专利名称：一种五加茸血口服液的质量控制方法五加茸血口服液处方由刺五加、鹿茸血、鹿茸、维生素Bl与几种辅料组成。具有健脑增髓，补血壮腰，安眠强胃，补肾强身，提神回春之功。用于体虚贫血，阳痿肾寒，神经衰弱等症。主要原料刺五加刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanax Senticosus (Puper. etMaxim)Harms的干燥根及根茎，主要分布在我国的黑龙江、吉林、河北、山西、宁夏、陕西及四川等地，朝鲜、俄罗斯远东地区及日本北海道等地亦有分布和种植。刺五加具有益气健脾、补肾安神之功效，主要用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦等病症。 此外，国内外对刺五加的药理作用研究还表明，刺五加可增强机体非特异性防御能力，除具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗疲劳等作用外，还可治疗心脑血管疾病、糖尿病、神经衰弱等症。刺五加的根和茎部分含有多种活性化学成分，到目前为止，含有多种皂甙类，生物碱类化合物，分离出的重要成分为苷类化合物。紫丁香苷为谷留醇葡萄糖苷，是一种较为典型的苷类化合物。主要成分之一是异嗪皮啶，其在药材中含量亦相对较易测定。本发明以五加茸血中的异嗪皮啶为指标，采用高效液相色谱法，测定口服液中的含量，同时增加对紫丁香苷的含量测定，该质量控制方法简便、准确、精密度高、重现性好，为控制五加茸血口服液质量标准提供了可靠的依据。
本发明目的公开五加茸血口服液的质量控制方法，包括对异嗪皮啶和/或紫丁香苷的含量测定方法。异嗪皮啶的含量测定方法如下对照品溶液的制备精密称取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇制成每Iml中含 5-10 μ g的溶液，即得；供试品溶液的制备精密量取口服液10ml，加水10-30ml，超声处理 10-30分钟，加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇勻，用微孔滤膜滤过，既得；分别精密吸取对照品和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。紫丁香苷的含量测定方法如下对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量加水制成每Iml含10-20 μ g的溶液， 既得；供试品溶液的制备精密量取口服液10ml，加水10-30ml，超声处理10-30分钟，加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，取水层滤过，取续滤液，既得；分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明优选技术方案如下异嗪皮啶的含量测定方法对照品溶液的制备精密称取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇制成每Iml中含10 μ g 的溶液，即得；供试品溶液的制备精密量取口服液10ml，加水10-30ml，超声处理10-30 分钟，加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解， 并转移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇勻，用微孔滤膜0，45 μ m滤过，既得；色谱柱C18 柱，流动相乙腈0. 的磷酸溶液，体积比为20-30 70-80，流速:1.0ml min，检测波长 344nm ；柱温室温；分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。紫丁香苷的含量测定方法对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量加水制成每Iml含20μ g的溶液，既得；供试品溶液的制备精密量取口服液10ml，加水10ml，超声处理10分钟，加氯仿萃取 1-4次，每次加氯仿10-20ml，取水层滤过，取续滤液，既得；色谱柱C18柱，流动相乙腈 水，体积比为5-10 90-95，流速1.0ml min，检测波长265η m ；柱温30-40°C ；理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于4000 ；分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明对嗪皮啶和/或紫丁香苷的含量测定方法，不仅能够测定五加茸血口服液剂型，同时能够应用在五加茸血品种的其它剂型，例如片剂、颗粒剂、胶囊剂、注射剂等临床应用的剂型。本发明的异嗪皮啶含量测定方法学考察，利用UV-2401PC型紫外分光光度仪，对异嗪皮啶对照品，在200 400nm波长下进行紫外扫描，结果在342nm波长处有最大吸收， 因此选择342nm为检测波长。用4种流动相进行试验，结果表明流动相为乙腈-0. 1 %磷酸溶液(75 25)时，效果最佳，柱压低，峰型尖锐，阴性无干扰。精密吸取样品(061201)供试液10 μ 1，重复进样5次，测定其峰面积，异嗪皮啶峰面积值的RSD = 0. 99%,试验结果表明，精密度良好。稳定性试验结果表明，异嗪皮啶含量测定的样品供试液在内稳定性良好。对同一批样品(061201)制备样品供试液，测得峰面积值并计算含量，其异嗪皮啶峰面积值的RSD = 0. 84% ；异嗪皮啶含量的RSD = 0. 85%，试验结果表明含量测定方法重现性良好。空白试验结果表明在被测成分异秦皮啶的保留时间处无干扰。本发明的紫丁香苷含量测定方法学考察，利用UV-2401PC型紫外分光光度仪，对紫丁香苷对照品，在200 400nm波长下进行紫外扫描，结果在波长处有最大吸收， 因此选择342nm为检测波长。