专利名称：肿瘤坏死因子受体6α和6β的制作方法许多生物学功能例如对某些刺激和自然生物学过程的应答都受因子如细胞因子的控制。许多细胞因子都是通过与受体相互作用并且产生细胞内应答而起作用的。例如，肿瘤坏死因子α和β就是通过TNF受体起作用从而调控各种生物学过程包括抗感染和诱导休克和炎性疾病的细胞因子。TNF分子属于“TNF配体”超家族，并且与它们的受体或反配体“TNF受体超家族”一起起作用。目前为止，TNF配体超家族的9个成员和TNF受体超家族的10个成员已经被鉴定出。配体包括TNF-α、淋巴毒素-α(LT-α，也称做TNF-β)、LT-β(在LT-α2-β异源三聚体复合物中发现)、FasL、CD40L、CD27L、CD30L、4-1BBL、OX40L和神经生长因子(NGF)。TNF受体超家族包括p55TNF受体、p75TNF受体、TNF受体相关蛋白、FAS抗原或APO-1、CD40、CD27、CD30、4-1BB、OX40、低亲和性的p75和NGF受体(Meager，A.，生物学，22291-295(1994))。TNF配体超家族的许多成员都是由激活的T细胞表达的，这暗示它们是T细胞与作为细胞个体发育和功能基础的其它类型的细胞之间的相互作用所必需的(Meager，A.，Supra)。在鉴定和产生丧失了这些蛋白质表达能力的突变体的过程中，获得了对TNF受体家族中某些成员的基本功能的深刻理解。例如，FAS抗原及其配体的天然突变导致淋巴增殖性疾病(Watanaba-Fukunaga，R.等，自然356314(1992))。这可能反映了细胞程序性死亡的失败。CD40配体的突变导致以血浆中高水平的免疫球蛋白M和低水平的免疫球蛋白G为特征的X相关的免疫缺陷状态，表明缺陷的T细胞依赖的B细胞的激活(Allen，R.C.等，科学259990(1993))。对低亲和性的神经生长因子进行的靶向突变导致以外周结构的缺陷的感觉更新为特征的紊乱(Lee，K.F.等，细胞69737(1992))。TNF和LT-α能够与两种TNF受体(55kd和75kd的TNF受体)结合。许多由TNF和LT-α通过它们的受体起作用而引发的生物学效应包括移植肿瘤的出血性坏死、细胞毒性、内毒素休克中的作用、炎症、免疫调节、增殖和抗病毒应答、以及抗电离辐射的有害效应等。TNF和LT-α与多种疾病的致病过程相关，包括内毒素休克、脑疟疾、肿瘤、自身免疫性疾病、AIDS和移植宿主排斥(Beutler，B.和Von Huffel，C.，科学264667-668(1994))。p55受体的突变导致对微生物感染的易感性增加。而且，据报道TNFRl(p55)和Fas的近C末端大约80个氨基酸的区段为“死亡区”，这段区域负责传导细胞程序性死亡的信号(Tartaglia等，细胞74845(1993))。凋亡或细胞程序性死亡是多细胞器官的正常发育和稳态所必需的生理过程(H.Steller，科学2671445-1449(1995))。凋亡受到扰乱对某些人类疾病包括癌症、神经变性紊乱以及获得性免疫缺陷综合症的致病具有促进作用(C.B.Thompson，科学2671456-1462(1995))。最近，人们的注意力更多地集中于两种细胞表面死亡受体Fas/APO-1和TNFR-1的信号传导和生物学功能上(J.L.Cleveland，J.N.Ihle，细胞81，479-482(1995)；A.Fraser，G.Evan，细胞85，781-784(1996)；S.Nagata，P.Golstein，科学267，1449-56(1995))。它们都是TNF受体家族的成员，此家族还包括TNFR-2，低亲和性的NGFR、CD40和CD30以及其它分子(C.A.Smith等，科学248，1019-23(1990)；M.Tewari，V.M.Dixit，在M.Purton，Heldin，Carl编著的分子和细胞生物学一书的模块文本中(Chapman和Hall，伦敦，1995))。家族成员在其细胞外结构域中存在半胱氨酸丰富的重复序列，Fas/APO-1和TNFR-1还共享一个细胞外同源区，命名为“死亡区”，此区与果蝇属自杀基因reaper远缘相关(P.Golstein，D.Marguet，V.Depraetere，细胞81，185-6(1995)；K.White等，科学264677-83(1994))。这个共享的死亡区表明这两种受体分子都与一系列相关的至今仍未阐明的信号传导分子相互作用。Fas/APO-1的激活募集了含有死亡区的衔接分子FADD/MORT1(A.M.Chinnaiyan，K.O’Rourke，M.Tewari，V.M.Dixit细胞81，505-12(1995)；M.P.Boldin等，生命的化学期刊270，7759-8(1995)；F.C.Kischkel等，EMBO 14，5579-5588(1995))，这个分子结合并且预先激活前凋亡蛋白酶ICE/CED-3家族的一个成员FLICE/MACH1(M.Muzio等，细胞85，817-827(1996)；M.P.Boldin，T.M.Goncharov，Y.V.Goltsev，D.Wallach，细胞85，803-815(1996))。Fas/APO-1的中心作用是引发细胞死亡，而TNFR-1能够向一系列不同的生物学活性传导信号，其中许多都源自其激活NF-KB的能力(L.A.Tartaglia，D.V.Goeddel，今日免疫学13，151-3(1992)。因此，TNFR-1募集多价的衔接分子TRADD，此分子与FADD一样也含有一个死亡区(H.Hsu，J.Xiong，D.V.Goeddel，细胞81，495-504(1995)；H.Hsu，H.-B.Shu，M.-P.Pan，D.V.Goeddel，细胞84，299-308(1996))。通过它与许多信号传导分子包括FADD，TRAF2和RIP相关，TRADD能够为凋亡和NF-KB激活传导信号(H.Hsu，H.-B.Shu，M.-P.Pan，D.V.Goeddel，细胞84，299-308(1996)；H.Hsu，J.Huang，H.-B.Shu，V.Baichwal，D.V.Goeddel，免疫4，381-396(1996))。TNF家族配体和TNF家族受体的效应是不同的，并且影响到哺乳动物系统生物学过程中的许多正常的以及异常的功能。因此，现在很有必要对这些影响正常状态以及疾病状态下生物学活性的受体和配体进行鉴别和鉴定。分离和鉴定TNF受体家族的新成员尤其必要。
发明概述本发明提供了分离的包含或由编码具有分别在SEQ ID NOS2和4中所示的完整氨基酸序列或由ATCC保藏号为97810和97809的保藏为质粒DNA形式的cDNA克隆所编码的完整氨基酸序列的TNFR(即，TNFR-6α或TNFR-6β多肽)的至少一部分的多核苷酸所组成的核酸分子。对保藏的TNFR-6α或TNFR-6β克隆进行测序所测定的核苷酸序列，如

图1和图2所示(SEQ ID NOS分别为1和3)，分别含有编码300个和170个氨基酸残基的全长多肽的开放读码框，其中包括分别位于SEQ ID NOS1和3中25-27位和73-75位核苷酸的编码N末端氨基酸的起始密码子。
本发明的TNFR蛋白与其它TNF受体具有序列同源性。TNFR-6α和TNFR-6β的剪接变体与人TNFR-I和TNFR-II(图3)(SEQ IDNOS分别为5和6)mRNAs的翻译产物具有最高程度的序列同源性，后者也含有多个保守的富含半胱氨酸的区域。
TNFR-6α和TNFR-6β多肽都具有推测的30个氨基酸的前导序列，在图1和图2中31-300位氨基酸残基(SEQ ID NO2)和31-170位氨基酸残基(SEQ ID NO4)分别表示了推测的成熟TNFR-6α和TNFR-6β多肽的氨基酸序列。
因此，本发明一方面提供了一种分离的核酸分子，此核酸分子包含或由具有选自以下各组核苷酸序列的多核苷酸所组成(a)编码具有SEQ ID NOS2和4完整氨基酸序列，或如同在ATCC保藏号为97810和97809中所包含的cDNA克隆所编码的完整氨基酸序列的TNFR多肽的核苷酸片段；(b)编码具有SEQ ID NO2中31-300位氨基酸序列或SEQ ID NO4中31-170位氨基酸序列的成熟TNFR多肽，或如同在ATCC保藏号为97810和97809中所包含的cDNA克隆所编码的多肽的核苷酸片段；(c)编码具有SEQ IDNO2中31-283位氨基酸序列或SEQ ID NO4中31-166位氨基酸序列的TNFR多肽的可溶性胞外区的核苷酸序列，或如同在ATCC保藏号为97810和97809中所包含的cDNA克隆所编码的多肽胞外区的核苷酸片段；(d)编码具有SEQ ID NO2中31-283位氨基酸序列或SEQ ID NO4中31-166位氨基酸序列的TNFR多肽片段的核苷酸序列，或如同在ATCC保藏号为97810和97809中所包含的cDNA克隆所编码的多肽片段，其中所述的多肽片段具有TNFR-6α和/或TNFR-6β功能活性；和(e)与上述(a)(b)(c)(d)或(e)中任何一种核苷酸序列互补的核苷酸序列。
本发明另外的实施方案包括含有或由与上述(a)(b)(c)(d)和(e)中任何一种核苷酸序列具有至少90％相同性，更优选至少80％，85％，90％，92％或95％，96％，97，98％或99％相同性的多核苷酸，或在严格杂交条件下与上述(a)(b)(c)(d)或(e)中多核苷酸杂交的多核苷酸所组成的分离的核酸分子。能够杂交的多核苷酸在严格杂交条件下不与具有仅由A残基或仅由T残基构成的核苷酸序列的多核苷酸杂交。本发明的另外一个核酸实施方案涉及包含或由编码具有上述(a)(b)(c)或(d)氨基酸序列的TNFR多肽表位携带部分氨基酸序列的多核苷酸所组成的分离的核酸分子。
本发明也涉及包括本发明分离的核酸分子在内的重组载体、含有重组载体的宿主细胞以及生产这些载体和宿主细胞的方法和通过重组技术利用它们生产TNFR多肽或肽的方法。
