专利名称：组织工程化血管平滑肌细胞种植器的制作方法组织工程化血管的种子细胞主要包括平滑肌细胞和内皮细胞，其中平滑肌细胞不仅可以分泌细胞细胞外基质该善支架材料的结构和力学性能，还能分泌一些生长因子调控内皮细胞的生物活性。成为近年来干细胞和组织工程研究的热点。将平滑肌细胞均勻的种植在支架材料的内膜下层是成功构建组织工程化血管的关键，目前采用的平滑肌细胞种植方法有从管腔内多点注射，加压灌注(温昱，党瑞山，张传森等，MAPC/EPC性组织工程化静脉瓣，第二军医大学博士论文，2008. 4. 21)、旋转(Roh， J. D. , Nelson, G. N. , Brennan, Μ. P. , Mirensky, Τ. L. , Yi, Τ. , Hazlett, Τ. F. , Tellides,G., Sinusas, Α. J. , Pober, J. S. , Saltzman, W. Μ. , Kyriakides, Τ. R. , and Breuer, C. K. Small-diameter biodegradablescaffoIds for functional vascular tissue engineering in the mouse model. Biomaterials 29,1454, 2008)、离心(Shimizu, K., Ito, A. , Arinobe, Μ. , Murase, Y. , Iwata, Y. , Narita, Y. , Kagami, H. , Ueda, Μ. , and Honda,H.Effective cell-seedingtechnique using magnetite nanoparticles and magnetic force onto decellularizedblood vessels for vascular tissue engineering. J Biosci Bioeng 103，472，2007)和磁力(Badylak SF, Valentin JE, Ravindra AK，McCabe GP, Stewart-Akers AM. Macrophage phenotype as a determinant of biologic scaffold remodeling. TissueEng Part A 2008 ；14(11) : 18；35_42.)等方法从支架材料的管腔内种植平滑肌细胞，但上述方法都不能达到将平滑肌细胞均勻的种植在内膜层下的理想状态， 并且上述方法会一定程度的破坏内膜的结构，影响内皮细胞的内皮化过程(Gilbert Tff, Sellaro TL, Badylak SF. Decellularization of tissues andorgans· Biomaterials 2006；27(19) :3675-83)。因此，不能有效的将平滑肌细胞种植到支架材料上成为制约组织工程和再生医学发展的瓶颈。目前尚未见专门适用于在组织工程化血管支架材料上种植平滑肌细胞的种植装置的报道。
本发明的目的在于提供一种专门适用于在组织工程化血管支架材料上种植平滑肌细胞的种植装置。本发明提供了一种组织工程化血管平滑肌细胞种植器，其结构具体如下本发明的细胞种植器包括细胞种植管、细胞悬液容纳筒和三通管，细胞种植管是前端钝圆的空心管，其前2至3cm管周设有致密小孔，细胞种植管后端管周无孔，穿过细胞悬液容纳筒封闭帽后，转为细长真空吸引管，可连接真空吸引装置如注射器等，细长管道可增加真空吸引的力度；细胞悬液容纳筒中间容纳细胞种植管，前端可与三通管连接，后端有种植管穿过的细胞悬液容纳筒封闭帽；三通管的一个端口与细胞悬液容纳筒连接，另外两个端口分别是带有过滤网的通气管和带封闭帽的细胞悬液注入管，三管的中央有控制三个端口开放的阀门。本发明使用时，将组织工程血管支架材料套在带有致密小孔的细胞种植管道前端，连接好平滑肌细胞种植器的各部件，当各个端口关闭时，细胞悬液容纳筒是个密闭的腔隙；打开三通管的细胞悬液注入管，将平滑肌细胞悬液注入细胞悬液容纳筒后，打开三通管的通气管，此时仅有带空气过滤网的通气管与外界相通，细胞悬液容纳筒内近似无菌的环境；平滑肌细胞种植器工作时，注射器产生的真空吸引作用通过致密小孔将含有少量细胞的培养液吸到注射器，大量的平滑肌细胞残留外膜，中膜层，而且根据吸出液体的量可以大体估计出种植细胞的总量。因各种血管支架材料的管径和长度不同，本技术领域的技术人员可以根据血管支架材料的不同的管径或长度，制作、选择不同规格的细胞种植器；本技术领域的技术人员可以根据平滑肌细胞种植密度的稀疏或均勻程度，将致密小孔的分布进一步精确化。通过本装置种植的平滑肌细胞，能较均勻的分布在支架材料的外膜和中膜，在细胞种植过程中，对血管支架材料内膜影响小，达到了种植平滑肌细胞的理想状态；平滑肌细胞种植过程是在近似于无菌状态的细胞悬液筒内进行，减少了支架材料、细胞与外界接触的机会，降低了支架材料和细胞污染的概率；本发明采用了临床医用材料，无毒无害不影响细胞的活性，安全性系数高；本发明体积小，操作简单，易于在无菌操作台内使用；本发明成本低，功能强，应用前景广，有望将来产业化生产。图1是本发明组织工程化血管平滑肌细胞种植器的结构示意2是本发明组织工程化血管平滑肌细胞种植器的使用状态示意图其中细胞种植管1 ；种植管前端致密小孔2 ；真空吸引管3 ；细胞悬液容纳筒4 ’三通管5 ；带有过滤网的通气管6 ；细胞悬液注入管7 ；三通管阀门8 ；封闭帽9和10 ；过滤网 11 ；细胞悬液筒封闭帽12 ；支架材料13 ；注射器14。



本发明涉及生物医学工程领域器材产品。本发明的目的在于提供一种专门适用于在组织工程化血管支架材料上种植平滑肌细胞的装置。本发明的细胞种植器改革传统的从支架材料管腔内种植平滑肌细胞的方法，主要由细胞种植管(1)、细胞悬液容纳筒(4)和三通管(5)组成，利用真空吸引的作用将平滑肌细胞从官(管)腔外壁较均匀的种植平滑肌细于在内膜下，种植的细胞密度较均匀；使用该产品种植平滑肌细胞对支架材料内膜层结构破坏较小，可对种植平滑肌细胞的数量有量化的控制；使用该产品种植平滑肌的过程是在(近似)无菌的细胞悬液筒中进行，减少了支架材料与外界接触的机会，减少构建组织工程化血管的污染率。本产品所采用的材料是临床上使用的医疗材料，安全系数高，对细胞和构建的组织工程化血管无毒无害。