专利名称：斑蝥素囊泡及其制剂及制备方法现代药理研究，人类用斑蝥治疗疾病已有2000多年的历史，斑蝥为芫青科昆虫南方大斑蝥或黄黑小斑蝥的干燥体。明代大医学家李时珍在《本草纲目》巨著中称斑蝥性味辛、寒，有大毒，有主治寒热、鬼疰盅毒、鼠瘘、疮疽、蚀死肌、破石癃、血积、伤人肌、治疥癣、堕胎、治瘰疬、通利水道、疗淋疾、傅恶疮瘘烂、治疝、解疖毒，治狂犬病等功效。近年来对斑蝥的研究主要集中于对其有效成分斑蝥素抗癌机制的探讨、衍生物的研制和新剂型的开发方面，相继合成了多种斑蝥素衍生物，如斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺、甲基斑蝥胺、去甲斑蝥素等。现代临床研究证实斑蝥在治疗一些疑难杂症方面，具有独特的疗效，如治疗风湿痛、神经痛、梅核气、斑秃、乳腺增生、鼻炎、传染性疣、肝炎、癌肿等。斑蝥中含有斑蝥素、单萜烯类脂肪、树脂、蚁酸及色素等成份，但抗癌活性成份为斑蝥素。药理研究中发现，斑蝥对多种实验动物移植性肿瘤有明显抑制作用；斑蝥素对小鼠肉瘤-ISOHela细胞，腹水型网状细胞瘤和腹水型肝癌有抑制作用，因斑蝥素干扰癌细胞中蛋白质和核酸的合成。临床运用中，斑蝥素及其衍生物对肝癌确有较好疗效。据统计以斑蝥素制剂为主治疗原发性肝癌中，有效率60%左右，可改善肝癌患者的临床症状，延长生存期，部份病例肿块缩小，白细胞多不下降，治疗后1年生存率为12. %。也有用甲基斑蝥胺治疗ΙΙ、ΙΙΙ期原发性肝癌时，半年以上生存率明显高于5-Fu组，若将甲基斑蝥胺的单次用量增大5-10倍，半年以上生存率可得到明显提高(由18. 9%升至57. 1% )，且未见明显毒副作用。非离子表面活性剂囊泡(也有人称为非离子性表面活性剂脂质体)英文名为Non-ionic surfactant based vesicles，f^l^niosomes。禾中生齐[1 载体材料，通过自身闭合形成的双分子层微型或多室囊泡状载体。利用非离子表面活性剂囊泡包裹药物可以减少药物在达到有效部位前被破坏、延长药物的半衰期、从而延长药物的作用时间以及降低毒副作用，改变药物在体内的分布，达到被动靶向作用等，在加入适当特殊辅料后也可以达到主动靶向的作用。与脂质体相比，非离子表面活性剂囊泡的载体材料不含磷脂，避免了磷脂的氧化降解，生产和贮存皆不需特殊条件，可使工艺简化、成本降低，是一种极有希望的新型药物载体。由于非离子表面活性剂毒性较小，具有生物相容性和可降解性，不解离，不发生氧化水解，易大量生产，且可根据用途设计其结构，因此近年来对其研究的人越来越多。囊泡技术已经成为化学、药学和生命科学研究领域中的热点之一。斑蝥素作为中药有效部位或成分，临床疗效显著，但毒副作用很大，不安全，极大地限制了其在临床的应用，经皮给药外用制剂对该药物具有独特的优势，应用新型囊泡给药系统，改善药物的透皮吸收，解决药物在口服和注射给药时的毒副作用，增加临床给药患者的顺从性，将具有广阔的应用前景，会产生良好的社会效益和可观的经济效益。
本发明目的是提供斑蝥素囊泡及其制备方法，还有斑蝥素囊泡凝胶的制剂及其制备方法。本发明所解决的技术问题，本发明的优点和技术优势为斑蝥具有攻毒蚀疮，逐瘀散结的功效，其有效成分斑蝥素为抗癌有效成分，在治疗肝癌、乳腺癌、肺癌、食管癌、结肠癌等方面有确切的疗效，外用涂抹还具有促进毛发生长的功能，可用于治疗脱发。资料显示，人类用斑蝥治疗疾病已有2000多年的历史，其临床应用千年不衰，说明它具有显著的疗效，可谓是“毒药猛剂善起沉疴”，但同时由于它是一味“毒药”，治疗量与中毒量接近，严重限制了其临床应用。靶向制剂是继一代普通制剂、二代缓释制剂和前体制剂、三代控释制剂之后的第四代制剂。