用4种流动相进行试验，结果表明流动相为乙腈-水(9 91) 时，效果最佳，柱压低，峰型尖锐，阴性无干扰。精密吸取样品供试液10 μ 1，重复进样5次， 测定其峰面积，紫丁香苷峰面积值的RSD = 0. 96%，试验结果表明，精密度良好。稳定性试验结果表明，紫丁香苷含量测定的样品供试液在他内稳定性良好。对同一批样品制备样品供试液，测得峰面积值并计算含量，其紫丁香苷峰面积值的RSD = 0. 80% ；紫丁香苷含量的 RSD = 0. 77%，试验结果表明含量测定方法重现性良好。空白试验结果表明在被测成分紫丁香苷的保留时间处无干扰。实验例1 异嗪皮啶的线性范围的考察仪器与试剂日本岛津LC-lOAvp系列高效液相色谱仪，SPD-lOAvp紫外检测仪； CLASS-VP数据处理机；对照品异嗪皮啶(批号0837-200203 ；供含量测定用，由中国药品生物制品检定所提供)。甲醇、乙腈为色谱纯，水为注射用水，基耸试剂均为分析纯。五加茸血口服液由吉林长春新安药业有限公司提供色谱条件色谱柱KromasilC18柱(150mmx4. 6mmID，5 μ m)；流动相乙腈-0. 1% 磷酸溶液(20 80)；检测波长:342nm ；柱温:30°C ；流速1. 0ml. min ；灵敏度0. 08AUFS。精密称取异嗪皮啶对照品适量约10mg，置IOOml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释制刻度，摇勻，再精密吸取Iml置IOml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇勻，配成每Iml含 IOyg的溶液，精密吸取异嗪皮啶(9. 376 μ g. ml)对照品溶液2、4、8、12、16、20 μ 1注样。记录色谱图，测定其峰面积，结果见表1。并以峰面积值(A)对进样量(C)进行回归，得标准曲线方程。以峰面积值(A)对进样量(C)作图，得一直线，A = 3. 31071e-007C, r = 0. 9997。 结果表明，在18. 752 187. 52X 10_3 μ g范围内，异嗪皮啶峰面积值与进样量有良好的线性关系。实验例2 异嗪皮啶的回收率试验精密量取已知含量的样品(061203) 25ml，分别加入异嗪皮啶52 μ g. ml)对照品溶液0. 85ml, 1. 03ml, 1. 20ml按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，计算回收率，试验结果表明，回收率在95% 100%之间，加样回收良好。具体实施例如下实施例1异嗪皮啶含量测定对照品溶液的制备精密称取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇制成每Iml中含10 μ g 的溶液，即得。供试品溶液的制备精密量取供试品10ml，加水10ml，超声处理10-30分钟， 加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇勻，用微孔滤膜0，45 μ m滤过，既得；色谱柱C18柱，流动相乙腈0. 的磷酸溶液，体积比为20-30 70-80，流速:1. Oml min，检测波长344nm ； 柱温室温；分别精密吸取对照品和供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。测定法分别精密吸取异嗪皮啶(9. 376 μ g. ml)对照品溶液与10批样品供试液各 10 μ 1，按上述色谱条件测定。实施例2 异嗪皮啶的含量测定对照品溶液的制备精密称取异嗪皮啶对照品适量，加甲醇制成每Iml中含10 μ g 的溶液，即得；供试品溶液的制备精密量取口服液10ml，加水10ml，超声处理10分钟， 加氯仿萃取1-4次，每次加氯仿10-20ml，合并氯仿提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至25ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇勻，用微孔滤膜0，45 μ m滤过，既得；色谱柱C18柱6謹，5μπι)，流动相乙腈0. 的磷酸溶液，体积比为25 75，流速1.0ml min，检测波长344nm ；柱温室温；分别精密吸取对照品和供试品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。实施例3 紫丁香苷的含量测定对照品溶液的制备取紫丁香苷对照品适量加水制成每Iml含20μ g的溶液，既得；供试品溶液的制备精密量取口服液10ml，加水10ml，超声处理10分钟，加氯仿萃取 1-4次，每次加氯仿10_20ml，取水层滤过，取续滤液，既得；色谱柱C18柱Q50mmX4. 6mm, 5μπι)，流动相乙腈水，体积比为9 91，流速1.Oml min，检测波长265nm ；柱温 400C ；理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于4000 ；分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明公开五加茸血口服液的质量控制方法，包括对异嗪皮啶和/或紫丁香苷的含量测定方法。五加茸血口服液处方由刺五加、鹿茸血、鹿茸、维生素B1与几种辅料组成。主要原料刺五加的根和茎部分含有多种活性化学成分，到目前为止，含有多种皂甙类，生物碱类化合物，分离出的重要成分为苷类化合物。主要成分紫丁香苷为β-谷甾醇葡萄糖苷，是一种较为典型的苷类化合物，另一主要成分是异嗪皮啶，其在药材中含量亦相对较易测定。本发明以五加茸血中的异嗪皮啶为含量测定指标之一，采用高效液相色谱法，测定口服液中的含量，同时增加对紫丁香苷的含量测定，该质量控制方法简便、准确、精密度高、重现性好，为控制五加茸血口服液质量标准提供了可靠的依据。