专利名称：一种用鹰嘴豆发酵生产益生肽的方法鹰嘴豆(Cicer arietinum,Chickpea)维吾尔族名为奴乎特、诺胡提,别名鸡豆、脑豆子和桃豆等。属野豌豆族，是豆科植物中的稀有品种，因其外形独特，类似鹰嘴而被称为鹰嘴豆，是维吾尔医常用的中药材。鹰嘴豆起源于亚洲西部和近东地区，在世界豆类作物中居第3位，是世界上栽培面积较大的食用豆类作物之一。鹰嘴豆富含人体易消化和吸收的纯天然植物蛋白质、18种氨基酸(含人体必须但自身不能合成的全部8种氨基酸)、粗脂肪、粗膳食纤维、多糖、亚麻酸、亚油酸、钙、磷、锌、铁、镁、磷、硒等矿物质和维生素C，B2等营养素。与大豆相比，其蛋白质含量相近，为35. 71%;脂类含量较低；粗纤维含量是大豆的13. 3倍。可用于日常食品及营养强化剂，有利于强身健体、滋补营养、增强人体免疫力，对儿童智力发育、骨骼生长以及中老年人强身健体都大有裨益；对糖尿病、高血脂、高血压、心脑血管疾病、肺病、消化不良、皮肤疾病等均有良好的食疗作用；是高血脂、高血压、糖尿病患者以及儿童和中老年人必备食用的高营养、低淀粉、纯天然的特殊营养佳品，因此鹰嘴豆具有极高的食用及药用价值。植物蛋白小肽是从豆类中提取的一种纯天然营养物质，也是人体细胞的重要组成部分。主要由2-10个氨基酸组成，分子量在3000Da以下。对生命活动发挥着极其重要的作用，在抗高血压、抗胆固醇、抗血栓形成、消除人体疲劳、保护肝脏、防止动脉硬化、增强人体体能和肌肉力量、增强人体免疫力等方面，以及对糖尿病均有显著的医疗保健作用，是老幼皆宜的功能性保健食品。主要有以下特点1、降血脂和胆固醇；2、降血压；3、低过敏原性；4、易吸收性；5、促进矿物质吸收；6、促进脂肪代谢；7、调节免疫功能，促进机体免疫调节；8、抑制抗血栓形成；9增强肌肉和恢复疲劳；10、抗衰老。目前生产植物蛋白小肽多以大豆为主要原料，且多采用生物酶解或单一菌种发酵技术。本发明以鹰嘴豆为原料代替大豆进行发酵，选用枯草芽孢杆菌以及乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按一定比例组成的复合菌液分步发酵，比以大豆为原料的传统酶解或单一菌种发酵方法生产蛋白小肽的成本低、产率高、口感好、功效显著，不但具有天然发酵的香味，保留了鹰嘴豆比大豆营养更丰富和天然抗氧化的优势，还富含益生菌代谢产物。经果蝇生存试验证明，该益生肽可明显延长果蝇寿命，平均提高I倍以上；通过大鼠游泳试验证明，该益生肽可明显延长大鼠游泳时间。
本发明的目的在于提供一种用鹰嘴豆发酵生产“国力元素”一一益生肽的方法，包括以鹰嘴豆和生产纳豆激酶后剩下的鹰嘴豆废渣为原料发酵生产益生肽的生产工艺等。用鹰嘴豆代替传统大豆发酵生产益生肽，选用枯草芽孢杆菌以及乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按一定比例组成的复合菌液分步发酵，比以大豆为原料的传统酶解或单一菌种发酵方法生产蛋白小肽的成本低、产率高、口感好、功效显著，不但具有天然发酵的香味，保留了鹰嘴豆比大豆营养更丰富和天然抗氧化的优势，还富含益生菌代谢产物。本发明的技术方案为(I)选用产于新疆木鱼县的鹰嘴豆(Cicer arietinum, Chickpea),包括卡布里和迪西两个品种。(2)浸泡营养浸泡液的成分为0. I 0. 2g/mL麦芽糖和0. I 0. 2g/mL半乳糖，比例为鹰嘴豆营养浸泡液=I I. 0 2. 0，pH值为6. 5 7. 5。浸泡温度为30 45°C，浸泡时间为12 24h，以豆子吸水充分膨胀、外皮脱落、质软为标准。(3)粉碎粉碎机粉碎至40 80目。(4)灭菌高温蒸汽灭菌。(5)接种将枯草芽孢杆菌按比例接入鹰嘴豆和营养液中低温发酵。(6)发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量40% 60%，起始pH为6. 0 7. 0，接菌比例为5% 20%，培养温度为10 20°C，发酵时间为24 48h。(7)灭菌发酵完成后高温蒸汽灭菌。(8) 二次接种所接种的二次发酵液是由乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按一定比例组成的复合菌液，比例范围为I 5 I 10 I 20。(9) 二次发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量20% 30%，起始pH为6. 