本发明另外提供了包含选自下列各组的氨基酸序列的分离的TNFR多肽(a)具有SEQ ID NOS2或4中所示的完整氨基酸序列的或如同ATCC保藏号97810或97809中所含cDNA克隆所编码的全长TNFR多肽的氨基酸序列；(b)具有SEQ ID NO2中31-300位氨基酸序列或SEQ ID NO4中31-170位氨基酸序列，或如同ATCC保藏号为97810和97809中所包含的cDNA克隆所编码的成熟TNFR多肽的氨基酸序列；(c)具有SEQ ID NO2中31-283位氨基酸序列或SEQ ID NO4中31-166位氨基酸序列，或如同ATCC保藏号为97810和97809中所包含的cDNA克隆所编码的TNFR多肽的可溶性胞外区的氨基酸序列；或(d)具有SEQ ID NO2中31-283位氨基酸序列或SEQ ID NO4中31-166位氨基酸序列，或如同ATCC保藏号为97810和97809中所包含的cDNA克隆所编码的TNFR多肽片段的氨基酸序列，其中上述片段具有TNFR-6α和/或TNFR-6β功能活性。
本发明的多肽也包括与上述(a)(b)(c)或(d)中所述的多肽具有至少80％氨基酸序列相同性，更优选至少85％相同性，90％，92％，95％，96％，97，98％或99％相同性的多肽，以及与上述(a)(b)(c)或(d)中所述的多肽具有至少90％氨基酸序列相似性，更优选至少80％，85％，90％，92％或95％相似性的多肽。
本发明这一方面另外的一个实施方案涉及包含具有上述(a)(b)(c)或(d)中所述的氨基酸序列的TNFR.多肽携带表位部分氨基酸序列的肽或多肽。具有本发明TNFR多肽携带表位部分氨基酸序列的肽或多肽包括至少6或7，优选至少9，更优选至少30-50个氨基酸的这些多肽的一部分，当然本发明也包括任何长度的携带表位的上述多肽，包括本发明多肽的完整氨基酸序列。
在另外一个实施方案中，本发明提供了一种能够与具有上述a)(b)(c)或(d)中所述的氨基酸序列的TNFR多肽特异性结合的分离的抗体。本发明另外提供了分离能够与具有文中所述的氨基酸序列的TNFR多肽特异性结合的抗体的方法。如下所述，这些抗体在诊断和治疗中非常有用。
已知肿瘤坏死因子(TNF)家族配体属于能够引发许多种细胞应答的最多效的细胞因子，其中包括细胞毒性、抗病毒活性以及一些基因的转录后调控。本发明也提供了含有TNFR多肽，优选人TNFR多肽的药物组合物，这些药物组合物可施用于，例如治疗传染性疾病包括HIV感染、内毒素休克、癌症、自身免疫性疾病、移植宿主排斥、急性移植排斥、慢性移植排斥、神经变性紊乱、脊髓发育不良症状、局部缺血性损伤(例如心脏局部缺血性损伤)、毒素诱导的肝脏疾病、脓毒性休克、恶病质和厌食。本发明也提供了对需要TNFR多肽的个体进行治疗的方法。
本发明另外提供了用于体外、离体或体内向细胞或多细胞器官施与包含TNFR多核苷酸或TNFR多肽的组合物。在本发明此方面的几个特别优选的实施方案中，组合物包含TNFR多核苷酸以在宿主器官中表达TNFR多肽治疗疾病。从这一点上来说，特别优选的是在病人中表达以治疗与TNFR多肽异常的内源活性相关的机能异常。
另一方面，本发明提供了激动剂以及拮抗剂的筛选方法，此方法用于测定候选组合物对TNFR多肽与TNF家族配体结合的效应。特别是，此方法涉及使TNF家族配体与TNFR多肽和侯选组合物结合，并且测定TNFR多肽与TNF家族配体的结合是否由于侯选化合物的存在而被增强或减弱。在此分析方法中，相对于标准结合而言，TNFR多肽结合的增强意味着侯选化合物是TNFR多肽结合活性的激动剂；与标准结合相比，TNFR多肽结合的减弱意味着此化合物是TNFR多肽结合活性的拮抗剂。
内皮细胞、角质细胞、正常前列腺以及前列腺肿瘤组织均表达TNFR-6α和TNFR-6β。对于大多数这些组织或细胞的异常来说，特别是免疫系统紊乱来说，与“标准的”TNFR基因表达水平，即不具有免疫系统紊乱的个体的健康组织的TNFR表达水平相比，从具有这样的异常的个体中采集的某些组织(例如癌组织)或体液(例如精液、血浆、尿液、滑液或脊髓液)中可以检测到TNFR基因表达水平的显著升高或降低。因此，本发明提供了一种在诊断这种紊乱中有用的诊断方法，此方法涉及(a)分析个体细胞或体液中的TNFR基因表达水平；(b)将TNFR基因表达水平与标准的TNFR基因表达水平进行比较，因此与标准的表达水平相比，所分析的TNFR基因表达水平的升高或降低预示着免疫系统的紊乱。
本发明的另外一个方面涉及对需要增加体内TNFR多肽活性水平的个体进行治疗的方法，此方法包含向此个体施与一种含有治疗学有效量的本发明的TNFR多肽或其激动剂的组合物。
本发明的另外一个方面涉及对需要降低体内TNFR多肽活性水平的个体进行治疗的方法，此方法包含向此个体施与一种含有治疗学有效量的TNFR拮抗剂的组合物。本发明优选使用的拮抗剂是TNFR特异性抗体。
附图的简要描述图1显示了TNFR-6α的核苷酸序列(SEQ ID NO1)和推测的氨基酸序列(SEQ ID NO2)。起始的30个氨基酸(下划线)是推测的前导序列。
图2显示了TNFR-6β的核苷酸序列(SEQ ID NO3)和推测的氨基酸序列(SEQ ID NO4)。起始的30个氨基酸(下划线)是推测的前导序列。
图3显示应用DNAstar中的Megaline程序，利用Clustal方法将TNFR-6α(TNFR-6 alpha(SEQ ID NO2))和TNFR-6β(TNFR-6 beta(SEQ ID NO4))的氨基酸序列与其它TNF受体如TNFR1(SEQ IDNO5)、TNFR2(SEQ ID NO6)、NGFR(SEQ ID NO7)、LTbR(SEQ ID NO8)、FAS(SEQ ID NO9)、CD27(SEQ ID NO10)、CD30(SEQ ID NO11)、CD40(SEQ ID NO12)、4-1BB(SEQ IDNO13)、OX40(SEQ ID NO14)、VC22(SEQ ID NO15)和CRMB(SEQ ID NO16)的氨基酸序列进行序列比较的结果。
图4和图5分别显示了对TNFR-6α和TNFR-6β的氨基酸序列单独分析的结果。使用所述的计算机程序在缺省参数的情况下分别对SEQ ID NO2和SEQ ID NO4中氨基酸序列进行预测，显示了α、β、转角和卷曲区；疏水性；两亲性区；柔性区；抗原性指数和表面概率。在抗原性指数-Jameson-Wolf”图中显示了TNFR-6α和TNFR-6β的高抗原性区的位置，即获得本发明携带表位的肽的区域。TNFR-6α的抗原性区包括从大约31位的丙氨酸到大约46位的苏氨酸，从大约57位的苯丙氨酸到大约117位的苏氨酸，从大约132位的半胱氨酸到大约175位的苏氨酸，从大约185位的甘氨酸到大约194位的苏氨酸，从大约205位的缬氨酸到大约217位的天冬氨酸，从大约239位的脯氨酸到大约264位的亮氨酸，从大约283位的丙氨酸到大约298位的脯氨酸(SEQ ID NO2)；TNFR-6β的抗原性区包括从大约31位的丙氨酸到大约46位的苏氨酸，从大约57位的苯丙氨酸到大约80位的谷氨酰胺，从大约86位的谷氨酸到大约106位的组氨酸，从大约108位的苏氨酸到大约119位的苯丙氨酸，从大约129位的组氨酸到大约138位的缬氨酸，从大约142位的甘氨酸到大约166位的脯氨酸(SEQID NO4)。通过Jameson-Wolf抗原性指数分析已经测定出这些多肽片段含有TNFR-6α和TNFR-6β多肽的抗原性表位。
图4和图5中的数据也分别出现在表I和表II的表中。表中各栏分别标为“氨基酸残基”，“位置”以及罗马数字I-XIV。各栏标题是指出现在图4(表I)和图5(表II)中的氨基酸序列的下列特征“残基”SEQ ID NO2(图1)或SEQ ID NO4(图2)中的氨基酸残基；“位置”SEQ ID NO2(图1)或SEQ ID NO4(图2)中对应的氨基酸残基的位置；Iα，Garnier-Roboson区；IIα，Chou-Fasman区；IIIβ，Garnier-Roboson区；VIβ，Chou-Fasman区；V转角，Garnier-Roboson区；VI转角，Chou-Fasman区；VII螺旋，Garnier-Roboson区；VIII疏水性，Kyte-Doolittle区；IX疏水性，Hopp-Woods区；Xα，Eisenberg两亲性区；XIβ，Eisenberg两亲性区；XIIKarplus-Schulz柔性区；XIIIJameson-Wolf抗原性指数和XIVEimini区的表面概率。
图6显示了与SEQ ID NOS1和3相关的HELDIO6R(SEQ IDNO17)和HCEOW38R(SEQ ID NO18)的核苷酸序列。
图7A-B显示了TNFR-6α阻断Fas配体介导的细胞死亡。用Fas配体和TNFR-6αFc受体组合处理Jurkat-T细胞16小时。为了测量处理后的存活细胞水平，将细胞与10％的ALOMAR蓝染料孵育5小时后用分光光度计测量570-630纳米波长下的光密度值。所有的样品都设3个复孔。与Fas配体一样，TNFR-6αFc似乎以一种剂量依赖的方式有效地阻断Fas配体介导的Jurkat细胞的凋亡。
详细描述本发明提供了分离的核酸分子，此核酸分子包含或由通过对克隆的cDNA进行测序而测定的，编码具有分别在SEQ ID NOS2和4中所示的氨基酸序列的TNFR-6α或TNFR-6β多肽、统称为“TNFR多肽”的多核苷酸所组成。图1和图2(SEQ ID NOS1和3)中所示的核苷酸序列是通过分别对HPHAE52和HTPCH84克隆测序而获得的，HPHAE52和HTPCH84于1996年11月22日被保藏在位于美国弗吉尼亚州20110-2209，Manassas市Boulevard大学大道的美国典型培养物保藏中心，其保藏号分别为ATCC 97810和97809。所保藏的克隆被包含在pBluescripts SK(-)质粒中(Stratagene，La Jolla，加州)。
