专利名称：人参皂苷Rg1在制备抗抑郁症药物中的应用的制作方法人参皂苷Rgl，分子式为C42H72O14，分子量为801. 01，为原人参三醇型皂苷，其溶于 甲醇、吡啶、热丙酮，稍溶于乙酸乙酯及氯仿。CAS :22427-39-0, EINECS :244-989-9。其结 构式如图5。已有研究表明，大鼠腹腔注射100mg/kg Rgl, 4h后骨髓细胞的DNA的生物合成明显增 加；对蛋白质或脂质的生物合成作用与对DNA的生物合成的作用有大致相同倾向；另外其 还能减少乙酰胆碱引起的豚鼠离体子宫的收缩；对大鼠有减慢心率和双向性血压作用(先 升后降);有舒张动物血管和抗疲劳作用。但我们发现至今未有关于人参皂苷Rgl的抗抑郁 研究。抑郁症(expression)属于情感性精神障碍，是一种以显著而持久的心境低落为主 要特征的综合症。随着现代社会经济的高速发展以及人们精神压力的增强，抑郁症的发病 率逐年提高，已成为“21世纪的流行病”，并且还在以每年113%的增长率逐年递增。世界卫 生组织(WHO)在《2001年世界卫生报告》中指出，抑郁症已成为世界第四大疾患，而到2020 年时可能成为仅次于缺血性心脏病的第二代疾病。我国的抑郁症患病情况也不容乐观约 有20%的人有抑郁症状，有7%的人患有重度抑郁症，抑郁症已成为中国疾病负担的第二位。 从这些数字中可以看出，抑郁症已经给患者和社会造成了巨大危害。因此抗抑郁药物的研 发具有十分重要的意义。目前，临床上所应用的抗抑郁药物依据不同的作用机理，大致分为以下四类(1)三环类和四环类抗抑郁药。三环类主要有米帕明(imipramine)、地昔帕明 (desipramine)等，四环类有马普替林(maprotiline)。这类药物主要是通过阻断5-HT和 去甲肾上腺素再摄取起作用的。(2)单胺氧化酶(MAO)抑制剂。临床用药主要有苯乙胼 (phenelzine)。MAO抑制剂是通过抑制ΜΑ0，提高神经系统内单胺含量，从而发挥其抑郁作 用。(3)选择性5-羟色胺重吸收抑制剂(SSRI)，是临床上抗抑郁的普遍用药。主要药物有 氟西汀(fluoxetine)、帕罗西汀(paroxetine)。这类药物主要通过选择性阻断5-HT的再摄 取而发挥作用。(4)非典型抗抑郁药。这类抗抑郁药无论从化学结构还是从作用机制以及 作用特点，都不能归于上述3类之中，主要包括去甲肾上腺素及多巴胺重吸收抑制剂、5-HT 受体拮抗剂及5-HT重吸收抑制剂。临床上抗抑郁用药种类繁多且作用机理复杂，但是仍有1/3的抑郁症患者对临床 使用的抗抑郁药效果欠佳，比如见效慢，复发率高等。更重要的是，一些抗抑郁药长期使用 后毒副作用明显。因此，研发新型、有效、低毒的抗抑郁药物十分必要。中药是纯天然药物， 有着几千年的临床应用经验，相对毒副作用少并且价格便宜，种种优点使其成为研发抗抑 郁药物的首选。近年来用三七、人参、西洋参预防和治疗抑郁的研究越来越多，如 CN200710123530. 5《一组用于治疗抑郁症的药物组合物及制法》中以人参、白芍为原料制成 药物组合物来抗抑郁，如CN200810120395. 3《淫羊藿总黄酮与三七总皂苷组合物的用途》中 以三七总皂苷和淫羊藿总黄酮组合来用于抗抑郁，但目前中药治疗抑郁，绝大部分都只是 局限在组合药物中加入人参属植物，或者加入其总皂苷来抗抑郁。人参属植物确实具有较 好的抗抑郁效果，而其主要抗抑郁成分是其皂苷组分，如CN200310107285. 