脂质体是研究的最多靶向药物载体，但脂质体的性能存在如下缺点①由于其化学不稳定性，制备及贮藏困难，药物包裹率不高且易发生渗漏而失去靶向性；②所用原料磷脂难以纯化，且易氧化变质而降低膜流动性导致被包裹药物的渗漏；③纯化的磷脂价格昂贵；④生产中常需通惰性气体，制备贮藏难度较大。因此，人们广泛地研究了化学组成确定、性质较稳定、能构成脂质体样囊泡的载体。随着脂膜模拟化学的发展，人们在研究中发现，表面活性剂在水溶液可自组装成双层封闭结构，和脂质体结构类似的囊泡，壳层内外均是亲水基团，空的中心可容纳水性介质，夹在两层亲水基团中间的是疏水基团。许多表面活性剂都具有自我组装形成囊泡结构的能力，但由于非离子型表面活性剂毒性较小，具有生物相容性和可降解性，不解离，不发生氧化水解，易大量生产，且可根据用途设计其结构，因此对其研究较为深入。非离子型表面活性剂囊泡(niosomes)也可称为非离子型表面活性剂脂质体(因为磷脂也是一种表面活性剂，且一直将liposomes译为脂质体)，它是非离子表面活性剂自身闭合形成的双分子层微型或多室囊泡载体，与脂质体相比，非离子型表面活性剂囊泡的载体材料不含磷脂，避免了磷脂的氧化降解，生产和贮存皆不需特殊条件，可使工艺简化、成本降低，是一种极有希望的新型药物载体。囊泡所具有的双层膜结构使其成为潜在的理想的体内药物载体，既可以携带水溶性药物(如氨基酸、多肽、蛋白类药物)，将药物包封在微水相内，也可以携带油溶性药物，将药物增溶在双层膜中，与胶束、微乳液相比，囊泡体系作为药物载体有如下特点(1)比表面大，更大的增溶量；( 双层膜具有更强的牢固性和稳定性；C3)可通过组成、pH、盐来调节粒径的大小和药物分子的渗透率。由于组成囊泡的表面活性剂的高度化学稳定性，囊泡比脂质体的稳定性要高很多，且表面活性剂又具有很好的促渗透作用，因此在经皮给药系统中具有特殊的优势。目前，提高药物透过皮肤角质层的方法包括微粒载体(泡囊、类脂毫微囊等)，化学促进剂(氮酮、挥发油等)，物理促渗技术(离子导入、电穿孔、超声波等)。脂质体经皮给药研究已较多，但传统脂质体透皮效率并不理想，它们倾向于在皮肤角质层表层，与皮肤发生融合而产生蓄积作用，无法穿透进入皮肤深层，而泡囊载体以其毒性小、刺激性小、不对皮肤造成伤害，促进各种性质药物(脂溶性、水溶性、大分子)穿透皮肤角质层、可达到循环系统而备受注目。囊泡比脂质体更稳定，具有增加药效，减少毒副作用的优点，提供了一种可与脂质体选择使用的新型药物载体。而囊泡较脂质体的优良经皮渗透性能，对于中药尤其是毒性中药透皮靶向新型给药系统的研发，具有重要意义。斑蝥具有破血消癥，功毒蚀疮，引赤发泡的功效，用于治疗癥瘕肿块，积年顽癣，瘰疬，赘疣，痈疽不溃，恶疮死肌等症，疗效确切，但其活性成分斑蝥素治疗量和中毒量接近，严重限制了临床应用。本课题选择囊泡作为斑蝥素经皮给药的新剂型，可提高局部用药部位如皮肤、关节部位的浓度，透皮吸收后可发挥全身治疗作用。根据斑蝥治疗疾病的特点，由于口服或注射给药，局部药物物浓度不易达到，影响了治疗效果。而选择囊泡经皮给药，由于囊泡较脂质体的强穿透性，易达到皮肤深层，可大大提高局部药物的浓度，同时可在皮肤局部形成药物贮库，保持体内稳定的血药浓度，继续发挥全身治疗作用。斑蝥素囊泡也减少了对皮肤的刺激，囊泡达到循环系统后，由于囊泡微粒自身的靶向性，在肝、脾部位浓度较高，可避免斑蝥素对心、肾等器官的损害，使用药安全性大大提尚。本发明是通过如下技术方案完成的本发明斑蝥素囊泡，包括下列重量份组分斑蝥素0. 01-10 份非离子表面活性剂2. 5-650 份
附加剂0. 25-650 份。
进一步优选为
斑蝥素0.05-8 份
非离子表面活性剂5-350 份
附加剂0. 25-350 份。
更进一步优选为
斑蝥素0. 08-7 份
非离子表面活性剂20-250 份
附加剂0. 25-250 份。
