一种粗制木醋液中抗氧化组分的提取、分离方法[0002]木材剩余物具有广泛的来源，从森林采伐剩余物、原木造材剩余物到木材加工剩余物，包含各种形式的废弃木质制品和木质纤维制品。据统计，各种废弃物可以占到原木材的50%。生产木炭是深度利用木材剩余物的有效途径，可获得具有较高附加值的木炭，并可收集木醋液，使木材剩余物得到最完全的利用。[0003]作为一种天然林产品的副产物，木醋液起源于木材的干馏工业，是木材中的纤维素、半纤维素和木质素热分解的产物。从广义上讲，木醋液是指把树木炭化，将其能量转换成气体再自然冷却成浓缩液体。木醋液的组分和性质也随着不同的干馏原料和精制方法的同而异。其主要成分涉及多种类的化合物，大部分木醋液中含有酸、酯、酚、醇、呋喃类以及羟基类等上百种有机成分，是一种组份复杂、功能多样和相对稳定的系统物质。[0004]目前，从天然植物和海洋资源中提取、分离有效成分作为各种用途的产品开发已经成为研究热点。木醋液做作为一种天然植物资源和天然化工原料，含有数量可观的有机物，其功能逐渐被人们所挖掘，可广泛的应用于各行各业。在农业上，木醋液能减农药、减化学肥料用量，杀菌驱虫、保护生态环境。在稻田中施用木醋液，由于木醋液能提高水和土壤微生物的活性，可防治立枯病。在畜牧业，木醋液能消除养猪养鸡场的臭味，作为饲料添加剂能改善肉质。在医药上，木醋液对脚气病、皮肤病、肝脏病和糖尿病有效。在轻工业中，由于木醋液具有防腐、抗氧化等功效，用于化装品、沐浴液和食品饮料等的添加剂。(Doranff.L., 1932 ；宫本雄一，1962 ;Rodolfo，et al., 1975 ； Ohta, et al.，1994 ;朴哲等，2003 ;马建义，2013)。
[0005]本发明的目的在于提供一种粗制木醋液中抗氧化组分的提取、分离方法。该方法以树种的枝桠条、边角料等采伐剩余物为原料，经在木炭窑焖烧产生的烟气使其自然气冷凝结成为液体，陈化后为粗制木醋液(颜色黑褐色)，然后将定量的粗制木醋液用二氯甲烷进行萃取，得到浸膏，再筛选出最佳的抗氧化活性组分。减少了粗木醋液常规的精制过程，二氯甲烷萃取率高，提取工艺简便。[0006]本发明可通过以下技术方案实现: 一种粗制木醋液中抗氧化成分的提取、分离方法，该方法以粗制木醋液为原料，选用二氯甲烷作为萃取剂，其提取、分离过程包括:量取100~200 ml粗制木醋液，与二氯甲烷按1:1~1:5体积比的比例萃取I~3次，将萃取液干燥，得到浸膏，称取I~3 g浸膏，用乙醇95%，体积百分比， 进行溶解；采用湿法装柱法进行大孔树脂上样，选取甲醇-水体系10%~100 % ;体积比，作为洗脱液进行洗脱，将洗脱下来的样液点硅胶板、暗箱式紫外分析仪进行检测分析，得到大孔树脂不同流份样品；同时，配置浓度维生素E和维生素C0.2~10.0μ g/ml及浓度粗制木醋液、二氯甲烷萃取液、大孔树脂流分样品，均为0.5~30.0 μ g/ml和0.1~0.5 mmol的DPPH (1,1- 二苯基_2_三硝基苯肼)溶液；移取50~100 μ I的DPPH溶液和50-100 μ I浓度的粗制木醋液、二氯甲烷萃取液、大孔树脂流分样品，分别置于96孔板中，避光反应20~40 min，在500~520 nm下测其吸光度值，对上述样品的抗氧化活性进行跟踪；计算相应流分样品的清除率和IC5tl值，半抑制浓度，筛选得到抗氧化活性最佳的活性组分。
[0007]所述的一种粗制木醋液中抗氧化成分的提取、分离方法，该方法大孔树脂流2的IC50值低于8.0 μ g/ml，低于维生素E和维生素C的IC5tl值。
[0008]本发明的优点与效果是:
1.本发明以粗制木醋液为原料，可充分利用木醋液资源。同时，选用二氯甲烷作为萃取剂，萃取液颜色清澈，金黄色，减少了粗木醋液常规的精制过程；二氯甲烷萃取率高，提取工艺简便。[0009]2.本发明提取、分离过程中采用活性跟踪手段，对粗制木醋液、二氯甲烷萃取液和经大孔树脂分离得到的不同流分样品进行实时监测，活性筛选和分离工艺简便，大孔树脂流分2分离率高。而且该馏分清除DPPH自由基能力比较强，抗氧化活性高于两个对照品，具有较好的抗氧化活性。



[0010]图1为粗木醋液、二氯甲烷萃取液、大孔树脂流分2以及两种抗氧化活性对照品(VE，VC)的活性测试图。

[0011]实施例1:
本发明一种粗制木醋液中抗氧化组分的提取、分离方法。主要通过以下步骤实现:量取约100~200 ml粗制木醋液，与二氯甲烷按1:1~1:5 (体积比)的比例萃取I~3次，将萃取液干燥，得到浸膏，称取约I~3 g浸膏，用乙醇(95%，体积百分比)进行溶解；分别采用湿法装柱法进行大孔树脂上样，选取甲醇-水体系(10%~100 %;体积比)作为洗脱液进行洗脱，将洗脱下来的样液点硅胶板、暗箱式紫外分析仪进行检测分析，得到大孔树脂不同流份分样品。同时，采用活性追踪手段，即配置不同浓度的维生素E和维生素C (0.2~10.0 μ g/ml)及不同浓度粗制木醋液、二氯甲烷萃取液、大孔树脂流分样品(均为0.5~
30.0 μ g/ml)和0.1~0.5 mmol的DPPH( I，1-二苯基-2-三硝基苯肼)溶液。移取50~100μ I的DPPH溶液和50-100 μ I不同浓度的粗制木醋液、二氯甲烷萃取液、大孔树脂流分样品，分别置于96孔板中，避光反应20~40 min，在50(T520 nm下测其吸光度值，对上述样品的抗氧化活性进行跟踪。计算相应流分样品的清除率和IC5tl值，筛选得到抗氧化活性最佳的活性组分。
[0012]本发明以粗制木醋液为原料，选用二氯甲烷作为萃取剂，萃取液颜色清澈，金黄色，减少了粗木醋液常规的精制过程；每1000 mL粗木醋液蒸干可得到约2(T30g粗木醋液干膏，经萃取干燥可得到10~15g二氯甲烷萃取物。二氯甲烷萃取率大于50 %，提取工艺简便。本方法的提取、分离过程中采用活性跟踪手段，对粗制木醋液、二氯甲烷萃取液和经大孔树脂分离得到的不同流分样品进行实时监测，活性筛选和分离工艺简便。每1000 mL粗木醋液经蒸干，萃取干燥，过大孔树脂柱得到流分2约为0.5^1.0 g，大孔树脂流分2分离率大于20 %。而且该流分清 除DPPH自由基能力比较强，由附图1的清除率，经计算大孔树脂流2的IC5tl值低于8.0 μ g/ml，低于维生素E和维生素C的IC5tl值，说明其具有较好的抗氧化活性。