5 7. 5，接菌比例为10% 20%，培养温度为35 42°C，发酵时间为18 36h。(10)分离纯化发酵物先板框过滤，再用3 5倍的生理盐水反复浸提3次，板框过滤，合并滤液后再用纳滤技术进行精制，从而使益生肽的分子量85%集中在800-1500Da范围内。(11)干燥采用喷雾干燥方法或低温负压干燥方法。(12)产品真空密封包装，避光置于阴凉、干燥通风处。本发明的益处I、由于采用鹰嘴豆来生产“国力元素”益生肽，保留了鹰嘴豆比大豆营养更丰富和天然抗氧化的优势，富含益生菌代谢产物，增加了益生肽长寿、抗衰老的内涵。2、采用枯草芽孢杆菌和复合菌液进行分步发酵，可以产生更多的小分子益生肽，降低了生产成本，提高了产率和功效。3、使产品具有天然发酵的香味和良好的适口性，并祛除了蛋白原料中的抗营养因子。4、该工艺不仅以鹰嘴豆为原料生产益生肽，还适用于以发酵生产纳豆激酶后剩下的鹰嘴豆废渣为原料生产益生肽，从而使生产链更加完整，进一步降低了生产成本。5、该益生肽可明显延长果蝇寿命，延长大鼠游泳时间，增强免疫力。2.浸泡营养浸泡液的成分为0. 2g/mL麦芽糖和0. 2g/mL半乳糖，比例为鹰嘴豆营养浸泡液=I 2，pH值为7. 5。浸泡温度为40°C，浸泡时间为24h，以豆子吸水充分膨胀、外皮脱落、质软为标准。3.粉碎粉碎机粉碎成80目。 4.灭菌高温蒸汽灭菌。5.接种将枯草芽孢杆菌按比例接入鹰嘴豆和营养液中低温发酵。6.发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量60%，起始pH为7.0，接菌比例为18%，培养温度为20°C，发酵时间为48h。7.灭菌发酵完成后高温蒸汽灭菌。8. 二次接种所接种的二次发酵液是由乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按2:1:5比例组成的复合菌液。9. 二次发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量30%，起始pH为7. 5，接菌比例为20%，培养温度为42 °C，发酵时间为36h。10.分离纯化发酵物先板框过滤，再用3 5倍的生理盐水反复浸提3次，板框过滤，合并滤液后再用纳滤技术进行精制，从而使益生肽的分子量85%集中在800-1500Da范围内。11.干燥采用喷雾干燥方法或低温负压干燥方法。12.产品真空密封包装，避光置于阴凉、干燥通风处。实施案例4I.选用产于新疆木垒县的鹰嘴豆迪西品种。2.浸泡营养浸泡液的成分为0. lg/mL麦芽糖和0. lg/mL半乳糖，比例为鹰嘴豆营养浸泡液=I 1，pH值为6. 5。浸泡温度为30°C，浸泡时间为24h，以豆子吸水充分膨胀、外皮脱落、质软为标准。3.粉碎粉碎机粉碎成40目。4.灭菌高温蒸汽灭菌。5.接种将枯草芽孢杆菌按比例接入鹰嘴豆和营养液中低温发酵。6.发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量40%，起始pH为6.0，接菌比例为10%，培养温度为15°C，发酵时间为24h。7.灭菌发酵完成后高温蒸汽灭菌。8. 二次接种所接种的二次发酵液是由乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按1:1:2比例组成的复合菌液。9. 二次发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量20%，起始pH为6. 5，接菌比例为10%，培养温度为35°C，发酵时间为18h。10.分离纯化发酵物先板框过滤，再用3 5倍的生理盐水反复浸提3次，板框过滤，合并滤液后再用纳滤技术进行精制，从而使益生肽的分子量85%集中在800-1500Da范围内。11.干燥采用喷雾干燥方法或低温负压干燥方法。12.产品真空密封包装，避光置于阴凉、干燥通风处。实施案例5I.选用产于新疆木垒县的鹰嘴豆迪西品种。2.浸泡营养浸泡液的成分为0. 15g/mL麦芽糖和0. 15g/mL半乳糖，比例为鹰嘴豆营养浸泡液=I 1.5, pH值为7. O。浸泡温度为35°C，浸泡时间为24h，以豆子吸水充分膨胀、外皮脱落、质软为标准。3.粉碎粉碎机粉碎成60目。4.灭菌高温蒸汽灭菌。5.接种将枯草芽孢杆菌按比例接入鹰嘴豆和营养液中低温发酵。 