所述斑蝥素还可以为斑蝥酸钠、羟基斑蝥胺、甲基斑蝥胺、去甲斑蝥、丙烯基斑蝥胺中的--种或一种以上的混合物。
所述非离子表面活性剂包括司盘、吐温、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚氧乙烯脂肪醇醚、
聚甘油烷基醚、冠醚、葡萄糖烷基醚、聚氧乙烯烷基醚、泊洛沙姆、蔗糖酯、脂肪酸甘油酯、甘油单硬脂酸酯、聚乙二醇脂肪酸甘油酯、聚乙二醇-4-硬脂甘油酯、聚乙二醇月桂酸甘油酯、聚乙二醇辛酸葵酸甘油酯、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物中一种或一种以上任意比例混合物。 附加剂可为胆固醇、胆固醇聚乙二醇聚合物、硬脂酰胺(SA)、二鲸蜡磷酸酯(DCP)、十八胺、十二烷基硫酸钠(SDS)、聚乙二醇(PEG)、泊洛沙姆188 (F68)、羟丙基倍它环糊精、聚乙二醇-聚乳酸、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、N-十六酰-L-高半胱胺酸、磷脂酰胆碱、棕榈酸钠、硬脂酸钠、肉豆蔻酸钠、月桂酸钠、十二烷基苯磺酸钠、月桂酰甲基牛磺酸钠、十二烷基二甲基甜菜碱、月桂酰胺丙基甜菜碱一种或一种以上任意比例混合物，其中聚乙二醇(PEG)种类包括4000、6000、2000、400、300中的一种或一种以上。非离子表面活性剂中司盘包括司盘20、司盘40、司盘60、司盘65、司盘80、司盘85等；吐温包括吐温20、吐温40、吐温60、吐温80、吐温85等；蔗糖硬脂酸酯包括蔗糖硬脂酸酯S-3、蔗糖硬脂酸酯S-7、蔗糖硬脂酸酯S-11、蔗糖硬脂酸酯S-15等；聚氧乙烯脂肪酸酯，别名卖泽(Myrij)，如聚氧乙烯40脂肪酸酯(polyoxyl40stearate)、聚氧乙烯8脂肪酸酯、聚氧乙烯50脂肪酸酯；聚氧乙烯脂肪醇醚，别名苄泽，包括81^_30、81^_35、81^_72、Brij721、西土马哥(Cetomacrogol)、平平加 0 (Perogol 0)、埃莫尔弗(Emlphor)。本发明斑蝥素囊泡可采取乙醇注入法、薄膜分散法、反相蒸发法、水化法、挤出法、机械法、PH梯度法等方法，优选以下制备方法取非离子表面活性剂、附加剂、斑蝥素溶于适量有机溶剂，加热或超声溶解，溶液备用；另取水或磷酸盐缓冲液，在(15-80°C )恒温搅拌下，勻速注入上述溶液，加完后继续搅拌，至有机溶剂挥尽，加水或磷酸盐缓冲液至全量，超声或过高压乳勻机1-3次，过滤，灌装或冷冻干燥，即得。本发明斑蝥素囊泡制备方法也可以为取非离子表面活性剂、附加剂、斑蝥素溶于适量有机溶剂，减压蒸发至干燥薄膜，真空干燥除去残余溶媒，然后加入磷酸盐缓冲液，(25-900C )恒温水合，水合时间10-60分钟，水合后超声处理，灌装或冷冻干燥，即得。本发明斑蝥素囊泡制备方法还可以为将非离子表面活性剂加少量的磷酸盐缓冲液溶解，加入已经熔融的附加剂中，搅拌，加入斑蝥素溶液，混勻后倒入25-85°C的磷酸盐缓冲液，水浴放置5-30分钟，灌装或冷冻干燥，即得。本发明斑蝥素囊泡制备方法还可以为将非离子表面活性剂、附加剂加入适量有机溶剂溶解，溶液加入1/2有机溶剂量以下的磷酸盐缓冲液，超声2-20分钟，25-65°C旋转至胶态，再加入斑蝥素溶液，40-8(TC旋转至干，加入磷酸盐缓冲液，旋转10-30分钟，放置1-12小时，充分水合，灌装或冷冻干燥，即得。本发明斑蝥素囊泡制备方法还可以为取非离子表面活性剂、附加剂溶于适量有机溶剂，加热或超声溶解，溶液备用；在15-80°C恒温搅拌下，取上述溶液勻速加入加有斑蝥素的磷酸盐缓冲液，加完后继续搅拌，至有机溶剂挥尽，加入适量的碱调节PH至7，继续搅拌lh，灌装或冷冻干燥，即得。