专利名称：竹节参或其提取物在制备抗痛风和修复高尿酸性肾损伤药物中应用的制作方法痛风(gout)是嘌呤代谢紊乱导致尿酸生成增多和或尿酸排泄减少所引起的一 种代谢性疾病。其临床特点为高尿酸血症；尿酸盐沉积所导致反复发作的急、慢性关节炎和 软组织损伤；尿酸性肾结石所致的痛风性肾损伤。当血清尿酸值彡416umol/L(7. Omg/dl) 则成为高尿酸血症。而高尿酸(高剂量yperuricimia)血症是痛风的前提与生化基础，痛风 必然伴有高尿酸血症；但痛风的患病率远低于高尿酸血症，因为尿液中尿酸排泄量增强，可 以降低痛风症的产生；痛风症患者，最大的并发症是高尿酸性肾损伤，能修复高尿酸性肾损 伤的药物，可以有效地提高尿液中尿酸排泄量，可以治疗痛风症，或减少痛风症的发病率。原发性痛风发病率与饮食中蛋白质含量密切相关。第一次和第二次世界在战期 间，由于饮食质量下降，欧洲痛风的发病率明显降低。而当战后饮食蛋白质含量再度丰富 时，其发病率又恢复到战前水平。60年代日本经济腾飞以后，其国民饮食蛋白质含量显著升 高，以致痛风亦成为日本人较常见的疾病。国内痛风的临床报告也逐年增多，尤其是80年 代以来，增加显著。这种世界性痛风发病率的升高，无疑和20多年来社会的进步、人类生活 改善、生活方式改变有关。痛风发病的先决条件是高尿酸血症。在血液ρ高剂量7. 4情况下，血中尿酸以尿 酸钠离子形式存在，故高尿酸血症即高尿酸钠血症。痛风的一切临床表现，皆由其钠盐从超 饱和的细胞外液析出并沉积于组织引起。痛风的肾脏病变为尿酸盐结晶所致。肾脏实质性病变如肾脏炎症、心血管病变、高血压导致肾功能不全时，肾小球滤过 率降低可引起血清尿酸含量升高，随之肾小管代偿性分泌增加，胃肠排泄亦代偿性增多。但 是当肾小球滤过率降低至< 25ml/min时，上述代偿功能即失去作用。故尿毒症病人，血清 尿酸明显升高。部分主要损害肾小管的疾病如多囊肾、铅中毒时，其血清尿酸含量升高，则 主要为肾小管再分泌减少所致。近年研究认为肾排泄不足是发生高尿酸血症的最主要原 因。中医药学认为，痛风属中医“痹证”范畴，古今皆名“痛风”。痛风不同于“痛痹”、 “风痹”等痹证，有其独特的证候特点。痹证类皆因风寒湿等外邪合而杂至、乘虚侵袭经络所 致，因风邪或寒邪的孰轻孰重而表现出痛处游走不定或固定不移的特点；痛风则与外受风 寒湿关系不著而与饮食肥甘及饮酒有关，夜间多发，关节红肿剧痛，久则僵肿畸形；皮下形 成黄白色、大小不一之隆起，小如芝麻，大如鸡卵，初起质软，渐硬如石，甚则破溃成痊，有白 色糊状物流出，经久不愈。古代医家对痛风的不同于风寒湿痹的特点亦有观察。如《医学入 门 痛风》记载“一久则手足蜷挛，甚则身体块痕。”清 林佩琴《类证治裁》形象地记载了 痛风的症状“其手弯曲，身 块痕；其肿如脱，渐至摧落；其痛如掣，不可屈伸。”目前，对痛风仍无根治药物。药物治疗的目的①尽快终止急性发作和预防急性关 节炎复发；②预防和治疗尿酸盐在关节、肾脏等组织中沉积；③预防尿酸性肾结石；④治疗 高血压、高脂血症、糖尿病等并发症。1.秋水仙碱(colchicine)仍是目前治疗痛风性关节炎的快速特效药。一般采用 小剂量口服给药，但口服容易导致腹泻等胃肠反应。也有采用小剂量静脉注射法给药，认为 可避免腹泻、呕吐等副作用，也有学者对此持反对意见。秋水仙碱虽可迅速缓解症状，但无 降低血尿酸的作用，且副作用较大，胃肠道反应强烈，对肝、肾功能及造血系统均有损害，有 人认为尚可致癌。2.非留体抗炎药如吲哚美辛、扶他林，也可引起严重不良反应，如消化道出血、再 生障碍性贫血、肝肾功能损害等，副作用较大。3.糖皮质激素能迅速缓解急性发作，但停药后往往出现“反跳”现象(复发加 重)，并可延长病程，因此一般只能在秋水仙碱、非留体抗炎药无效时采用。