6.发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量50%，起始pH为6. 5，接菌比例为15%，培养温度为17°C，发酵时间为36h。7.灭菌发酵完成后高温蒸汽灭菌。8. 二次接种所接种的二次发酵液是由乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按1:2:5比例组成的复合菌液。9. 二次发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量25%，起始pH为7.0，接菌比例为15%，培养温度为40°C，发酵时间为24h。10.分离纯化发酵物先板框过滤，再用3 5倍的生理盐水反复浸提3次，板框过滤，合并滤液后再用纳滤技术进行精制，从而使益生肽的分子量85%集中在800-1500Da范围内。11.干燥采用喷雾干燥方法或低温负压干燥方法。12.产品真空密封包装，避光置于阴凉、干燥通风处。实施案例6I.选用产于新疆木垒县的鹰嘴豆迪西品种。2.浸泡营养浸泡液的成分为0. 2g/mL麦芽糖和0. 2g/mL半乳糖，比例为鹰嘴豆营养浸泡液=I 2，pH值为7. 5。浸泡温度为40°C，浸泡时间为24h，以豆子吸水充分膨胀、外皮脱落、质软为标准。3.粉碎粉碎机粉碎成80目。4.灭菌高温蒸汽灭菌。5.接种将枯草芽孢杆菌按比例接入鹰嘴豆和营养液中低温发酵。6.发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量60%，起始pH为7.0，接菌比例为18%，培养温度为20°C，发酵时间为48h。7.灭菌发酵完成后高温蒸汽灭菌。8. 二次接种所接种的二次发酵液是由乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按2:1:5比例组成的复合菌液。9. 二次发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量30%，起始pH为7. 5，接菌比例为20%，培养温度为42°C，发酵时间为36h。10.分离纯化发酵物先板框过滤，再用3 5倍的生理盐水反复浸提3次，板框过滤，合并滤液后再用纳滤技术进行精制，从而使益生肽的分子量85%集中在800-1500Da范围内。11.干燥采用喷雾干燥方法或低温负压干燥方法。12.产品真空密封包装，避光置于阴凉、干燥通风处。
实施案例7I.选用生产纳豆激酶后剩下的鹰嘴豆(产于新疆木垒县的鹰嘴豆迪西品种)废渣。2.灭菌高温蒸汽灭菌。3.接种将枯草芽孢杆菌按比例接入鹰嘴豆和营养液中低温发酵。4.发酵发酵的培养条 件为物料(鹰嘴豆)起始含量40%，起始pH为7.0，接菌比例为15%，培养温度为17°C，发酵时间为36h。5.灭菌发酵完成后高温蒸汽灭菌。6. 二次接种所接种的二次发酵液是由乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按2:1:5比例组成的复合菌液。7. 二次发酵发酵的培养条件为物料(鹰嘴豆)起始含量20%，起始pH为7.0，接菌比例为20%，培养温度为40°C，发酵时间为36h。8.分离纯化发酵物先板框过滤，再用3 5倍的生理盐水反复浸提3次，板框过滤，合并滤液后再用纳滤技术进行精制，从而使益生肽的分子量85%集中在800-1500Da范围内。9.干燥采用喷雾干燥方法或低温负压干燥方法。10.产品真空密封包装，避光置于阴凉、干燥通风处。


一种用鹰嘴豆发酵生产益生肽的方法，属生物领域。本发明公开了一种用鹰嘴豆发酵生产益生肽的方法。本发明所选用的鹰嘴豆是产于新疆木垒县的卡布里和迪西两个品种，所选用的发酵过程是先将枯草芽孢杆菌接入鹰嘴豆和营养液中低温(10～20℃)发酵，灭菌后再接入由乳酸菌、酵母菌和纳豆芽孢杆菌按一定比例组成的复合菌液，生产益生肽。包括浸泡、粉碎、灭菌、接种、发酵、灭菌、二次接种、二次发酵、浸提、分离纯化和干燥等工艺，所生产的益生肽分子量85％集中在800-1500Da范围内。选用鹰嘴豆发酵生产益生肽，比以大豆为原料的传统酶解或单一菌种发酵方法生产蛋白小肽的成本低、产率高、口感好、功效显著，不但具有天然发酵的香味，保留了鹰嘴豆比大豆营养更丰富和天然抗氧化的优势，还富含益生菌代谢产物，具有增强免疫、抗疲劳和延缓衰老的功效。