其中所述的碱是指氢氧化钠、氨水、三乙醇胺、三乙胺、碳酸钠、碳酸氢钠中的一种或一种以上。本发明斑蝥素囊泡制备方法还可以为取非离子表面活性剂、附加剂溶于适量有机溶剂，加热或超声溶解，溶液备用；在15-80°C恒温搅拌下，取上述溶液勻速注入加有铵盐的溶液，加完后继续搅拌，至有机溶剂挥尽，通过透析或过柱除去囊泡其中的酸根离子，加入适量的斑蝥素溶液，继续搅拌0.证，过滤，灌装或冷冻干燥，即得。其中所述的铵盐是指硫酸铵、碳酸铵、氯化铵、醋酸铵、磷酸二氢铵中的一种或一种以上。冷冻干燥工艺中，可添加适量的甘露醇、右旋糖酐、乳糖使冻干溶液重量比例在4% -25%之间，冻干过程中降温速度应在每小时5°C -6°C，在一期升华干燥阶段，制品温度应低于共熔点，升温速度每小时5°C左右。
本发明斑蝥素囊泡制备方法中附加剂根据其溶解性的不同，可溶于有机溶剂中，也可溶于水或不同类型的缓冲液中。本发明斑蝥素囊泡制备方法中磷酸盐缓冲液也可以为硫酸铵缓冲液、三羟甲基氨基缓冲液、柠檬酸缓冲液、酒石酸缓冲液、水；有机溶剂包括无水乙醇，甲醇，丙酮，二氯甲烷、氯仿，乙醚、异戊醇、乙酸乙酯的一种或一种以上任意比例的混合物。斑蝥素囊泡可以制备为注射剂，口服液，液体胶囊等口服剂型，外用制剂等制剂，优选外用制剂，进一步优选凝胶、软膏剂、贴剂等，进一步优选为凝胶剂。斑蝥素囊泡凝胶由以下重量份组分组成斑蝥素0.01-10、非离子表面活性剂2. 5-650、附加剂0-650、增稠剂0. 1-125、保湿剂1_1200、ρΗ调节剂0-60、透皮剂0-70、防腐剂 0-300。可优选为斑蝥素0. 05-8、非离子表面活性剂5-350、附加剂0. 25-350、增稠剂0. 1-100、保湿剂1-1000、pH调节剂0-50、透皮剂0-50、防腐剂0. 5-250。增稠剂可为交联聚丙烯树脂类，包括卡波姆941，974，934P，980，981及交联聚丙烯树脂不同盐及衍生物，还可为羟丙甲基纤维素、黄原胶。保湿剂可为甘油、丙二醇、异丙醇、透明质酸中的一种或一种以上的混合物。pH调节剂可为有机胺类如三乙醇胺、三乙胺、二乙胺，也可为氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠。透皮剂可为氮酮、薄荷醇、精油、二甲基亚砜、丙二醇、肉豆蔻异丙基酸酯、N-甲基吡咯烷酮、月桂酸聚乙二醇甘油酯、聚甘油脂肪酸酯、油酸聚乙二醇甘油酯、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯中的一种或一种以上。防腐剂可为山梨酸钾、山梨酸、羟苯乙酯、羟苯丙酯、羟苯甲酯、苯酚中的一种或一种以上。斑蝥素囊泡凝胶的制备方法为取增稠剂、保湿剂、透皮剂、防腐剂，加入蒸馏水，pH调节剂，制成凝胶基质，和所制
得的斑蝥素囊泡混悬液混合，搅拌均勻，即得斑蝥素囊泡凝胶。

有统计学意义。3、结果3. 1斑蝥素囊泡凝胶对人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制试验15、55、100ug/ml斑蝥素囊泡凝胶作用于人肝癌细胞SMMC-7721均明显诱导其凋亡，分别作用24、48、7池后，SMMC-7721细胞受到不同程度的抑制，并呈剂量和时间依赖性。见表1。表1不同浓度斑蝥素囊泡凝胶作用于SMMC-7721细胞不同时间的存活率(％，
X土s)


本发明公开了一种斑蝥素囊泡及其制备方法、含有斑蝥素囊泡的制剂及其制备方法，属于药物制剂领域。该斑蝥素囊泡由斑蝥素、非离子表面活性剂、附加剂制成。该斑蝥素囊泡优选制备成外用凝胶剂型。斑蝥素经皮给药外用制剂对该药物具有独特的优势，应用新型囊泡给药系统，增加药物的透皮吸收，增强临床疗效，可用于治疗癌症特别是肝癌，有肝靶向作用。