本发明的TNFR-6α和TNFR-6β蛋白为在各自蛋白N末端142个氨基酸残基上具有相同核苷酸序列和氨基酸序列的剪接变体。这些蛋白的氨基酸序列与人TNFR-2mRNA的翻译产物(图3)(SEQ IDNO6)具有大约23％的相似性并且共同享有多个半胱氨酸丰富的保守区。更为重要的是，这些蛋白在包括4个重复的半胱氨酸丰富基序并且具有显著的亚单位间同源性的多肽序列上具有显著的序列相同性。据认为TNFR-2专有性地通过TNF介导人T细胞的增殖(PCTWO/94/09137)。
核酸分子除非另做说明，所有通过对本文中DNA分子测序而测定的核苷酸序列都是应用全自动DNA测序仪(如位于加州Foser市的应用生物系统公司的373型)测定的，并且所有由本文中所测定的DNA分子编码的多肽的氨基酸序列都是通过将上述测定的DNA序列进行翻译而推测的。因此，对于任何通过自动测序方法测定的DNA序列来说，正如在本领域众所周知的，文中所测定的核苷酸序列可能含有一些错误。通过自动测序技术所测定的核苷酸序列与所测DNA分子的实际核苷酸序列具有至少90％的相同性，更典型的具有至少大约95％到至少99.9％的相同性。实际序列可以更精确地应用本领域众所周知的其它技术包括人工测序的方法而测定。也如同本领域所熟知的，与实际的序列相比，在测定的核苷酸序列中的一个单点插入或缺失将会导致核苷酸序列翻译中的读码框移动，以致于从这个插入点或缺失点开始由测定的核苷酸序列所编码的推测的氨基酸序列与由所测DNA分子的实际序列编码的氨基酸序列完全不同。
核酸分子或多核苷酸的“核苷酸序列”用于DNA分子或多核苷酸是指脱氧核糖核苷酸的序列；如用于RNA分子或多核苷酸，是指相应的核糖核苷酸(A，G，C和U)的序列，其中在特定脱氧核糖核苷酸序列中的每一个胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸(T)都被核糖核苷酸尿嘧啶(U)替换。
利用本文中所提供的信息，例如在图1和图2(SEQ ID NOS1和3)中所示的核苷酸序列，可以通过使用标准的克隆和筛选程序例如那些使用mRNA作为起始材料克隆cDNA的程序获得本发明编码TNFR多肽的核酸分子。举例说明本发明，在下列组织的cDNA文库中鉴别出了TNFR-6α和TNFR-6β克隆(分别见图1和图2)内皮细胞、角质细胞、正常前列腺组织和前列腺肿瘤组织。
图1和图2(SEQ ID NOS1和3)的TNFRcDNAs的测定的核苷酸序列含有分别编码300个和170个氨基酸残基的蛋白质的开放读码框，其起始密码子分别在图1和图2(SEQ ID NOS1和3)中核苷酸序列的25-27位和73-75位核苷酸位置。
TNFR-6α和TNFR-6β基因的开放读码框与人TNFR-2mRNA的翻译产物共享序列同源性，包括分别见SEQ ID NO.2的大约31-283位氨基酸残基和SEQ ID NO.4的大约31-166位氨基酸残基的可溶性胞外区。
本领域技术人员应理解的是，由于存在上面所讨论的测序错误的可能性，由保藏的cDNAs所编码的包含大约300和大约170氨基酸的实际全长TNFR多肽可能会稍长或稍短一些。更普遍的是，实际的开放读码框可能位于图1和图2(SEQ ID NOS1和3)N末端第一个推测的甲硫氨酸的±20个氨基酸范围内的任何位置，更可能位于±10个氨基酸范围内的任何位置，此甲硫氨酸位于框内，每个图中分别显示了翻译后的序列。需要进一步了解的是，根据用于鉴定不同功能区的分析标准，TNFR多肽的细胞外和跨膜区的精确“位置”可能和上面推测的位置会稍有不同。例如，根据用于限定功能域和抗原性区的标准，在SEQ ID NO2和SEQ ID NO4中细胞外功能区或抗原性区的精确位置可能会略有变化(例如，此位置可能会移动1-20个氨基酸残基，更可能是1-5个氨基酸残基)。在任何情况下，正如下面将要进一步讨论的，本发明另外提供了自全长多肽的N末端具有各种不同残基缺失的多肽，包括本文所描述的自细胞外功能区N末端缺少一个或多个氨基酸的多肽，这些多肽组成了TNFR-6α和TNFR-6β蛋白细胞外功能区的可溶性形式。
正如在SEQ ID NOS2和4中所示，全长TNFR蛋白的氨基酸序列包括一段前导序列和一成熟蛋白。更为具体的是，本发明提供了编码TNFR蛋白成熟形式的核酸分子。因此，根据信号假说，一旦生长中的蛋白链自粗面内质网向外转运，由哺乳动物分泌的蛋白就具有一段从全长多肽中切割下来以产生“成熟”形式分泌蛋白的信号或分泌性前导序列。大多数的哺乳动物细胞甚至昆虫细胞同样特异地切割分泌蛋白。但是，在一些情况下，对分泌蛋白的切割并不是完全统一的，可能会导致两种或更多种成熟蛋白的产生。而且，人们早就知道分泌蛋白的切割特异性最终由此完整蛋白的一级结构决定，即，这是多肽氨基酸序列的内在特性。因此，本发明提供了一种编码具有由ATCC保藏号为97810或97809中鉴定的cDNA克隆所编码的氨基酸序列的成熟TNFR多肽的核苷酸序列。“具有如ATCC保藏号为97810或97809中保藏的质粒中所含有的cDNA克隆所编码的氨基酸序列的成熟TNFR多肽”意指保藏载体中所含的克隆的人DNA序列的开放读码框在哺乳动物细胞中(例如下面所述的COS细胞)表达产生的蛋白成熟形式。
此外，已经有方法用于推测是否一种蛋白具有分泌性前导序列，以及是否此蛋白的前导序列具有切割位点。例如.，McGeoch的方法(病毒研究，3271-286(1985))利用从N末端一段短的带电荷的区域以及随后的全长(未切割)蛋白的不带电荷的区域中得到的信息。Von Heinje的方法(核酸研究，144683-4690(1986))利用从环绕在切割位点周围的氨基酸残基中得到的信息，典型的是从-13到+2残基，其中+1表示成熟蛋白的氨基酸残基。这些方法预测已知的哺乳动物分泌蛋白切割位点的准确性范围在75-80％之间(vonHeinje，supra)。但是，对于一种给定的蛋白来说，这两种方法并不总是产生相同的推测的切割位点。
在本发明中，使用“PSORT”计算机程序分析推导出全长TNFR多肽的氨基酸序列，此程序得自Kyoto大学化学研究所的Kenta Nakai博士，是一种根据氨基酸序列预测蛋白质在细胞内位置的专家系统。McGeoch和Von Heinje的方法被引入其中作为这种计算机定位预测的一部分。使用此程序对TNFR氨基酸序列的分析提供了以下结果TNFR-6α和TNFR-6β分别编码具有SEQ ID NOS2和4中31-300位和31-170位残基氨基酸序列的成熟多肽。
在某些优选的实施方案中，TNFR-6α和TNFR-6β分别编码具有SEQ ID NOS2和4中31-299位和31-169位残基氨基酸序列的成熟多肽。
如上所示，本发明的核酸分子可以是RNA的形式，如mRNA，或是DNA的形式，包括例如通过克隆或合成技术产生的cDNA和基因组DNA。DNA可以是双链或单链的。单链DNA或RNA可以是编码链，也称为意义链，或也可以是非编码链，也称为反义链。
“分离的”核酸分子是指从其原始环境中分离出的DNA或RNA核酸分子。例如，就本发明而言，包含在载体中的重组DNA分子即被认为是“分离的”核酸分子。另外的分离的DNA分子包括在异源宿主细胞中维持的重组DNA分子或溶液中纯化的(部分或完全)的DNA分子。分离的RNA分子包括本发明的DNA分子的体内或体外RNA转录本。但是，包含在克隆中的作为一混合克隆文库成员(例如基因组或cDNA文库)并且未从本文库其它克隆中分离出的(例如，以含有此克隆但不包括文库中其它成员的同源溶液形式)或从一种细胞或细胞裂解中分离出的染色体不是“分离的”核酸分子。正如本文中进一步讨论的，根据本发明分离的核酸分子可以自然、重组或合成方式产生。
本发明分离的核酸分子包括含有在SEQ ID NOS1和3所示的核苷酸序列中分别在25-27位和73-75位具有起始密码子的开放读码框的DNA分子。
本发明分离的核酸分子同时也包括含有分别在SEQ ID NOS2和4的31-300位和31-170位所示的推测的成熟TNFR多肽序列的DNA分子。
本发明分离的核酸分子同时也包括含有分别在SEQ ID NOS2和4的31-299位和31-169位所示的推测的成熟TNFR多肽序列的DNA分子。
此外，本发明分离的核酸分子包括含有序列与上述那些序列显著不同，但由于遗传密码的简并性仍然编码TNFR蛋白的DNA分子。当然，遗传密码和物种特异性密码子偏性是本领域众所周知的。因此，对于本领域熟练技术人员来说产生上述的简并性变体很普遍，例如，为了在特定宿主中优化密码子的表达(例如，将人mRNA中的密码子变为细菌宿主如大肠杆菌偏爱的密码子)。
另一方面，本发明提供了编码具有保藏号为ATCC97810或97809保藏的质粒中所含的cDNA克隆所编码的氨基酸序列的TNFR多肽的分离的核酸分子。优选的，此核酸分子将编码由上述保藏的cDNA克隆所编码的成熟的多肽。
本发明另外提供了具有图1或图2(SEQ ID NOS1和3)中所示核苷酸序列，或在上述保藏的克隆中所含的TNFR cDNA的核苷酸序列的核酸分子，或具有与上述序列之一互补的序列的核酸分子。这些分离的核酸分子，特别是DNA分子，是很有用的，例如，通过与基因组原位杂交用做基因图谱的探针，以及在人体组织中检测TNFR基因的表达，例如，通过核酸印迹分析。
本发明另外指向编码文中描述的部分核苷酸序列的核酸分子以及指向文中所述的分离的核酸分子的片段。特别是，本发明提供了具有代表SEQ ID NOS1和3部分的核苷酸序列的多核苷酸，它们分别由SEQ ID NOS1和3的25-924位和73-582位组成。本发明也指向编码缺少氨基端甲硫氨酸的TNFR多肽的多核苷酸，这样的多核苷酸具有代表SEQ ID NOS1和3部分的核苷酸序列，它们分别由28-924位和76-582位组成。本发明也提供了这样的多核苷酸编码的多肽，这些多肽分别含有SEQ ID NOS2和4的2-300位和2-170位的氨基酸序列。