0《一种治疗失眠 的中药组合物》所述，三七叶总皂苷具有镇静作用，三七叶总皂苷能明显抑制小鼠的自发活 动，对中枢抑制药物氯丙嗪、戊巴比妥钠、硫喷妥钠有协同作用，对中枢兴奋药苯丙胺、咖啡 因所致的小鼠的兴奋有拮抗作用，三七叶总皂苷可用于治疗失眠及抑郁症等，且有较好的 疗效。但总皂苷中，发挥中枢神经兴奋和抑制作用的组分同时存在，无法说明发挥抗抑郁作 用的具体组分。所以进一步明确总皂苷中具体是哪些组分起着抗抑郁作用，对于开发抗抑 郁症药物和研究总皀苷作用机制有很重要的意义。然而，目前从单体水平进行抗抑郁研究还比较少，目前已研究了的一些单体有 CN200410086457. 5中所述的人参皂苷Rg2，CN200610027507. 1中所述的20(s) —原人 参二醇，CN200610116353. 3中所述的20 (s) —原人参二醇衍生物，CN200810043537. 0所 述的20(S) —人参皂苷他2及CN201010193222. 1中所述的人参皂苷Rb3。其中也只有 CN200410086457. 5中所述的人参皂苷Rg2为人参三醇型皂苷，故目前关于人参三醇型的皂 苷单体的抗抑郁作用研究还很少。而作为三七中含量相对较高的人参皂苷Rgl而言，其也属于人参三醇型皂苷，但 关于其是否具有抗抑郁作用还未见报道。若人参皂苷Rgl有显著的抗抑郁效果，而其在 三七中的含量又相对较高，可以不用从昂贵的人参中提取，这样保证了其有充足的来源，那 么这也使得它相对于其他一些具有抗抑郁作用但是含量、来源少的单体而言更具有优势， 所以明确人参皂苷Rgl是否有显著的抗抑郁效果，对于开发抑郁症药物、治疗抑郁症将具 有重大的意义，也为明确总皂苷中具体的抗抑郁组分提供了依据。
本发明的目的在于针对现有的抗抑郁症药物的缺点，从人参三醇型皂苷单体水平 提供了一种能显著预防和治疗抑郁症的天然化合物。发明提供以下方案将人参皂苷Rgl应用于制备抗抑郁症药物中。该抗抑郁症药物，可以为单一成分的人参皂苷Rgl，也可以为人参皂苷Rgl和其它 化合物或者中药组成的复方药物。其中人参皂苷Rgl作为主要成分或非主要成分。药物中还可以含有崩解剂、湿润剂、粘合剂、填充剂、吸收促进剂、溶剂、润滑剂、表 面活性剂、香味剂、甜味剂、抗氧化剂、防腐剂和色素中的一种或多种。药物可制备成为不同的剂型，如口服制剂、舌下含化片剂丸剂或针剂；口服制剂可 以是片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、滴剂、果汁剂或糖浆剂；针剂可以是注射液、粉针剂、冻干 粉针剂。将人参皂苷Rgl应用于制备抗抑郁症药物时，药物的应用剂量以人参皂苷Rgl重 量计算可为每次5 11 mg/kg体重；也可为每日5 11 mg/kg体重。人参皂苷Rgl可以是由人参、三七或者西洋参提取分离而得，或者化学合成而得。从植物中提取分离时，由人参、三七或西洋参的叶、茎、根提取分离而得。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果(1)目前研究的许多具有抗抑郁作用的单体都属于人参二醇型皂苷，对人参三醇型皂 苷的抗抑郁作用研究得还很少，而本发明从人参三醇型皂苷水平提供了一种新的具有抗抑 郁作用的单体，即人参皂苷Rgl。(2)如CN200810096148. 4中所述，人参皂苷Rgl在三七中的含量为39. Ilmg/ g，在西洋参中为4. 75mg/g，在人参中为3. 20mg/g，相对来讲人参皂苷Rgl在人参植物或 人参科其它种中含量是很高的，尤其是在三七中的含量相当高，所以其来源充足，可以 大量从三七中提取，而不必从昂贵的人参中提取。