于己烷中的EA梯度溶离，产生3-乙基-4-异丁基-噻吩-2-甲酸(325mg)的黄色固体；LC-MStR＝0.98分钟，1H NMR(CD3OD)δ 7.22(s，1H)，2.94(q，J＝7.6Hz，2H)，2.42(d，J＝7.0Hz，2H)，1.86(hept，J＝7.0Hz，1H)，1.11(t，J＝7.6Hz，3H)，0.93(d，J＝7.0Hz，6H)。
中间物A5
4-异丁基-3-丙基-噻吩-2-甲酸如同中间物A4般制备；LC-MStR＝1.02分钟，1H NMR(CD3OD)δ 7.20(s，1H)，2.92-2.86(m，2H)，2.42(d，J＝7.0Hz，2H)，1.92-1.76(m，1H)，1.58-1.45(m，2H)，0.95(t，J＝7.6Hz，3H)，0.94(d，J＝7.0Hz，6H)。
中间物A6
3，4-二异丁基-噻吩-2-甲酸如同中间物A4般制备；LC-MStR＝1.04分钟，1H NMR(CD3OD)δ 7.24(s，1H)，2.86(d，J＝6.9Hz，2H)，2.43(d，J＝7.5Hz，2H)，1.96-1.78(m，2H)，0.93(d，J＝6.2Hz，6H)，0.89(d，J＝6.9Hz，6H)。
中间物A7
a)Mg旋屑(3.89克，160毫摩尔)于无水二乙醚(150毫升)中的浆液中缓缓添加异戊基溴(24.59克，163毫摩尔)于二乙醚(20毫升)中的溶液。一旦反应开始，则视需要以水浴冷却混合物。完全添加之后，混合物搅拌30分钟，之后缓缓添加于异丁腈(34.65克，501毫摩尔)及CuBr(1.15克，8.0毫摩尔)于二乙醚(50毫升)及THF(50毫升)中的冷(0℃)混合物中。完全添加(30分钟)之后，混合物于室温搅拌1h，之后添加1 N aq.NaH2PO4(50毫升)及1 NHCl水溶液(100毫升)。持续于室温搅拌15分钟。分相且水相以额外二乙醚(100毫升)萃取。结合的有机萃取液以aq.1 N HCl水溶液(2×50毫升)、sat.aq.NH4Cl/sat.aq.NaHCO3 1:1(2×50毫升)及盐水(50毫升)洗涤，以Na2SO4干燥，过滤并蒸发产生粗制2，6-二甲基-庚烷-3-酮(20.1克)的油。
b)KOtBu(15.6克，139毫摩尔)于THF(200毫升)中的溶液中添加甲酸乙酯(27.4克，370毫摩尔)。添加期间，混合物以水浴冷却至10℃。发生剧烈产气。混合物搅拌至停止产气(5分钟)且随之冷却至-5℃。于此混合物中以30分钟时间缓缓添加2，6-二甲基-庚烷-3-酮(20克，141毫摩尔)及甲酸乙酯(13.7克，185毫摩尔)于THF(20毫升)中的溶液。反应混合物搅拌2h且使之缓缓温至室温。反应以二乙醚(200毫升)稀释且以1 N HCl水溶液(2×100毫升)洗涤。有机萃取液经干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发产生1-羟基-2-异丁基-4-甲基-戊-1-烯-3-酮(7.35克)的棕色树脂；LC-MStR＝0.91分钟，[M+1]＝171.21。
c)使用20分钟时间，将草酰氯(6.5毫升，9.6克，75.6毫摩尔)于氯仿(10毫升)中的溶液缓缓添加于1-羟基-2-异丁基-4-甲基-戊-1-烯-3-酮(7.35克，43.2毫摩尔)于氯仿(100毫升)中冷却至-10℃的溶液中。混合物搅拌另外30分钟，以冰(100克)及1 N NaOH水溶液(100毫升)中止反应。当停止相当剧烈的气体释出时，分相。有机相以1 N NaOH水溶液(3×75毫升)及1 N aq.NaH2PO4(75毫升)洗涤，干燥(MgSO4)，过滤并蒸发产生粗制1-氯-2-异丁基-4-甲基-戊-1-烯-3-酮(14.2克)的棕色油。
d)氢硫基-乙酸乙基酯(9.86克，82.1毫摩尔)缓缓添加于KOtBu(9.50克，84.7毫摩尔)于乙醇(50毫升)中冷却至10-15℃的溶液中。混合物以THF(100毫升)稀释，之后添加粗制1-氯-2-异丁基-4-甲基-戊-1-烯-3-酮(对应于8.1克，43毫摩尔)于THF(50毫升)中的溶液。反应混合物于40℃搅拌15h，之后于回流下另外20h且于35℃经48h。混合物以乙醚稀释(300毫升)且以1 N NaOH水溶液(3×100毫升)、1 M aq.KHSO4(100毫升)及盐水(100毫升)洗涤。将有机相干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发。形成的残留物溶解于乙醇(30毫升)，添加2 N LiOH水溶液(30毫升)，于回流下搅拌混合物经48h。混合物以二乙醚萃取，之后水相以25％ HCl水溶液酸化且以DCM萃取。有机萃取液经干燥(MgSO4)，过滤并蒸发。棕色油于乙腈(5毫升)中稀释且使的于4℃结晶。收集结晶物，以乙腈洗涤并干燥产生纯4-异丁基-3-异丙基-噻吩-2-甲酸(98毫克)的淡黄色结晶；1H NMR(CD3OD)δ 7.16(s，1H)，3.68(hept，J＝7.0Hz，1H)，2.48(d，J＝7.6Hz，2H)，1.84(hept，J＝7.0Hz，1H)，1.34(d，J＝7.0Hz，6H)，0.92(d，J＝6.4Hz，6H)。