此外，本发明提供了如下具有与SEQ ID NOS1和3延伸部分的核苷酸序列相关的核苷酸序列的核酸分子HELDIO6R(SEQ IDNO17)和HCEOW38R(SEQ ID NO18)与SEQ ID NOS1和3都相关。优选的是SEQ ID NOS1和3的而不是SEQ ID NO17或18的或SEQ ID NO17或18亚片段的多核苷酸片段。图6中显示了HELDIO6R和HCEOW38R的序列。
更普遍的是，具有保藏的cDNA的核苷酸序列或具有图1或图2(SEQ ID NOS1和3)中所示核苷酸序列的分离的核酸分子的一个片段是长度至少为15nt，优选至少为20nt，更加优选至少为30nt，甚至更优选至少为40nt的片段。这些片段具有很多用途，包括但不局限于用做文中所讨论的诊断探针和引物。当然，本发明中更大一些的长度为50-300nt的与大多数但不是全部保藏的cDNAs的核苷酸序列或如图1或图2(SEQ ID NOS1和3)中所示核苷酸序列对应的片段也是有用的。特别优选的是由与SEQ ID NO1中所示的连续的500个核苷酸具有至少80％，85％，90％，92％或95％相同性的至少500个核苷酸所组成的片段。长度为至少20nt的片段，例如，是意指包括20个或更多来自保藏的cDNA核苷酸序列或来自图1或图2(SEQ ID NOS1和3)中所示核苷酸序列的连续的碱基的片段。在此上下文中“大约”包括特定引用的大小以及在一端或两端稍大或稍小几(5，4，3，2或1)个核苷酸的大小。本发明优选的核酸片段包括编码如在图4和图5中鉴定的并在下文中详细描述的TNFR多肽的携带表位部分的核酸分子。
本发明TNFR-6α核酸片段的代表性例子包括例如包含或由SEQID NO1的从大约第一位核苷酸到大约第25位核苷酸，从大约第26位核苷酸到大约第75位核苷酸，从大约第76位核苷酸到大约第114位核苷酸，从大约第115位核苷酸到大约第162位核苷酸，从大约第163位核苷酸到大约第216位核苷酸，从大约第217位核苷酸到大约第267位核苷酸，从大约第268位核苷酸到大约第318位核苷酸，从大约第319位核苷酸到大约第369位核苷酸，从大约第370位核苷酸到大约第420位核苷酸，从大约第421位核苷酸到大约第471位核苷酸，从大约第472位核苷酸到大约第522位核苷酸，从大约第523位核苷酸到大约第573位核苷酸，从大约第574位核苷酸到大约第625位核苷酸，从大约第626位核苷酸到大约第675位核苷酸，从大约第676位核苷酸到大约第714位核苷酸，从大约第715位核苷酸到大约第765位核苷酸，从大约第766位核苷酸到大约第816位核苷酸，从大约第817位核苷酸到大约第867位核苷酸，从大约第868位核苷酸到大约第924位核苷酸，从大约第925位核苷酸到大约第975位核苷酸序列组成的片段或其互补链，或保藏号为ATCC 97810所保藏的质粒中含有的cDNA组成。在此上下文中“大约”包括特定引用的范围以及在一端或两端稍大或稍小几(5，4，3，2或1)个核苷酸的那些范围。
在一些特别的实施方案中，本发明的核酸片段包含或由编码SEQID NO2的第100至150位氨基酸残基，第150至200位氨基酸残基，第200至300位氨基酸残基，第220至300位氨基酸残基，第240至300位氨基酸残基，第250至300位氨基酸残基，第260至300位氨基酸残基和/或第280至300位氨基酸残基的多核苷酸序列，其互补链组成。能够与这些核苷酸序列杂交的核苷酸序列也包含在本发明的范围之内。
本发明TNFR-6β核酸片段的代表性例子包括例如包含或由SEQID NO3的从大约第1位核苷酸到大约第36位核苷酸，从大约第37位核苷酸到大约第72位核苷酸，从大约第73位核苷酸到大约第123位核苷酸，从大约第124位核苷酸到大约第175位核苷酸，从大约第176位核苷酸到大约第216位核苷酸，从大约第217位核苷酸到大约第267位核苷酸，从大约第268位核苷酸到大约第318位核苷酸，从大约第319位核苷酸到大约第369位核苷酸，从大约第370位核苷酸到大约第420位核苷酸，从大约第421*位核苷酸到大约第471位核苷酸，从大约第472位核苷酸到大约第522位核苷酸，从大约第523位核苷酸到大约第582位核苷酸，从大约第583位核苷酸到大约第622位核苷酸，从大约第623位核苷酸到大约第682位核苷酸，从大约第683位核苷酸到大约第750位核苷酸，从大约第751位核苷酸到大约第800位核苷酸，从大约第801位核苷酸到大约第850位核苷酸，从大约第851位核苷酸到大约第900位核苷酸，从大约第901位核苷酸到大约第950位核苷酸，从大约第951位核苷酸到大约第1000位核苷酸，从大约第1001位核苷酸到大约第1050位核苷酸，从大约第1051位核苷酸到大约第1100位核苷酸，从大约第1101位核苷酸到大约第1150位核苷酸，从大约第1151位核苷酸到大约第1200位核苷酸，从大约第1201位核苷酸到大约第1250位核苷酸，从大约第1251位核苷酸到大约第1300位核苷酸，从大约第1301位核苷酸到大约第1350位核苷酸，从大约第1351位核苷酸到大约第1400位核苷酸，从大约第1401位核苷酸到大约第1450位核苷酸，从大约第1451位核苷酸到大约第1500位核苷酸，从大约第1501位核苷酸到大约第1550位核苷酸，从大约第1551位核苷酸到大约第1600位核苷酸，从大约第1601位核苷酸到大约第1667位核苷酸序列组成的片段或其互补链，或保藏号为ATCC 97809所保藏的质粒中含有的cDNA组成。在此上下文中“大约”包括特定引用的范围以及在一端或两端稍大或稍小几(5，4，3，2或1)个核苷酸的那些范围。
在一些特别的实施方案中，本发明的核酸片段包含或由编码SEQID NO4的第50至100位氨基酸残基，第100至170位氨基酸残基，第110至170位氨基酸残基，第130至170位氨基酸残基，第140至170位氨基酸残基，第150至170位氨基酸残基和/或第160至170位氨基酸残基的多核苷酸序列，或其互补链组成。能够与这些核苷酸序列杂交的核苷酸序列也包含在本发明的范围之内。
优选的，本发明的多核苷酸片段编码一种显示TNFR-6α和/或TNFR-6β功能活性的多肽。显示“功能活性”的多肽意指一种多肽能够显示一种或多种已知的与完整的(全长)或成熟的TNFR-6α和/或TNFR-6β多肽有关的功能活性。这些功能活性包括但不局限于生物学活性(例如抑制或降低由FasL介导的凋亡，抑制或降低由AIM-II介导的凋亡)、抗原性(与抗TNFR-6α抗体和/或抗TNFR-6β抗体结合(或与TNFR-6α和/或TNFR-6β多肽竞争结合)的能力)、与本发明的TNFR-6α和/或TNFR-6β形成聚合物的能力、与TNFR-6α和/或TNFR-6β的受体或配体结合的能力(例如，Fas配体和/或AIM-II(出版于1997年9月25日的国际申请公开号WO97/34911)。
可以通过各种不同的方法分析TNFR-6α和/或TNFR-6β多肽和片段、衍生变体和其类似物的功能活性。
例如，在一个分析与抗TNFR-6α抗体和/或抗TNFR-6β抗体结合或与完整的(全长)或成熟的TNFR-6α和/或TNFR-6β多肽竞争结合的能力的实施方案中，可以使用各种不同的本领域众所周知的免疫分析方法，包括但不局限于使用放射免疫分析技术、ELISA(酶联免疫吸附分析技术)、“夹心法”免疫分析、免疫放射性测量分析、凝胶扩散沉淀反应、免疫扩散分析、原位免疫分析(使用胶体金、酶或放射性同位素标记)、蛋白印迹、沉淀反应、凝集分析(例如凝胶凝集分析、血凝分析)、补体结合分析、免疫荧光分析、蛋白质A分析和免疫电泳分析等技术的竞争性以及非竞争性分析方法。在一个实施方案中，抗体结合是通过检测一抗上的标记而检测的。在另外一个实施方案中，一抗是通过检测与一抗结合的二抗或试剂而测定的。本领域中有许多已知的方法用于检测免疫分析中的结合，并且它们都在本发明的范围之内。
在另外一个实施方案中，其中对TNF配体进行了鉴定(例如Fas配体和/或AIM-II(出版于1997年9月25日的国际申请公开号WO97/34911))，或者评价了本发明的多肽片段、变体或衍生物形成聚合物的能力，也可分析结合，例如利用本领域众所周知的方法，例如浓缩以及非浓缩凝胶层析技术。见Phizicky，E等，微生物学评论5994-123(1995)。在另外一个实施方案中，可以分析TNFR-6α和/或TNFR-6β与其底物结合的生物学相关性(信号传导)。
此外，文中所描述的方法(例如见实施例7-9)和其它本领域众所周知的方法可被常规用于或修改后用于检测TNFR-6α和/或TNFR-6β多肽和片段、衍生变体及其类似物引发TNFR-6α和/或TNFR-6β相关的生物学活性(例如体外或体内抑制或降低FasL介导的凋亡，体外或体内抑制或降低AIM-II介导的凋亡)的能力。
例如，可以使用表达Fas的T细胞系如Jurkat来分析本发明TNFR多肽降低或阻断FasL介导的凋亡的能力。在此分析中，用可溶性FasL处理的Jurkat细胞经历凋亡。与在不加TNFR多肽和/或TNFR激动剂的情况下相同浓度的FasL与相同浓度的Fas表达细胞相互作用观测到的结果相比，在加入FasL之前用TNFR多肽和/或TNFR激动剂预处理细胞可以保护细胞免受凋亡并且导致凋亡水平降低。另外将FasL蛋白与TNFR多肽和/或TNFR激动剂混合也会阻断FasL与Jurkat细胞结合的能力以及介导凋亡的能力(例如，见实施例9)。
相反地，本发明的TNFR拮抗剂阻断TNFR介导的对FasL介导的凋亡的抑制。因此，本发明的TNFR拮抗剂可以通过例如组合成熟的TNFR(已知可FasL)、待测的TNFR拮抗剂以及可溶性FasL，然后将此组合物与Fas表达细胞系相互作用而分析。TNFR拮抗剂降低或阻断TNFR介导的对FasL介导的凋亡的抑制。因此，当与在无TNFR拮抗剂存在的情况下将相同浓度的Fas表达细胞与相同浓度的成熟TNFR和FasL相互作用相比，Fas表达细胞与成熟的TNFR、TNFR拮抗剂和可溶性FasL相互作用表现出凋亡水平的升高。