另外其提取工艺也已经较为成熟，如 CN200810114686. 1所提供的方法，可用于工业化生产。(3)如CN200410086457. 5所述的人参皂苷Rg2，其与本发明提供的人参皂苷Rgl 都属于人参三醇型皂苷，都具有一定的抗抑郁作用，但是Rg2有显著的兴奋中枢神经系统 的作用，而抑郁症是一种长期慢性的疾病，其治疗也将是个长期过程，若长期服用，长期使 中枢神经系统处于兴奋状态，这种后果将会非常严重。而本发明所提供的人参皂苷Rgl，其 在本发明中没有显著改变小鼠自主活动水平，不会影响中枢神经系统的兴奋性。故其长期 服用安全性高，毒副作用少。(4)如CN201010193222. 1中所述的人参皂苷Rb3在中剂量(75mg/kg (小鼠体重)) 单次连续给药3天和4天后可分别显著减少小鼠强迫游泳不动时间和小鼠悬尾不动时间， 在CN200610027507. 1中所述的20(s) —原人参二醇在高剂量(15mg/kg (小鼠体重))单次 连续给药10天后可显著减少小鼠不动时间。而本发明中，人参皂苷Rgl在高剂量(100 mg/ kg (小鼠体重))单次给药2天后也可显著减少强迫游泳不动时间和逃避失败次数。与这些 人参二醇型皂苷相比，可见属于人参三醇型的人参皂苷Rgl也有较好的抗抑郁效果。(5)在CN200610027507. 1中，虽然20 (s) —原人参二醇有较好的抗抑郁效果，但 根据CN(^820659. 2所述，原人参二醇是皂苷的苷元，没有天然存在于人参植物或人参科其 它种，而只能通过由达玛烷皂苷类裂解和/或半合成的化学结构修饰来获得。另外在由皂 苷用酸裂解时，原人参二醇性质不太稳定，易由S型变为R型，而半合成的其安全性与天然 化合物相比，还有待进一步研究。而本发明提供的人参皂苷Rgl是天然化合物，其可由人参 植物或人参科其它种提取，且含量也高，性质也稳定，安全性也好。(6)如CN200610116353. 3中所限定的20 (s) —原人参二醇衍生物，尽管这些原人 参二醇衍生物与原人参二醇相比，含有特定的衍生基团，有利于提升抗抑郁效果，但是这些 原人参二醇衍生物的疗效的有效程度及是否同时带来其他负面效果，仍是一个未知。而本 发明提供的人参皂苷Rgl可从天然植物中提取而得，安全性好，毒副作用少。(7)在总皂苷水平，胡靖，付宝忠在《三环类药物及人参皂甙抗抑郁作用的研究》中 有说明，人参茎叶皂苷和人参根皂苷均在低剂量(50 mg/kg (小鼠体重))，高剂量(200 mg/ kg (小鼠体重))多次给药后显著减少小鼠强迫游泳不动时间。而本发明中，人参皂苷Rgl 在高剂量(100 mg/kg (小鼠体重))单次给药2天后就可显著减少小鼠强迫游泳不动时间和 逃避失败次数。可见二者也都有较好的抗抑郁效果，但是在总皂苷中，发挥中枢神经兴奋和 抑制作用的组分同时存在，具体的抗抑郁组分不明确，而人参皂苷Rgl作为一种单体，其疗 效不仅好，而且更确切。总的来讲，人参皂苷可通过多系统、多层次、多靶点发挥抗抑郁作用，疗效好，副作 用少，而本发明提供的人参皂苷单体Rgl，其抗抑郁疗效确切，有效性高，副作用小，特别是 其在天然植物中(尤其是三七中)含量高，另外制备方法成熟。另外本发明也为进一步明确 总皂苷中具体抗抑郁成分提供了依据。


图1为人参皂苷Rgl对小鼠悬尾实验不动时间的影响，*表示P<0. 05，即与空白对照组 相比有显著性差异；