中间物A8
a)1-氯-4-甲基-2-丙基-戊-1-烯-3-酮如同制备中间物A7般地自2-甲基-庚烷-3-酮制备。
b)1-氯-4-甲基-2-丙基-戊-1-烯-3-酮(29.7克，170毫摩尔)与氢硫基乙酸乙基酯(40.9克，340毫摩尔)如同中间物A7所示方法般地反应，产生3-异丙基-4-丙基-噻吩-2-甲酸(11.0克)的无色结晶；1HNMR(CD3OD)δ 7.21(s，1H)，3.83(hept，J＝7.0Hz，1H)，2.60(t，J＝7.6Hz，2H)，1.70-1.56(m，2H)，1.33(d，J＝7.6Hz，6H)，0.99(t，J＝7.6Hz，3H)。
中间物A9
4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-甲酸如同中间物A2般地自4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-甲酸制备；LC-MStR＝0.97分钟，[M+1+CH3CN]＝254.26；1H NMR(CDCl3)δ 2.46(s，3H)，2.39(s，3H)，2.36(d，J＝7.0Hz，2H)，1.78(hept，J＝7.0Hz，1H)，0.91(d，J＝7.0Hz，6H)。
中间物B1
1-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-乙酮如同中间物B2所述方法般，以甲基锂处理4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-甲酸而制得；LC-MStR＝1.02分钟，[M+1]＝197.01。
中间物B2
4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-甲酸(2.44克，12.3毫摩尔)于二乙醚(50毫升)中的溶液于20至23℃缓缓添加甲基锂溶液(23.1毫升，于二乙醚中1.6M溶液)。形成的悬浮液于室温搅拌30分钟，之后添加另一份甲基锂(2.3毫升)。持续搅拌另外30分钟，之后将混合物倒入剧烈搅拌的1 N.aq.NH4Cl(400毫升)中。分离有机相且水相再次以二乙醚萃取。结合的有机萃取液以Na2SO4干燥，过滤并蒸发留下1-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-乙酮(2.34克)的淡黄色油；LC-MStR＝1.03分钟，[M+1]＝197.20；1H NMR(CDCl3)δ 7.08(s，1H)，2.52(s，3H)，2.46(s，3H)，2.42(d，J＝7.0Hz，2H)，1.82(n，J＝7.0Hz，1H)，0.92(d，J＝6.4Hz，6H)。
中间物B3
1-(4-异丁基-3-丙基-噻吩-2-基)-乙酮如同中间物B2所述方法般，以甲基锂处理4-异丁基-3-丙基-噻吩-2-甲酸而制得；LC-MStR＝1.11分钟，[M+1]＝225.30；1H NMR(CDCl3)δ 7.08(s，1H)，2.92-2.85(m，2H)，2.51(s，3H)，2.42(d，J＝7.0Hz，2H)，1.86(hept，J＝7.0Hz，1H)，1.55-1.43(m，2H)，0.99(t，J＝7.0Hz，3H)，0.94(d，J＝7.0Hz，6H)。
中间物B4
1-(3，4-二异丁基-噻吩-2-基)-乙酮如同中间物B2所述方法般，以甲基锂处理3，4-二异丁基-噻吩-2-甲酸而制得；LC-MStR＝1.12分钟，[M+1]＝239.22；1H NMR(CDCl3)δ 7.08(s，1H)，2.84(d，J＝7.0Hz，2H)，2.50(s，3H)，2.41(d，J＝6.4Hz，2H)，1.94-1.78(m，2H)，0.93(d，J＝6.4Hz，6H)，0.90(d，J＝6.4Hz，6H)。
中间物B5
1-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-乙酮如同中间物B2所述方法般，以甲基锂处理4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-甲酸而制得；LC-MStR＝1.07分钟，[M+1]＝211.22；1H NMR(CDCl3)δ 0.90(d，J＝6.4Hz，6H)，1.77(hept，J＝7.0Hz，1H)，2.37(d，J＝7.3Hz，2H)，2.39(s，3H)，2.45(s，3H)，2.47(s，3H)。
中间物C1