凋亡可以通过使用例如可选择性结合凋亡细胞的Annexin染色的增加而测定。在另一个实施例中，可以使用检测活细胞数的ALOMAR蓝染色测定由于凋亡而减少的细胞数目。
其它技术是本领域技术人员所熟知的，并且在本发明的范围之内。
在另外一个实施方案中，本发明的多核苷酸编码TNFR-6α和/或TNFR-6β的功能性特性。就这一点来说本发明的优选的实施方案包括含有TNFR-6α和/或TNFR-6β多肽的α螺旋和α螺旋形成区(α区”)、β片层和β片层形成区(“β区”)、转角和转角形成区(“转角区”)、卷曲和卷曲形成区(“卷曲区”)、亲水区、疏水区、α两亲性区、β两亲性区、柔性区、表面形成区和高抗原性指数区的片段。
就这一点而言，图4(表I)和图5(表II)中列出了某些优选区。分别在图4和图5中以及表I和表II中显示的数据几乎是相同结果的不同格式，这些结果是用DNA*STAR计算机程序在缺省参数的情况下对SEQ ID NO2和SEQ ID NO4的氨基酸序列进行分析而获得的。
上面所提到的在图4(表I)和图5(表II)中列出的优选区包括但不局限于前述的通过分析图1和图2中的氨基酸序列而鉴定出的各种类型的功能区。正如在图4(表I)和图5(表II)中列出的，这些优选区包括Garnier-Roboson α区、β区、转角区和卷曲区；Chou-Fasmanα区、β区和卷曲区；Kyte-Doolittle亲水区；Eisenbergα和β两亲性区；Karplus-Sculz柔性区；Emini表面形成区和Jameson-Wolf高抗原性指数区。就这一点而言，高度优选的多核苷酸是那些编码含有TNFR-6α和/或TNFR-6β的组成几种结构性特征如上面列出的几种(1，2，3或4)特征的功能区的多肽的多核苷酸。
此外，在表I和表II中VIII，IX，XIII和XIV栏中显示的数据可被常规用于确定高可能的抗原性区域。高抗原性区是利用VIII，IX，XIII和/或XIV栏中的数据通过选择代表多肽功能区的在抗原识别会导致起始免疫应答过程的环境下易于暴露至多肽表面的值而确定的。
表I残基 位置 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII XIV甲硫氨酸 1. . B . . .0.06 0.09 * -0.10 0.60精氨酸2. . B . . . .0.10 -0.34 * 0.50 0.82丙氨酸3. . B . . . .0.28 -0.34 * 0.50 0.63亮氨酸4A . . . . . .0.32 -0.34 * 0.50 0.99谷氨酸5A . . . . . .-0.10 -0.53 * F 0.95 0.50甘氨酸6. . . . . T C0.20 0.16 * F 0.45 0.41脯氨酸7. . . . T T .-0.72 0.04 * F 0.65 0.66甘氨酸8. . . . T T .-0.94 0.04 F 0.65 0.32亮氨酸9A . . . . T .-0.80 0.73 -0.20 0.26丝氨酸10 A A -1.61 0.87 -0.60 0.09亮氨酸11 A B -2.12 1.13 -0.60 0.08亮氨酸12 A B -2.72 1.34 -0.60 0.07半胱氨酸 13 A B -2.97 1.34 -0.60 0.04亮氨酸14 A B -2.97 1.46 -0.60 0.05缬氨酸15 A B -2.88 1.46 -0.60 0.05亮氨酸16 A B -2.66 1.20 -0.60 0.15丙氨酸17 A B -2.66 1.13 -0.60 0.18亮氨酸18 A B -2.80 1.13 -0.60 0.20脯氨酸19 A A -2.20 1.17 -0.60 0.20丙氨酸20 A B -2.20 0.91 -0.60 0.31亮氨酸21 A B -1.60 1.06* -0.60 0.28亮氨酸22 A B -1.60 0.80 -0.60 0.28脯氨酸23 A B -1.64 0.87* -0.60 0.28缬氨酸24 B -1.32 1.01* -0.40 0.25脯氨酸25 B -1.08 0.33* -0.10 0.60丙氨酸26 B B-1.12 0.07 -0.30 0.38缬氨酸27 B B-0.90 0.29* * -0.30 0.38精氨酸28 B B-0.69 0.14* * -0.30 0.25甘氨酸29 B B-0.14 -0.29 * * 0.30 0.43缬氨酸30 B B-0.14 -0.30 * * 0.30 0.83丙氨酸31 B B0.13 -0.51 * * 0.60 0.66谷氨酸32 B 0.74 -0.03 * * F 0.65 0.96苏氨酸33 B T 0.42 0.30* * F 0.40 2.02脯氨酸34 T T 0.48 0.09* * F 0.80 3.10苏氨酸35 T T 1.44 0.50* F 0.50 1.88酪氨酸36 T C2.03 0.50* 0.15 2.55脯氨酸37 T 1.44 0.01* 0.45 2.76色氨酸38 A C1.76 0.09* 0.05 1.93精氨酸39 A B1.66 -0.40 * F 0.60 2.13天冬氨酸 40 A A 1.62 -0.67 * F 0.90 1.99丙氨酸41 A C1.87 -0.67 * F 1.10 1.87谷氨酸42 A A 2.19 -1.59 * * F 0.90 1.66苏氨酸43 A A 1.67 -1.59 * F 0.90 1.94甘氨酸44 A T0.70 -0.90 * F 1.30 1.59谷氨酸45 A A 0.03 -0.76 * * F 0.75 0.86精氨酸46 A A 0.03 -0.19 * F 0.45 0.25亮氨酸47 A A 0.03 -0.17 * 0.30 0.26缬氨酸48 A B -0.32 -0.20 0.30 0.26半胱氨酸 49 A B -0.19 0.37 -0.30 0.07丙氨酸50 A B -0.40 0.80 -0.60 0.13谷氨酰胺 51 A B -0.86 0.54 -0.60 0.28半胱氨酸 52 A B -0.36 0.33 -0.30 0.51脯氨酸53TC -0.20 0.24 F 0.45 0.73脯氨酸54 T T-0.39 0.53 F 0.35 0.36甘氨酸55 T T0.20 0.77 F 0.35 0.50苏氨酸56 T 0.31 0.60 F-0.05 0.56苯丙氨酸 57B B 0.77 0.17 * F-0.15 0.71缬氨酸58B B 0.31 0.17 *0.19 1.12谷氨酰胺 59B B 0.63 0.31 * F0.53 0.41精氨酸60B T 1.09 -0.17 * F1.87 0.94脯氨酸61B T T 1.40 -0.96 * F2.66 2.47半胱氨酸 62 T T 1.80 -1.60 * F3.40 2.38精氨酸63 T T 2.44 -1.61 * F3.06 1.63精氨酸64 T 2.13 -1.19 * F2.77 1.63天冬氨酸 65 T 1.71 -1.13 * F2.68 4.39丝氨酸66 T T 1.26 -1.21 F2.79 3.24脯氨酸67 T T 1.58 -0.64 F2.55 0.89苏氨酸68 T T 1.26 -0.21 F2.50 0.52苏氨酸69 T T 0.48 0.21 F1.65 0.61半胱氨酸 70 T 0.27 0.40 F1.14 0.21甘氨酸71 T T 0.36 0.40 * * F1.33 0.22脯氨酸72 T T 0.68 0.34 * F1.62 0.24半胱氨酸 73 T C0.96 -0.14 * F2.01 0.88脯氨酸74 T C1.02 -0.21 * F2.40 1.21脯氨酸75 T T 1.38 0.11 * * F1.76 1.23精氨酸76 T T 1.72 0.17 * * F1.52 3.30组氨酸77B T 1.23 0.00 * * F0.88 3.70酪氨酸78B T 1.61 0.36 * *0.49 2.07苏氨酸79B 1.82 0.84 *-0.25 1.11谷氨酰胺 80B 1.79 1.24 * *-0.25 1.31苯丙氨酸 81 T 0.87 1.50 * *0.15 1.31色氨酸82 T 0.90 1.43 *0.00 0.75天冬酰胺 83A T 1.26 0.54 *-0.20 0.75酪氨酸84A T 0.90 0.54 * *-0.05 1.70亮氨酸85A T 1.01 0.33 * *0.37 0.87谷氨酸86A T 1.47 -0.59 * *1.71 1.05精氨酸87A T 1.09 -0.23 *1.69 1.05半胱氨酸 88 T T 1.09 -0.41 *2.22 0.69精氨酸89 T T 0.48 -0.70 *2.80 0.64酪氨酸90 T T 0.48 -0.06 *2.22 0.24半胱氨酸 91 T -0.19 0.63 *1.04 0.37天冬酰胺 92B B -0.64 0.63 *-0.04 0.10缬氨酸93B B 0.02 1.06 *-0.32 0.06亮氨酸94B B 0.02 0.30-0.30 0.21半胱氨酸 95B T 0.27 -0.27 0.70 0.25甘氨酸96 T C 0.93 -0.67 F1.35 0.59谷氨酸97A T 0.93 -1.31 F1.30 1.24精氨酸98A T 1.20 -2.00 * F1.30 4.00谷氨酸99A A 2.12 -2.07 * F0.90 4.08谷氨酸100 A A 2.20 -2.50 * F0.90 4.61谷氨酸101 A A 1.88 -2.00 * F0.90 2.38丙氨酸102 A A 1.84 -1.43 F0.75 0.74精氨酸103 A A 1.14 -0.93 0.60 0.58丙氨酸104 A A 0.83 -0.43 *0.30 0.34半胱氨酸 105 A A 0.80 0.06 *-0.30 0.48组氨酸106 A A 0.80 0.06 * *-0.30 0.34丙氨酸107 A A 1.50 0.46 * *-0.60 0.53苏氨酸108 A A 0.80 -0.04 * *0.45 1.95组氨酸109 A T 0.72 -0.11 *1.13 1.45天冬酰胺 110 A T 1.50 -0.04 *1.26 0.77精氨酸111 A T 0.87 -0.54 *1.99 1.04丙氨酸112 A T 1.57 -0.46 *1.82 0.41半胱氨酸 113 T T 1.57 -0.96 * 2.80 0.50精氨酸114B T 1.26 -0.87 ** 2.12 0.37半胱氨酸 115 T T 0.56 -0.44 ** 1.94 0.36精氨酸116 T T -0.26 -0.16 * 1.66 0.58苏氨酸117A B T-0.26 0.06* F0.53 0.26甘氨酸118A B T0.38 0.56* -0.20 0.49苯丙氨酸 119A B B -0.32 0.49* -0.60 0.34苯丙氨酸 120A B B 0.00 0.99* -0.60 0.24丙氨酸121 A A B -0.81 0.93* -0.60 0.24组氨酸122 A A -1.17 1.29-0.60 0.24丙氨酸123 A A -1.63 1.07* -0.60 0.15甘氨酸124 A A -0.93 0.97* -0.60 0.12苯丙氨酸 125 A A -0.27 0.47-0.60 0.15半胱氨酸 126 A A -0.27 0.47* -0.60 0.20亮氨酸127 A A -0.53 0.47-0.60 0.21谷氨酸128 A A T -0.61 0.43-0.60 0.32组氨酸129 T T -0.48 0.210.50 0.32丙氨酸130 T T 0.01 0.070.63 0.61丝氨酸131 T T 0.33 -0.19 1.36 0.54半胱氨酸 132T C 0.56 0.240.69 0.39脯氨酸133T C 0.21 0.24 F0.97 0.39脯氨酸134 T T -0.61 0.17 F1.30 0.29甘氨酸135 T T -0.91 0.43 F0.87 0.40丙氨酸136BT-1.20 0.540.19 0.18甘氨酸137B B -0.74 0.61-0.34 0.12缬氨酸138B B -0.88 0.61-0.47 0.19异亮氨酸 139B B -0.98 0.61-0.60 0.18丙氨酸140B B -0.84 0.60-0.60 0.27脯氨酸141B -0.56 0.60 F-0.25 0.55甘氨酸142 T-0.21 0.34 F0.88 1.06苏氨酸143T C 0.64 0.06 F1.16 1.82脯氨酸144T C 1.22 -0.04 F2.04 1.89丝氨酸145 T T 1.81 0.01 F1.92 2.76谷氨酰胺 146 T T 1.36 -0.01 F2.80 3.31天冬酰胺 147 T T 1.70 0.07 F1.92 1.15苏氨酸148 T T 1.80 0.04 F1.64 1.48谷氨酰胺 149 T T 1.34 0.09 F1.36 1.32半胱氨酸 150 BT 1.43 0.26 F0.53 0.44谷氨酰胺 151 B 1.22 0.29 F0.05 0.47脯氨酸152 B 0.88 0.23* F0.05 0.42半胱氨酸 153 B 0.88 0.26* F0.05 0.78脯氨酸154 BT 0.18 0.17* F0.25 0.65脯氨酸155 T T 0.54 0.56* F0.35 0.36甘氨酸156 T T -0.04 0.51* F0.35 0.91苏氨酸157 BT -0.13 0.44 F-0.05 0.59苯丙氨酸 158 B 0.23 0.40 F-0.25 0.51丝氨酸159 B 0.14 0.36 F0.39 0.70丙氨酸160 B 0.06 0.31 F0.73 0.65丝氨酸161T C 0.10 0.21 F1.72 1.00丝氨酸162T C 0.41 -0.19 F2.56 1.00丝氨酸163 T T 1.11 -0.57 F3.40 1.72丝氨酸164 T T 0.74 -0.67 F3.06 2.22丝氨酸165 T1.33 -0.49 F2.07 0.89谷氨酸166 T1.42 -0.47 F1.88 1.15谷氨酰胺 167 T1.69 -0.43 F1.82 1.32半胱氨酸 168 T2.10 -0.31 F1.76 1.34谷氨酰胺 169 B 2.40 -0.70 F1.94 1.52脯氨酸170T2.03 -0.30F2.32 1.41组氨酸171T T 1.72 -0.13F2.80 1.41精氨酸172T T 1.13 -0.21F2.52 1.18天冬酰胺 173T T 0.99 -0.11 * 1.94 0.77半胱氨酸 174 B T 0.64 0.14 0.66 0.47苏氨酸175 A B 0.04 0.07 -0.02 0.24丙氨酸176 A B -0.51 0.76 * -0.60 0.12亮氨酸177 A B -1.43 0.86 * -0.60 0.23甘氨酸178 A B -1.43 0.97 * -0.60 0.13亮氨酸179 A B -1.62 0.89 * -0.60 0.21丙氨酸180 A B -1.52 1.03 * -0.60 0.19亮氨酸181 A B -1.28 0.77 * -0.60 0.29天冬酰胺 182 A B -0.77 0.77 * -0.60 0.35缬氨酸183 B T -0.72 0.47 * F-0.05 0.46脯氨酸184 T C -0.21 0.36 * F0.73 0.75甘氨酸185T T 0.34 0.06 * F1.21 0.63丝氨酸186T T 1.16 0.16 * F1.64 1.15丝氨酸187 T C 0.84 -0.49F2.32 1.24丝氨酸188T T 0.89 -0.43F2.80 1.81组氨酸189 B T 0.43 -0.17F2.12 1.11天冬氨酸 190T T 0.47 0.01 F1.49 0.45苏氨酸191 B 0.47 0.11 F0.61 0.48亮氨酸192 B 0.10 0.11 0.18 0.47半胱氨酸 193 B T 0.09 0.19 0.10 0.15苏氨酸194 B T -0.22 0.67 -0.20 0.15丝氨酸195 B T -0.92 0.61 * F-0.05 0.18半胱氨酸 196 B T -0.82 0.71 F-0.05 0.29苏氨酸197T-0.82 0.57 F0.15 0.31甘氨酸198T-0.46 0.77 0.00 0.19苯丙氨酸 199 B -0.46 0.77 * -0.40 0.48脯氨酸200 B -0.04 0.69 * * -0.40 0.48亮氨酸201 B -0.23 0.20 * * -0.10 0.96丝氨酸202 B -0.13 0.41 * * F0.02 0.82苏氨酸203 B -0.13 0.06 * F0.59 0.82精氨酸204 C -0.02 0.06 * F1.06 0.99缬氨酸205T C 0.19 -0.13 * F2.13 0.74脯氨酸206T C 1.00 -0.51 * F2.70 0.89甘氨酸207T C 0.63 -1.00 * F2.43 0.79丙氨酸208 AT0.94 -0.43 * F1.66 0.57谷氨酸209 A A 0.94 -1.07 * F1.29 0.64谷氨酸210 A A 1.21 -1.50 * F1.17 1.26半胱氨酸 211 A A 0.57 -1.43 * F0.90 1.26谷氨酸212 A A 0.02 -1.29 * * F0.75 0.54精氨酸213 A A 0.61 -0.60 * * 0.60 0.22丙氨酸214 A A -0.09 -0.60 * * 0.60 0.68缬氨酸215 A A -0.94 -0.39 * * 0.30 0.34异亮氨酸 216 A A -0.87 0.26 * * -0.30 0.13天冬氨酸 217 A A -1.57 0.76 * * -0.60 0.13苯氨酸218 A A -1.68 1.04 * * -0.60 0.15缬氨酸219 A A -1.09 0.80 -0.60 0.37丙氨酸220 A A -1.12 0.11 -0.30 0.37苯丙氨酸 221 A A -0.53 0.80 * -0.60 0.30谷氨酰胺 222 A A -1.42 0.40 * -0.60 0.54天冬氨酸 223 A A -0.68 0.44 F-0.45 0.38异亮氨酸 224 A A 0.29 -0.06F0.45 0.87丝氨酸225 A A 0.07 -0.84F0.75 0.99异亮氨酸 226 A A 0.77 -0.56 * F0.75 0.49赖氨酸227 A A0.88 -0.16 ** F0.60 1.20精氨酸228 A A0.07 -0.84 ** F0.90 1.76亮氨酸229 A A0.14 -0.54 *F0.90 2.07谷氨酰胺 230 A A0.44 -0.54 *F0.75 0.85精氨酸231 A B 0.74 -0.14 * 0.30 0.76亮氨酸232 A A-0.11 0.36 * -0.30 0.93亮氨酸233 A B -0.22 0.36 **-0.30 0.44谷氨酰胺 234 A B 0.00 -0.04 * 0.30 0.39丙氨酸235 A B -0.21 0.46 * -0.60 0.48亮氨酸236 A B -0.32 0.20 **-0.30 0.89谷氨酸237 A B 0.14 -0.490.30 0.89丙氨酸238B T 0.67 -0.46 F0.85 0.88脯氨酸239 T T 0.32 -0.04 F1.40 1.12谷氨酸240 T T 0.70 -0.30 F1.25 0.64甘氨酸241 T T 1.20 0.13F0.65 0.98色氨酸242 T 0.99 0.11 *F0.45 0.91甘氨酸243 C1.69 0.11 ** F0.59 0.81脯氨酸244 C1.31 0.11 ** F1.08 1.61苏氨酸245 T C0.97 0.19 *F1.62 1.55脯氨酸246 T C1.42 -0.30 *F2.56 1.55精氨酸247 T T 1.12 -0.73 *F3.40 1.96丙氨酸248 T C0.88 -0.66 *F2.87 1.37甘氨酸249 A A0.28 -0.64 ** F1.77 0.90精氨酸250 A A0.59 -0.39 **0.98 0.38丙氨酸251 A A-0.01 0.01 **0.04 0.65丙氨酸252 A A-0.08 0.20 **-0.30 0.54亮氨酸253 A A-0.30 -0.23 **0.30 0.55谷氨酰胺 254 A A0.16 0.46 * -0.60 0.45亮氨酸255 A A0.16 -0.04 *0.30 0.87赖氨酸256 A A0.86 -0.54 *0.75 2.07亮氨酸257 A A0.63 -1.23 * F0.90 2.34精氨酸258 A A1.13 -0.94 ** F0.90 2.34精氨酸259 A B 1.13 -1.14 ** F0.90 1.69精氨酸260 A B 1.13 -1.14 ** F0.90 3.55亮氨酸261 A B 0.28 -1.14 ** F0.90 1.49苏氨酸262 A B 0.74 -0.46 ** F0.45 0.63谷氨酸263 A B 0.04 -0.03 **0.30 0.32亮氨酸264 A B -0.07 0.47 * -0.60 0.39亮氨酸265 A B -0.18 0.19*-0.30 0.47甘氨酸266 A A0.29 -0.300.30 0.45丙氨酸267 AT 0.01 0.13F0.25 0.54谷氨酰胺 268 AT -0.80 -0.06 F0.85 0.66天冬氨酸 269 AT -0.80 -0.06 F0.85 0.55甘氨酸270 AT -0.84 0.20 **0.10 0.45丙氨酸271 A A-0.39 0.34 **-0.30 0.19亮氨酸272 A B -0.61 -0.06 **0.30 0.23亮氨酸273 A B -1.42 0.63 **-0.60 0.19缬氨酸274 A A-1.42 0.89 **-0.60 0.15精氨酸275 A A-1.67 0.79 **-0.60 0.32亮氨酸276 A A-1.89 0.60 **-0.60 0.40亮氨酸277 A A-0.97 0.60 **-0.60 0.44谷氨酰胺 278 A A-1.01 -0.04 **0.30 0.44丙氨酸279 A A-0.74 0.60 **-0.60 0.40亮氨酸280 A A-0.74 0.41 **-0.60 0.49精氨酸281 A B -0.53 -0.27 * 0.30 0.55缬氨酸282 A B 0.07 -0.06 * 0.30 0.54丙氨酸283 A B -0.28 -0.13 * 0.72 1.01精氨酸284 A B-0.50 -0.39 * 0.84 0.51甲硫氨酸 285 B T 0.31 0.30*0.91 0.57脯氨酸286 T C 0.31 -0.34 * F2.13 0.97甘氨酸287 T C 0.87 -0.84 ** F2.70 0.97亮氨酸288 AT 0.60 -0.46 ** F2.08 1.32谷氨酸289 A 0.60 -0.43 ** F1.46 0.63精氨酸290 A 1.20 -0.86 ** F1.64 1.25丝氨酸291 A 1.52 -1.29 ** F1.37 2.62缬氨酸292 A 1.17 -1.97 ** F1.10 2.97精氨酸293 A 1.17 -1.19 ** F1.10 1.31谷氨酸294 A 0.96 -0.50 ** F0.65 0.81精氨酸295 A -0.01 -0.46 ** F0.80 1.68苯丙氨酸 296B 0.26 -0.46 *0.50 0.64亮氨酸297B 0.72 0.04*-0.10 0.50脯氨酸298 A 0.22 0.47*-0.40 0.33缬氨酸299 A -0.17 0.90 * -0.40 0.48组氨酸300 A -0.67 0.54 -0.40 0.75
表II残基位置 I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII XIII XIV甲硫氨 1B 0.06 0.09 * -0.10 0.60酸精氨酸 2B 0.10 -0.34 * 0.50 0.82丙氨酸 3B 0.28 -0.34 * 0.50 0.63亮氨酸 4B 0.32 -0.34 0.50 0.99谷氨酸 5B -0.10 -0.53 F0.95 0.50甘氨酸 6TC 0.20 0.16 * F0.45 0.41脯氨酸 7 T T -0.72 0.04 * F0.65 0.66甘氨酸 8 T T -0.94 0.04 F0.65 0.32亮氨酸 9B T -0.80 0.73 -0.20 0.26丝氨酸 10 A B -1.61 0.87 -0.60 0.09亮氨酸 11 A B -2.12 1.13 -0.60 0.08亮氨酸 12 A B -2.72 1.34 -0.60 0.07半胱氨 13 A B -2.97 1.34 -0.60 0.04亮氨酸 14 A B -2.97 1.46 -0.60 0.05缬氨酸 15 A B -2.88 1.46 -0.60 0.05亮氨酸 16 A B -2.66 1.20 -0.60 0.15丙氨酸 17 A B -2.66 1.13 -0.60 0.18亮氨酸 18 A B -2.80 1.13 -0.60 0.20脯氨酸 19 A B -2.20 1.17 -0.60 0.20丙氨酸 20 A B -2.20 0.91 -0.60 0.31亮氨酸 21 A B -1.60 1.06 *-0.60 0.28亮氨酸 22 A B -1.60 0.80 -0.60 0.28脯氨酸 23 A B -1.64 0.87 *-0.60 0.28缬氨酸 24 B -1.32 1.01 *-0.40 0.25脯氨酸 25 B -1.08 0.33 -0.10 0.60丙氨酸 26 B B-1.12 0.07 -0.30 0.38缬氨酸 27 B B-0.90 0.29 * *-0.30 0.38精氨酸 28 B B-0.69 0.14 * *-0.30 0.25甘氨酸 29 B B-0.14 -0.29 * *0.30 0.43缬氨酸 30 B B-0.14 -0.30 * *0.30 0.83丙氨酸 31 B B0.13 -0.51 * *0.60 0.66谷氨酸 32 B 0.74 -0.03 * * F0.65 0.96苏氨酸 33 B T 0.42 0.30 * * F0.40 2.02脯氨酸 34T T 0.48 0.09 * * F0.80 3.10苏氨酸 35T T 1.44 0.50 * F0.50 1.88酪氨酸 36 TC 2.03 0.50 * 0.15 2.55脯氨酸 37T 1.44 0.01 * 0.45 2.76色氨酸 38 AC 1.76 0.09 * 0.05 1.93精氨酸 39 A B 1.66 -0.40 * F0.60 2.13天冬氨 40 AC 1.62 -0.67 * F1.10 1.99丙氨酸 41 AC 1.87 -0.67 * * F1.10 1.87谷氨酸 42 AC 2.19 -1.59 * * F1.10 1.66苏氨酸 43 AT 1.67 -1.59 * F1.30 1.94甘氨酸 44 AT 0.70 -0.90 * F1.30 1.59谷氨酸 45 AT 0.03 -0.76 * * F1.15 0.68精氨酸 46 AT 0.03 -0.19 * F0.85 0.25亮氨酸 47 A B 0.03 -0.17 * 0.30 0.26缬氨酸 48 A B -0.31 -0.20 0.30 0.26半胱氨 49 A B -0.17 0.37 -0.30 0.07酸内氨酸 50 A B -0.40 0.80 -0.60 0.13谷氨酰 51A B -0.86 0.54 -0.60 0.28胺半胱氨 52A B -0.36 0.33 -0.30 0.51酸脯氨酸 53T C -0.20 0.24 F 0.45 0.73脯氨酸 54 T T -0.39 0.53 F 0.35 0.36甘氨酸 55 T T 0.20 0.77 *F 0.35 0.50苏氨酸 56 BT 0.31 0.60 F -0.05 0.56苯丙氨 57 B B0.77 