图2为人参皂苷Rgl对小鼠开场实验活动路程的影响，各实验组间没有显著性差别； 图3为人参皂苷Rgl对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响，*表示P<0. 05，即与空白对 照组相比有显著性差异；
图4为人参皂苷Rgl对小鼠获得性无助实验中逃避失败次数的影响，*表示P<0. 05，即 与空白对照组相比有显著性差异； 图5为人参皂苷Rgl的结构式；
图6为人参皂苷Rgl对小鼠悬尾实验不动时间的影响结果； 图7为人参皂苷Rgl对小鼠开场实验活动路程的影响结果； 图8为人参皂苷Rgl对小鼠强迫游泳实验不动时间的影响结果； 图9为人参皂苷Rgl对小鼠逃避失败次数的影响结果。

1.1实验动物
SPF级昆明小鼠，雄性，体重18-22g，购自中山大学医学院实验动物中心，许可证号 SCXK (粤)2009-0011。标准饲料及垫料均购自中山大学医学院实验动物中心。1. 2药品与仪器
药品人参皂苷Rgl，购自云南植物药业有限公司；阳性药马普替林购自广州市健民药房。小鼠悬尾实验自动摄影分析系统；实验用小鼠灌胃针头等，购自淮北正华生物仪 器设备有限公司。1. 3药液制备
取人参皂苷Rgl溶于蒸馏水，分别配置成低、高两种浓度(5mg/ml、10mg/ml)的溶液。马 普替林(Maprotiline)药物片剂研磨成粉，按有效成分的比例取所需用量。加入蒸馏水配 制成1. 8mg/ml的悬浊液，灌胃前摇勻。1.4实验方法小鼠40只，分成4组，每组10只，分别为空白对照组(生理盐水)，Rgl-低剂量组(Rgl 50mg/kg (小鼠体重))、Rgl-高剂量组(Rgl 100mg/kg (小鼠体重))、马普替林组(18mg/kg (小鼠体重))。按小鼠体重0. lml/10g灌胃给药，每日一次，灌胃给药1天，第二天给药Ih后 进行悬尾测试。将小鼠倒挂，距尾端约Icm处用绝缘胶固定于悬尾架的尾端，前肢距离台面约 10cm。悬尾测试摄影过程为6min，开始阶段小鼠均会挣扎，一段时间后会放弃挣扎，保持不 动，分析记录后細in小鼠的不动时间，作为判断小鼠抑郁样行为的指标。1. 5统计学方法
实验结果使用软件0rigin7.5进行统计作图，数据表示为“平均值士标准偏差”， P<0. 05表示具有显著性差异。2、实验结果
在悬尾实验中，人参皂苷Rgl在低剂量和高剂量下均可以减少小鼠悬尾实验的不动 时间，但是与空白对照组相比并无显著性差异。即说明人参皂苷Rgl在本测试剂量下可以 改善小鼠悬尾实验中抑郁样行为，但是没有显著改善。结果如图1和图6所示。
见图1所示，为人参皂苷Rgl对小鼠悬尾不动时间的影响示意图。其中X轴表示各 给药组，Y轴表示小鼠的悬尾不动时间(单位“秒”)；*表示P<0. 05，即与空白对照组相比有 显著性差异。实施例2小鼠强迫游泳实验 1材料与方法
1.1实验动物
SPF级昆明小鼠，雄性，体重18-22g，购自中山大学医学院实验动物中心，许可证号 SCXK (粤)2009-0011。标准饲料及垫料均购自中山大学医学院实验动物中心。1. 2仪器与药品
药品人参皂苷Rgl，购自云南植物药业有限公司；阳性药帕罗西汀、马普替林均购自 广州市健民药房。仪器ZH-QPT强迫游泳装置及分析系统，ZH-QPT开场实验装置及分析系统，实验 用小鼠灌胃针头，均购自淮北正华生物仪器设备有限公司；温度计。1.3药液制备
取人参皂苷Rgl溶于蒸馏水，分别配置成低、高两种浓度(5mg/ml、10mg/ml)的单体溶 液。帕罗西汀(Paroxetine)、马普替林(Maprotiline)药物片剂研磨成粉，按有效成分的比 例取所需用量。加入蒸馏水分别配制成0. 6mg/ml和1. 8mg/ml的悬浊液，灌胃前摇勻。1.4实验方法