中间物A1(10.0克，50.4毫摩尔)溶解于CHCl3(100毫升)且于室温下添加亚磺酰氯(15毫升)。混合物于回流下搅拌2h。蒸发混合物产生粗制酰基氯(11.2g)。一部分此物质(6.5克，30毫摩尔)溶解于DCM(200毫升)中且随后添加于肼的冷(0℃)溶液(90毫升，于THF中1M)中。搅拌混合物且以15h时间温至室温，之后以二乙醚稀释(150毫升)且以1 M HCl水溶液洗涤(75毫升，之后5×50毫升)。结合的水性萃取液以乙醚洗涤(50毫升)，以33％ KOH水溶液碱化且以DCM萃取(5×50毫升)。有机DCM萃取液以Na2SO4干燥，过滤并蒸发，产生4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-甲酰肼(6.24克)的白色固体；LC-MStR＝0.75分钟，[M+1]＝213.12；1H NMR(D6-DMSO)δ 0.85(d，J＝6.7Hz，6H)，1.76(hept，J＝6.7Hz，1H)，2.26-2.34(m，5H)，4.34(s，2H)，7.41(s，1H)，9.52(s，1H)。
中间物C2
4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-甲酰肼如同中间物C1般地自中间物A3制备；LC-MStR＝0.75分钟，[M+1]＝213.20；1H NMR(CDCl3)0.91(d，J＝6.4Hz，6H)，1.81(hept，J＝6.4Hz，1H)，2.38(d，J＝6.1Hz，2H)，2.40(s，3H)，4.04(d，J＝2.3Hz，2H)，6.94(s，1H)，7.03(s br，1H)。
中间物C3
4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-甲酰肼如同中间物C1般地自中间物A9制备；LC-MStR＝0.78分钟，[M+1]＝227.03。
中间物D1
4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-甲酸(126毫克，637微摩尔)于DCM(5毫升)中的溶液中添加DIPEA(249毫克，1.93毫摩尔)，之后添加TBTU(202毫克，628微摩尔)。混合物于室温搅拌30分钟，之后添加3-[2-乙基-4-(N-羟基甲脒基)-6-甲基-苯基]-丙酸(159毫克，637微摩尔)。混合物于室温搅拌16h，之后以DCM稀释，以1N HCl水溶液洗涤，以Na2SO4干燥，过滤并浓缩。残留物溶解于甲苯(20毫升)中且反应混合物于110℃搅拌18h。蒸发溶剂，粗产物于硅胶上藉CC纯化，以含5％甲醇的DCM溶离，产生3-{2-乙基-4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，2，4]恶二唑-3-基]-6-甲基-苯基}-丙酸(41毫克)的米黄色固体；LC-MStR＝1.17分钟，[M+1]+＝413.30；1H NMR(CDCl3)δ 0.94(d，J＝6.4Hz，6H)，1.30(t，J＝7.6Hz，3H)，1.84-1.96(m，1H)，2.43(s，3H)，2.45(s，3H)，2.46-2.60(m，4H)，2.75(q，J＝7.3Hz，2H)，3.02-3.12(m，2H)，7.66(s，1H)，7.79(s，1H)，7.81(s，1H)。
中间物D2
4-(2-第三丁氧基羰基-乙基)-3，5-二甲基-苯甲酸(763毫克，3.59毫摩尔)于DCM(18毫升)中的溶液中添加DIPEA(542毫克，4.20毫摩尔)，之后添加TBTU(1.27克，3.95毫摩尔)。混合物搅拌15分钟，之后添加中间物C1(1.0克，3.59毫摩尔)。持续于室温搅拌16h。混合物以二乙醚稀释，以1 N NaOH水溶液，之后1 N HCl水溶液且随之盐水洗涤，以Na2SO4干燥并过滤。蒸发溶剂产生3-{4-[N′-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-羰基)-肼基羰基]-2，6-二甲基-苯基}-丙酸(1.66克)的无色发泡物；LC-MStR＝1.09分钟，[M+1]＝473.48。此物质于THF(15毫升)中的溶液中添加Burgess试剂(1.26克，5.27毫摩尔)。混合物于微波炉中加热至110℃历经3分钟。混合物冷却至室温，以二乙醚稀释且以1 N NaOH水溶液洗涤。有机萃取液以Na2SO4干燥，过滤并浓缩产生3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯基}-丙酸甲基酯(1.26克)的黄色油，其缓缓固化；LC-MStR＝1.24分钟，[M+1]＝455.21。此酯于甲酸中的悬浮液(20毫升)于室温搅拌3h。蒸发甲酸且残留物于硅胶上藉CC纯化，以含5％甲醇的DCM溶离，产生3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯基}-丙酸的淡黄色固体；LC-MStR＝1.07分钟，[M+1]＝399.16。