4.服用小苏打在缓解期可大量饮水及碱化尿液，使尿PH值保持在6. 2 6. 8，帮 助尿路中尿酸结石溶解。可服用小苏打等。5.促尿酸排泄的药物如丙磺舒、苯溴马隆(痛风利仙)等，具有阻止肾小管重吸 收尿酸，增加尿酸排出的作用。但当患者肾功能减退时，疗效下降甚至无效，故不宜采用；已 有尿酸结石形成也不宜采用，否则会加肾损伤。6.抑制尿酸生成的药物代表药为别嘌醇，其作用机制为竞争性抑制黄嘌呤氧化 酶而使尿酸生成减少。可与排尿酸药合用可增强疗效。其主要毒副作用为肝、肾功能损害 (如间质性肾炎)及骨髓抑制等。过去认为适用于肾功能减退的痛风患者，但近年来对其严 重的毒副作用认识更加深刻，限制了它在痛风缓解期的应用。综上，现代医学对高尿酸血症与痛风的治疗，由于所用主要药物均存在较严重的 毒副作用，故临床使用上往往存在较大的治疗矛盾，对药物的选择及使用上，不同的学者 往往有不同的看法，尤其对痛风伴肾功能不良的患者的治疗颇为棘手，目前仍缺乏较为理 想的药物与治疗方法。
本发明的目的是克服上述不足之处提供一种竹节参或其提取物，特别是竹节参皂 苷ν或其竹节参总皂苷在制备抗痛风和/或修复高尿酸性肾损伤的药物中的应用。竹节参为五加科人参，属多年生草本植物Panax japonicus C. A. Mey.的干燥根， 含有多种皂苷、挥发油、糖类和多种氨基酸。原是一种名贵的民间中草药，现已收载于《中 华人民共和国药典》，药用功能类似人参和三七。竹节参生于山坡沟边、阴湿地区或岩石沟 涧旁，主要分布于贵州、湖南、云南、安徽、江西、湖北等地。每年秋季采挖，除去茎叶，分出肉 质根，将根茎除去外皮，晒干或阴干即可入药。始载于《本草纲目拾遗》。竹节参甘、微苦， 温。具有活血化瘀、消肿止痛、滋补强壮等多种功效，既有类似人参的滋补强壮作用，又有类 似三七的散瘀止痛、止血、祛痰作用，主要用于病后虚弱、劳嗽咳血、咳嗽痰多、跌打损伤。本发明是通过以下技术方案实现的竹节参或竹节参提取物作为活性成分在制 抗痛风和/或修复高尿酸性肾损伤 的药物中应用。上述竹节参提取物可为竹节参的水提物、醇提物、竹节参的水提物或醇提物精制 后得到的精制竹节参提取物。精制竹节参提取物优选为竹节参皂苷ν或竹节参总皂苷。其 中，竹节参总皂苷中竹节参皂苷ν的含量> 50% ；所述的竹节参皂苷ν的纯度> 90%。上述醇提物为乙醇或甲醇的提取物，乙醇或者甲醇的重量百分比浓度为10-90%， 优选浓度50-70%。所述的竹节参的水提物可由如下方法制备得到取竹节参药材，加竹节参6-12倍 量的水煎煮1-4次，煎煮时间分别为1-3小时，过滤，合并滤液，浓缩，即得。所述的竹节参的醇提物是由如下方法制备得到的取竹节参药材，加入竹节参 6-12倍量的乙醇或甲醇回流提取1-3小时，滤过，得滤液；药渣再用6-12倍量的乙醇或甲 醇回流提取1-3次，每次1-3小时，滤过，合并滤液，浓缩，即得。所述的竹节参或竹节参提取物，特别是竹节参皂苷ν或竹节参总皂苷作为活性成 分可与药学上可接受的载体制备成组合物。上述药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。给药途径 可以是口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案，该组合物可以是口服制剂或注射 用制剂，其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、片剂、滴丸等。