预防肿瘤生长的方法

D·N·曼奈尔, T·希尔冈斯, C·塞茨

2002年7月17日

2000年6月21日

1999年6月28日

巴斯福股份公司

A61K48/00GK1359297SQ00809675

肿瘤 预防 生长

1.一种通过抑制LTBR活化作用从而预防炎症、自身免疫性疾病和肿瘤生长的方法2.如权利要求1的方法，其特征在于抑制LTBR基因表达3.如权利要求2的方法，其特征在于应用LTBR反义分子4.如权利要求2的方法，其特征在于特异性地水解LTBR的mRNA5.如权利要求2的方法，其特征在于特定性地阻断LTBR转录的信号序列6.如权利要求2的方法，其特征在于将作用于LTBR转录信号序列的转录因子特定性阻断7.如权利要求1的方法，其特征在于应用LTBR拮抗剂8.如权利要求1的方法，其特征在于阻断内源性LTBR配体9.具有抑制LTBR介导的活化作用的物质用于制备细胞抑制药物和抑制炎症药物的应用10.权利要求9的应用，用于抑制肿瘤血管生成

本发明涉及一种预防炎症、自身免疫性疾病以及肿瘤生长的方法，该方法是通过抑制由β-淋巴毒素受体(LRBR)介导的活化作用β-淋巴毒素膜蛋白(Browning et.al.，Cell Vol.72，847-856，1993)以同聚和异聚的形式与特定的β-淋巴毒素受体(LTBR)相结合(Croweet.al.，Science Vol.264，29 April 1994，707-709)Browning等人(J.Exp.Med.Vol.183，March 1996，867-878)描述β-淋巴毒素受体系统发出的信号可以导致某些腺癌细胞的死亡，因此他们建议将β-淋巴毒素受体的活化作为一种可能的抗癌治疗方法Degli-Esposti(Journal of Immunology，1997，158；1756-1762)等人报道了通过激活LTBR系统能抑制黑色素瘤细胞的生长，因此他们也提议用β-淋巴毒素治疗实体瘤与之相反，我们的发现显示抑制LTBR的活化能减慢或预防肿瘤的生长本发明的目的是提供一种通过抑制或至少降低LTBR介导的活化作用从而预防炎症、自身免疫性疾病和肿瘤生长的方法该方法特别适于急性和慢性炎症，如类风湿性关节炎、结肠炎和实体瘤LTBR系统可在不同水平上被抑制例如，使用反义分子能抑制LTBR的基因表达另一种特异性抑制LTBR的基因表达的方法是，例如通过合适的核酶进行特异性水解作用消除LTBR的mRNA更进一步抑制LTBR基因表达的可能方法是阻断相应的信号序列的转录，如阻断LTBR基因的促进区域的转录抑制LTBR系统活化作用的另一种可能性在于应用β-淋巴毒素拮抗剂，即那些能够与β-淋巴毒素受体结合却不能激活受体系统的分子通过检测细胞检测系统中受试物质在加入β-淋巴毒素后使LTBR系统活化作用降低的能力可检测出这些物质本发明的另一目的是能抑制LTBR活化作用的物质来制备细胞抑制剂和抑制炎症药物的应用现已发现抑制LTBR的活化作用能使肿瘤血管生成受阻，从而能抑制实体瘤的生长因此，用上述物质及方法预防LTBR活化作用特别适于抑制肿瘤的血管生成以下的实验将解释本发明实验1用LTBR和免疫球蛋白的融合蛋白转染肿瘤细胞(BFS-1)(BFS-LTR)这种LTBR和免疫球蛋白的融合蛋白作为LTBR抑制剂在接种入同基因小鼠后，这些转染后的肿瘤细胞与野生型肿瘤细胞相比，其肿瘤生长受抑(图)实验2在第二个实验中，这些肿瘤细胞被种入配体缺陷小鼠(即既不能产生α-淋巴毒素也不能产生β-淋巴毒素的双重缺陷小鼠)后，转染后的肿瘤细胞与野生型肿瘤细胞相比，肿瘤生长未见明显差异(图)实验3用活体显微镜观察肿瘤在小鼠体内的生长将普通肿瘤细胞、用LTBR受体抑制剂(BSF-1-LTβR-IgFc)转染后的肿瘤细胞及用对照质粒(p55TNF-受体-Ig-Fc)转染后的肿瘤细胞种入小鼠(C57BL/6)皮下，通过活体显微镜观察肿瘤的生长和血管生成肿瘤细胞接种后2天接种LTβ-受体抑制剂转染肿瘤细胞的小鼠的水肿形成较对照中的明显减小当普通肿瘤细胞和被对照质粒转染肿瘤细胞接种后5～9天，小鼠已有明显的血管生成和相应的肿瘤生长；而接种LTβ-受体抑制剂转染肿瘤细胞的小鼠在肿瘤接种区域及周围皮肤未见血管生成，肿瘤亦未见进一步生长附图所示分别是肿瘤细胞接种2天(图2)及9天(图3)后的照片，上图为对照肿瘤，下图为LTβ受体抑制剂转染肿瘤