在进行抑郁动物强迫游泳行为模型的实验时，必须同时检验药物对实验动物自主活动 水平的影响。只有当药物不增强小鼠自主活动强度时，才能认为绝望行为实验中不动时间 的减少是由抑郁症状的改变所导致的。小鼠60只，分成5组，分别为空白对照组(生理盐水)，Rgl-低剂量组(Rgl 50mg/ kg (小鼠体重))、Rgl_高剂量组(Rgl 100mg/kg (小鼠体重))、帕罗西汀组(6mg/kg (小鼠体 重))、马普替林组(18mg/kg (小鼠体重))。按小鼠体重0. lml/10g灌胃给药，每日一次，灌
7胃给药1天，第二天给药Ih后进行开场实验和强迫游泳测试。开场实验是用于检测动物自主活动强度的常用方法。开场试验箱长30cm、宽 30cm、高20cm。灌胃Ih后，将动物放置于开场试验箱中，记录其在5min内的活动路程。强迫游泳实验是将小鼠置于圆柱形的水箱内，最初小鼠会迅速游动，挣扎，企图逃 离这个环境。当发现此环境不可避免时，就会放弃挣扎，以一种不动状态漂浮在水面上。一 般以小鼠的不动状态模拟人类的抑郁行为。当开场实验结束后，将小鼠放置在直径为19cm 高为25cm的圆柱形透明水箱中，水深18cm，水温保持在23_25°C。记录小鼠6min的游泳状 态，分析后4min小鼠的不动时间。1. 5统计学方法
实验结果使用软件0rigin7.5进行统计作图，数据表示为“平均值士标准偏差”。 P<0. 05表示与空白对照组比较具有显著性差异。2.实验结果 2. 1 开场实验
在开场实验中，两种剂量的人参皂苷Rgl对小鼠的自主活动均没有显著影响。说明Rgl 并不是通过使神经中枢亢奋从而使小鼠游泳的不动时间减少。满足绝望实验行为的要求。 结果如图2和图7所示。见图2所示，为人参皂苷Rgl对小鼠开场实验活动路程的影响示意图。其中X轴 表示各给药组，Y轴表示小鼠的开场活动路程(单位“厘米”)；*表示P<0. 05，即与空白对照 组相比有显著性差异。2. 2强迫游泳实验结果
在小鼠强迫游泳实验中，阳性药帕罗西汀、马普替林均可减少小鼠强迫游泳实验的不 动时间，且效果显著。人参皂苷Rgl在低剂量和高剂量时，均可减少小鼠强迫游泳实验的不 动时间，但仅在高剂量时显著。虽然如此，但是结果仍可说明人参皂苷Rgl在适宜剂量下有 可显著改善小鼠强迫游泳实验中抑郁样行为 的效果。结果如图3和图8所示。见图3所示，为人参皂苷Rgl对小鼠强迫游泳不动时间的影响示意图。其中X轴 表示各给药组，Y轴表示小鼠的强迫游泳不动时间(单位“秒”)；*表示P<0. 05，即与空白对 照组相比有显著性差异。实施例3获得性无助实验 1材料与方法
1.1实验动物
SPF级昆明小鼠，雄性，体重18-22g，购自中山大学医学院实验动物中心，许可证号 SCXK (粤)2009-0011。标准饲料及垫料均购自中山大学医学院实验动物中心。1.2仪器与药品
药品人参皂苷Rgl，购自云南植物药业有限公司；阳性药马普替林购自广州市健民药房。仪器BA-200小鼠避暗仪，购自成都泰盟科技有限公司；实验用小鼠灌胃针头，购 自淮北正华生物仪器设备有限公司。
1.3药液制备
取人参皂苷Rgl溶于蒸馏水，分别配置成低、高两种浓度(5mg/ml、10mg/ml)的溶液。马 普替林(Maprotiline)药物片剂研磨成粉，按有效成分的比例取所需用量。加入蒸馏水分 别配制成1. 8mg/ml的悬浊液，灌胃前摇勻。1.4实验方法