所用辅料包 括淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙 二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫 酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料，制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术， 本发明对此不作限定，故在此不予详述。上述组合物口服给药的剂量为2-3次/天，每次折合成竹节参皂苷ν或竹节参总 皂苷的剂量分别为0. 125 0. 25g/次和0. 25 0. 50g/次。竹节参是常用的中草药，有长期的中医用药经验，该药使用安全性高，无明显毒性 作用记载。本发明所述的竹节参皂苷ν或竹节参总皂苷是从天然的中药竹节参中提取得到 的，药效实验表明竹节参或竹节参提取物，特别是竹节参皂苷ν或竹节参总皂苷具有降低 模型动物血清尿酸含量的极显著性作用，同时还具有修复高尿酸血症引起的肾损伤的极显 著性作用。与现有技术比较本发明的有益效果目前的抗痛风药物主要为嘌呤氧化酶抑制 剂，本研究首次表明竹节参或其提取物，特别是竹节参总皂苷、竹节参皂苷V、竹节参水提 液、竹节参醇提液、竹节参原药材有降尿酸抗痛风的药理活性和修复高尿酸性肾损伤的活 性。研究表明竹节参或其提取物的降尿酸作用主要是通过修复高尿酸性肾损伤、增加尿酸 的肾排量而实现的，因此，竹节参或其提取物具有开发成抗痛风和/或修复高尿酸性肾损 伤的药物的前景。竹节参药材粉末高剂量溶液的配制将竹节参粉碎成100目粉末，用0. 5%的 CMC-Na溶液混悬，制备成0. Ig生药/ml的混悬液。给药剂量为2g生药/kg。竹节参药材粉末低剂量溶液的配制将竹节参粉碎成100目粉末，用0. 5%的 CMC-Na溶液混悬，制备成0. 035g生药/ml的混悬液。给药剂量为0. 7g生药/kg。竹节参甲醇提取液高剂量溶液的配制按照“竹节参乙醇提取液高剂量溶液的配 制”方法提取和回收甲醇(即将该方法中乙醇替换为甲醇)，配制成浓度为0. Ig生药/ml 的水溶液，给药剂量为2g生药/kg。竹节参甲醇提取液低剂量溶液的配制按照“竹节参乙醇提取液高剂量溶液的配 制”方法提取和回收乙醇(即将该方法中乙醇替换为甲醇)，浓缩至0. 035g生药/ml，给药 剂量为0. 7g生药/kg。造模剂的配制精密称取氧嗪酸钾0. 3012克、黄嘌呤0. 1753克，溶解在40毫升 0. 5%的CMC-Na的溶液中。氧嗪酸钾的给药剂量为150. 6mg/kg，给药浓度为7. 53mg/ml ；黄 嘌呤的给药剂量为87. 7mg/kg，给药浓度为4. 383mg/ml。0. 5%的CMC-Na溶液配制称取CMC-Na 2. 5克加入500毫升纯净水中加热超声使其溶解，静置过夜。生理盐水的配制称取4. 5041克氯化钠，溶于500毫升纯净水中即得。造模剂的配制(维生素B4片(腺嘌呤)与盐酸乙胺丁醇片混合溶液)称取腺嘌 呤1. 040克和盐酸乙胺丁醇1. 500克，将其超声溶解在60毫升的CMC-Na溶液中即得，腺嘌 呤、盐酸乙胺丁醇的浓度分别为17. 33mg/ml、25mg/ml。造模的灌胃体积0. 2ml/10g，腺嘌呤 给药剂量为346mg/kg，盐酸乙胺丁醇给药剂量为500mg/kg。3.高尿酸小鼠模型抗痛风实验研究1)实验方法取昆明种雄性小鼠150只，体重18_22g，随机分为15组，每组10只。 分别为空白组、模型空白组、阳性对照药痛风定胶囊组、竹节参总皂苷高剂量组、竹节参总 皂苷低剂量组、竹节参皂苷ν高剂量组、竹节参皂苷ν低剂量组、竹节参水提液高剂量组、竹 节参水提液低剂量组、竹节参乙醇提取液高剂量组、竹节参乙醇提取液低剂量组、竹节参药 材粉末高剂量组、竹节参药材粉末低剂量组、竹节参甲醇提取液高剂量组、竹节参甲醇提取 液低剂量组。