中间物D3
3-{4-[5-(4-异丁基-5-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-3-甲氧基-苯基}-丙酸如同中间物D2般自中间物C1及4-(2-第三丁氧基羰基-乙基)-2-甲氧基-苯甲酸制备；LC-MStR＝1.18分钟，[M+1]＝415.37。
中间物D4
3-{4-[5-(4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯基}-丙酸如同中间物D2般自中间物C2及4-(2-第三丁氧基羰基-乙基)-2-甲氧基-苯甲酸制备；LC-MStR＝1.10分钟，[M+1]＝399.41。
中间物D5
3-{4-[5-(4-异丁基-3，5-二甲基-噻吩-2-基)-[1，3，4]恶二唑-2-基]-2，6-二甲基-苯基}-丙酸如同中间物D2般自中间物C3及4-(2-第三丁氧基羰基-乙基)-2-甲氧基-苯甲酸制备；LC-MStR＝1.13分钟，[M+1]＝413.39。
中间物E1
a)4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-腈借着4-氯-3-异丁基-丁-3-烯-2-酮与硫代乙酸S-氰基甲基酯于NaOEt存在下如中间物A3的步骤c)所述般地反应而制备。粗产物于硅胶上藉CC纯化，以庚烷EA 6:1溶离；LC-MStR＝1.03分钟；1H NMR(CDCl3)δ 0.92(d，J＝6.4Hz，12H)，1.78-1.90(m，1H)，2.34(s，3H)，2.40(d，J＝7.3Hz，2H)，7.11(s，1H)。
b)4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-腈(2.10克，11.7毫摩尔)于甲醇(50毫升)中的溶液中添加NaHCO3(1.38克，16.4毫摩尔)，之后为羟基胺盐酸盐(977毫克，14.1毫摩尔)。混合物于60℃搅拌20h，之后过滤。蒸发滤液的溶剂且残留物于HV下干燥，产生N-羟基-4-异丁基-3-甲基-噻吩-2-甲脒(3.0克)的黄色固体；LC-MStR＝0.67分钟。
4，N-二羟基-3，5-二甲基-苯甲脒
标题化合物根据文献方法自市售4-羟基-3，5-二甲基-苄腈制备(例如E.Meyer，A.C.Joussef，H.Gallardo，Synthesis 2003，899-905)；1H NMR(CD3OD)δ 7.20(s，2H)，2.20(s，6H)。
3-乙基-4，N-二羟基-5-甲基-苯甲脒
标题化合物根据文献方法自市售2-乙基-6-甲基-酚制备(G.Trapani，A.Latrofa，M.Franco，C.Altomare，E.Sanna，M.Usala，G.Biggio，G.Liso，J.Med.Chem.41(1998)1846-1854；A.K.Chakraborti，G.Kaur，Tetrahedron 55(1999)13265-13268；E.Meyer，A.C.Joussef，H.Gallardo，Synthesis 2003，899-905)；LC-MStR＝0.55分钟；1H NMR(D6-DMSO)δ 9.25(s br，1H)，7.21(s，2H)，5.56(s，2H)，2.55(q，J＝7.6Hz，2H)，2.15(s，3H)，1.10(t，J＝7.6Hz，3H)。
3，5-二乙基-4，N-二羟基-苯甲脒
标题化合物根据文献方法自市售2，6-二乙基苯胺制备(G.G.Ecke，J.P.Napolitano，A.H.Filbey，A.J.Kolka，J.Org.Chem.22(1957)639-642；及针对3-乙基-4，N-二羟基-5-甲基-苯甲脒所列的文献)。
4-烯丙氧基-N-羟基-2-甲氧基-苯甲脒
标题化合物根据文献方法自市售4-羟基-2-甲氧基-苯甲醛制备(针对3-乙基-4，N-二羟基-5-甲基-苯甲脒所列的参考数据)；LC-MStR＝0.64分钟，[M+1]+＝223.24；1H NMR(D6-DMSO)δ 9.33(s br，1H)，7.30(d，J＝8.2Hz，1H)，6.60(d，J＝2.3Hz，1H)，6.50(dd，J＝2.3，8.2Hz，1H)，6.10-5.94(m，1H)，5.50(s，2H)，5.40(d，J＝17.0Hz，1H)，5.24(d，J＝10.6Hz，1H)，4.57(d，J＝4.7Hz，2H)，3.76(s，3H)。
3-氯-4，N-二羟基-5-甲基-苯甲脒
a)2-氯-6-甲基-酚(10.0克，70毫摩尔)于三氟乙酸(30毫升)中的溶液中分批添加六亚甲基四胺(9.81