0.17 *F -0.15 0.71酸缬氨酸 58 B B0.31 0.17 * 0.19 1.12谷氨酰 59 B B0.63 0.31 *F 0.53 0.41胺精氨酸 60 BT 1.09 -0.17 *F 1.87 0.94脯氨酸 61 BT 1.40 -0.96 *F 2.66 2.47半胱氨 62 T T 1.80 -1.60 *F 3.40 2.38酸精氨酸 63 T T 2.44 -1.61 *F 3.06 1.63精氨酸 64 T 2.13 -1.19 *F 2.77 1.63天冬氨 65 T 1.71 -1.13 *F 2.68 4.39酸丝氨酸 66 T T 1.26 -1.21 F 2.79 3.24脯氨酸 67 T T 1.58 -0.64 F 2.55 0.89苏氨酸 68 T T 1.26 -0.21 F 2.50 0.52苏氨酸 69 T T 0.48 0.21 F 1.65 0.61半胱氨 70 T 0.27 0.40 F 1.14 0.21酸甘氨酸 71 T T 0.36 0.40 F 1.33 0.22脯氨酸 72 T T 0.68 0.34 F 1.62 0.24半胱氨 73T C 0.96 -0.14 * F 2.01 0.88酸脯氨酸 74T C 1.02 -0.21 * F 2.40 1.21脯氨酸 75 T T 1.38 0.11 * F 1.76 1.23精氨酸 76 T T 1.72 0.17 * F 1.52 3.30组氨酸 77 BT 1.23 0.00 * F 0.88 3.70酪氨酸 78 BT 1.61 0.36 * 0.49 2.07苏氨酸 79 B 1.82 0.84 * -0.25 1.11谷氨酰 80 B 1.79 1.24 * -0.25 1.31胺苯丙氨 81 T 0.87 1.50 * 0.15 1.31酸色氨酸 82 T 0.90 1.43 * 0.00 0.75天冬酰 83AT 1.26 0.94 * -0.20 0.75胺酪氨酸 84AT 0.90 0.54 * -0.05 1.70亮氨酸 85AT 1.01 0.33 * 0.38 0.87谷氨酸 86AT 1.47 -0.59 * 1.71 1.05精氨酸 87AT 1.09 -0.23 1.69 1.05半胱氨88 T T 1.09 -0.41 2.22 0.69酸精氨酸 89 T T 0.48 -0.70 2.80 0.64酪氨酸 90 T T 0.48 -0.06 2.22 0.24半胱氨 91 T T -0.19 0.63 1.04 0.37酸天冬酰 92 B B-0.64 0.63 -0.04 0.10胺缬氨酸 93 B B0.02 1.06 -0.02 0.06亮氨酸 94 B B0.02 0.30 0.30 0.21半胱氨 95 B T 0.27 -0.27 1.60 0.25酸甘氨酸 96 T C 0.93 -0.67 F 2.55 0.59谷氨酸 97 T C 0.93 -1.31 F 3.00 1.24精氨酸 98A T 1.20 -2.00 F 2.50 4.00谷氨酸 99A A 2.12 -2.07 F 1.80 4.08谷氨酸 100 A A 2.20 -2.50 F 1.50 4.61谷氨酸 101 A A 1.88 -2.00 F 1.20 2.38丙氨酸 102 A A 1.84 -1.43 F 0.75 0.74精氨酸 103 A A 1.14 -0.93 0.60 0.58丙氨酸 104 A A 0.83 -0.43 0.30 0.34半胱氨 105 A A 0.80 0.06 -0.30 0.48酸组氨酸 106 A A 0.80 0.06 *-0.30 0.34丙氨酸 107 AT 1.50 0.46 *-0.20 0.53苏氨酸 108 AT 0.80 -0.04 *0.85 1.95组氨酸 109 AT 0.72 -0.11 *1.13 1.45天冬酰 110 AT 1.50 -0.04 *1.26 0.77胺精氨酸 111 AT 0.87 -0.54 1.99 1.04丙氨酸 112 AT 1.57 -0.46 1.82 0.41半胱氨 113 T T 1.57 -0.96 *2.80 0.50酸精氨酸 114BT 1.26 -0.87 * 2.2 0.37半胱氨 115 T T 0.56 -0.44 * 1.94 0.36酸精氨酸 116 T T -0.26 -0.16 * 1.66 0.58苏氨酸 117 A B T -0.26 0.06 * F 0.53 0.26甘氨酸 118 A B T 0.38 0.56 * -0.20 0.49苯丙氨 119 A B B -0.32 0.49 * -0.60 0.34酸苯丙氨 120A B B 0.00 0.99 * -0.60 0.24酸丙氨酸 121A B B -0.81 0.93 * -0.60 0.24组氨酸 122AC -1.17 1.29 * -0.40 0.24丙氨酸 123AC -1.63 1.07 * -0.40 0.15甘氨酸 124A T -0.93 0.97 * -0.20 0.12苯丙氨 125A T -0.27 0.47 -0.20 0.15酸半胱氨 126A T -0.27 0.47 * -0.20 0.20酸亮氨酸 127A B -0.53 0.47 -0.60 0.21谷氨酸 128A B T -0.61 0.43 -0.20 0.32组氨酸 129 T T -0.48 0.21 0.50 0.32丙氨酸 130 T T 0.01 0.07 0.63 0.61丝氨酸 131 T T 0.33 -0.19 1.36 0.54半胱氨 132 T C0.56 0.24 0.69 0.39酸脯氨酸 133 T C0.21 0.24 F0.97 0.39脯氨酸 134 T T -0.61 0.17 F1.30 0.29甘氨酸 135 T T -0.91 0.43 F0.87 0.40丙氨酸 136 B T -1.20 0.54 0.19 0.18甘氨酸 137 B B -0.74 0.61 -0.34 0.12缬氨酸 138 B B -0.88 0.61 -0.47 0.19异亮氨 139 B B -0.67 0.61 -0.60 0.18酸丙氨酸 140 B T -0.62 0.11 0.10 0.32脯氨酸 141 B T -0.32 0.07 F 0.25 0.58甘氨酸142 T C-0.57 0.34**F0.45 0.86谷氨酸143 T C0.40 0.16**F0.45 0.86丝氨酸144B0.94 -0.34 **F0.80 1.10氨酸 145 T 1.19 -0.34 **F1.20 1.10丙氨酸146BT 0.81 -0.34 **F0.85 0.63精氨酸147 T T 0.94 0.16**F0.65 0.47甘氨酸148 T T 1.06 0.20 *F0.65 0.69甘氨酸149 T C1.06 -0.71 F1.84 0.35丙氨酸150C1.00 -0.83 F1.83 0.92脯氨酸151C1.24 -0.40*F1.87 0.92精氨酸152 T T 1.24 -0.40 F2.61 0.92丝氨酸153 T T 1.70 -0.83 * F3.40 1.78甘氨酸154 T T 1.38 -1.33 **F3.06 2.26甘氨酸155 T T 1.62 -1.19 **F2.57 0.62精氨酸156 T 1.94 -0.76 **F2.26 0.46精氨酸157 T 1.49 -1.14 **F2.15 0.90半胱氨158B1.79 -1.14 **F1.64 0.90酸甘氨酸159 T T 1.28 -1.17 **F2.47 0.80精氨酸160BT 1.03 -0.53 **F2.30 0.30甘氨酸161BT 0.58 -0.03 **F1.77 0.57谷氨酰162BT 0.26 -0.17 **F1.54 0.57胺缬氨酸163B0.62 -0.17*F1.11 0.45丙氨酸164B0.16 0.21 *F0.28 0.61甘氨酸165BT -0.54 0.47 *F-0.05 0.29脯氨酸166BT -0.41 0.57 F-0.05 0.40丝氨酸167 T C-0.80 0.36 F0.45 0.61亮氨酸168BT -0.33 0.29 0.10 0.78丙氨酸169B-0.13 0.29 -0.10 0.65脯氨酸170B-0.18 0.29 -0.10 0.62
本发明另外的优选的核酸片段包括或由编码TNFR-6α和/或TNFR-6β一个或多个表位携带部分的核酸分子组成。特别是，本发明的这些核酸片段包括编码下列多肽的核酸分子一段多肽包括或由SEQ ID NO2中从大约第57位苯丙氨酸到大约第117位苏氨酸残基，从大约第132位半胱氨酸到大约第175位苏氨酸残基，从大约第185位甘氨酸到大约第194位苏氨酸残基，从大约第205位缬氨酸到大约第217位天冬氨酸残基，从大约第239位脯氨酸到大约第264位亮氨酸残基和/或从大约第283位丙氨酸到大约第298位脯氨酸残基。在另外的实施方案中，本发明的核酸片段包括或由编码TNFR-6β一个或多个表位携带部分的在SEQ ID NO4中从大约第31位丙氨酸到大约第46位苏氨酸残基，从大约第57位苯丙氨酸到大约第80位谷氨酰胺残基，从大约第86位谷氨酸到大约第106位组氨酸残基，从大约第108位苏氨酸到大约第119苯丙氨酸位残基，从大约第129位组氨酸到大约第138位缬氨酸残基和/或从大约第142位甘氨酸到大约第166位脯氨酸残基的核酸分子组成。在此上下文中“大约”包括特定引用的范围以及在一端或两端稍大或稍小几(5，4，3，2或1)个氨基酸的范围。如上面图4和图5中所示，通过Jameson-Wolf抗原性指数分析已经确定这些多肽