对各组小鼠进行灌胃给药，给药3天。空白组和模型空白组分别给予等体积 (0. 2ml/10g) 0. 5%的CMC-Na溶液；其余各给药组分别按0. 2ml/10g体积给予相应药物，它 们的给药剂量分别为痛风定组0. 624g痛风定/kg、竹节参总皂苷高剂量组0. 3g竹节参总 皂苷/kg、竹节参总皂苷低剂量组0. Ig竹节参总皂苷/kg、竹节参皂苷ν高剂量组0. 15g竹 节参皂苷v/kg、竹节参皂苷ν低剂量组0. 05g竹节参皂苷v/kg、竹节参水提液高剂量组2g 生药/kg、竹节参水提液低剂量组0. 7g生药/kg、竹节参乙醇提取液高剂量组2g生药/kg、 竹节参乙醇提取液低剂量组0. 7g生药/kg、竹节参药材粉末高剂量组2g生药/kg、竹节参 药材粉末低剂量组0. 7g生药/kg、竹节参甲醇提取液高剂量组2g生药/kg、竹节参甲醇提 取液低剂量组0. 7g生药/kg。于末次给药前1小时，除空白对照组外，其他各组均腹腔注射 0. 2ml/10g黄嘌呤(浓度为4. 383mg/ml)和氧嗪酸钾(浓度为7. 53mg/ml)造模，造模的剂 量为黄嘌呤为87. 7mg/kg、氧嗪酸钾为150. 6mg/kg。造模后将各组小鼠放入相应代谢笼内 收集造模后1小时内的尿液待测定尿酸；在造模1小时后对各组小鼠进行灌胃给药；给药 后收集1小时内的尿液待测定尿酸；给药1小时后，对各组小鼠进行摘眼球取血及解剖摘取肝脏组织，待测血清中尿酸的含量和肝组织液中黄嘌呤氧化酶的活性。采用黄嘌呤氧化酶 试剂盒及尿酸试剂盒分别测定小鼠肝脏中黄嘌呤氧化酶的活性及血清和尿液中尿酸的含量。(1)待测样品处理及测定血液样品的处理对各组小鼠摘眼球取血，分离血清(4000rp/每分钟，离心15分 钟)，将分离得到的血清置于-20°C冰箱保存，待测血清尿酸(UA)。肝组织的处理取各小鼠的肝组织，立即用电子天平上称取0. 05g左右，置于2ml 的离心管中，加9倍量的生理盐水，用勻浆机lOOOOr/min研磨勻浆1分钟，将各份勻浆液进 行离心(4000r/min)，离心10分钟，吸取上清液40微升待测黄嘌呤氧化酶的活性及其蛋白总量。尿液的处理每一实验小组有10只动物，分别将每2只同时放在同一个代谢笼中 收集尿液，每一实验小组各得5份实验尿液，将各份小鼠尿液分别加9倍量生理盐水稀释， 得各份的尿液样品待测液。(2)各种实验指标的测定按照尿酸测定试剂盒、黄嘌呤氧化酶测定试剂盒、考马斯亮兰蛋白测定试剂盒的 方法进行测定。以下面计算公式计算尿酸含量(umol/L)、肝组织黄嘌呤氧化酶(XOD)活性 (U/gprot)和蛋白含量(g/L)。尿酸含量(umol/L)=标准管尿酸含量X测定管吸光度值/标准管吸光度值。标 准管尿酸含量297. 4umol/L·XOD活性(U/gprot) =NX (Α样-A空)/CXTXCprotX0. 0126。N 反应体系稀释倍 数(23. 7 ;A样样品测定管的吸光度值；A空空白测定管的吸光度值；C:比色光径(Icm)； Cprot 待测样本中蛋白含量(gprot/L) ；T 反应时间(20分钟)；XOD 黄嘌呤氧化酶。蛋白含量(g/L)=标准管蛋白浓度X (测定管OD值-空白管OD值)/ (标准管OD 值-空白管OD值)。标准管的蛋白浓度为0.563g/L。(3)实验结果与分析所得数据用SPSS11. 5统计分析软件进行统计分析，结果详见表1_3。表1 各组药物对小鼠血清尿酸值的作用结果(η = 10)


本发明公开了一种竹节参或竹节参提取物作为活性成分在制备抗痛风和修复高尿酸性肾损伤的药物中的应用。研究表明，竹节参或其提取物的降尿酸作用主要是通过修复高尿酸性肾损伤、增加尿酸的肾排量而实现的。