小鼠40只，分成4组，每组10只，分别为空白对照组(生理盐水)，Rgl-低剂量组(Rgl 50mg/kg (小鼠体重))、Rgl-高剂量组(Rgl 100mg/kg (小鼠体重))、马普替林组(18 mg/kg (小鼠体重))。按小鼠体重0. lml/10g灌胃给药，每日一次。实验分两天进行。第一天为建模期将小鼠放在避暗箱中进行电击，电压调至 36V，每次电击15s，中间间隔20-60s不等。如此反复电击小鼠60次。第二天为测试期。小 鼠给药Ih后放进暗室中，先给予3s的光刺激，再给予3s的电刺激，如果小鼠不能从暗箱中 逃离出来，则记为一次逃避失败。给予30次刺激，统计分析空白组小鼠与给药组小鼠逃避 失败的次数。1. 5统计学方法
实验结果使用软件0rigin7.5进行统计作图，数据表示为“平均值士标准偏差”。 P<0. 05表示具有显著性差异。实验结果
在获得性无助实验中，与空白对照组相比，阳性药物马普替林可显著减少逃避失败的 次数，人参皂苷Rgl在低剂量和高剂量也均可减少逃避失败的次数，但仅高剂量时可显著 降低小鼠的逃避失败次数。虽然如此，仍可说明人参皂苷Rgl在适当剂量下可显著改善小 鼠获得性无助实验中抑郁样的行为。结果如图4和图8所示。见图4所示，为人参皂苷Rgl对小鼠获得性无助实验中逃避失败次数的影
响示意图。其中X轴表示各给药组，Y轴表示小鼠的逃避失败次数(单位“次”)；*表 示P<0. 05，即与空白对照组相比有显著性差异。基于上述实验，本发明得出了以下几个结论
1、在小鼠悬尾实验中，与空白对照组相比，本实验剂量(50mg/kg (小鼠体重)、100mg/kg (小鼠体重))下的人参皂苷Rgl均没有显著减少小鼠的不动时间。但是并不代表人参皂苷 Rgl没有抗抑郁疗效。在以下的两个实验中都有见到在高剂量(100mg/kg (小鼠体重))时， 其可显著改善抗抑郁样行为，有文献报道称可能因为强迫游泳实验和悬尾实验的作用路径 不同，从而导致小鼠对悬尾状态不敏感。2、在小鼠强迫游泳实验中，人参皂苷Rgl在高剂量时可显著性减少小鼠的不动时 间，且在开场实验中，两种剂量的人参皂苷Rgl对小鼠自主活动均没有显著影响，说明人参 皂苷Rgl使小鼠强迫游泳实验中不动时间减少不是由于活动水平的提高所致。游泳实验的
结果可信。3、通过获得性无助的实验发现，人参皂苷Rgl在高剂量(100mg/kg (小鼠体重))时 可以显著减少小鼠的逃避失败次数。通过上述3种动物行为学实验的综合分析，我们初步肯定人参皂苷Rgl具有一定 的抗抑郁效果。本实验中采用的两种阳性药物帕罗西汀、马普替林主要是通过阻断5-HT和 去甲肾上腺素再摄取起作用的。这两种药是目前临床上应用较广泛的，但是仍有抑郁症患者对其临床使用的抗抑郁药效果欠佳，比如见效慢，复发率高等，更重要的是长期使用后毒 副作用明显。研发新型、有效、低毒的抗抑郁药物十分必要。而本发明提供的人参皂苷Rgl 也具有一定的抗抑郁作用，其作为一种中药毒副作用少，在天然植物中的含量也相对于其 它皂苷高，而且提取工艺成熟，所以将人参皂苷Rgl做成制剂，具有很好的抗抑郁作用及临 床前景。


本发明属于医疗卫生领域，具体涉及一种天然化合物，即人参皂苷单体Rg1在制备抗抑郁症药物中的应用。人参皂苷Rg1在试验剂量下能减少小鼠悬尾实验中的不动时间，且显著减少小鼠强迫游泳实验中的不动时间，显著减少小鼠在获得性无助实验中的逃避失败次数，这些都表明人参皂苷Rg1具有较好的抗抑郁效果，可用于预防和治疗抑郁症。