专利名称：银杏酚酸在制备治疗性病、妇科病和肛周疾病的外用制剂中的用途的制作方法性病、妇科病和肛周疾病是临床最常见的疾病之一，随着人们生活水平的提高，在各地有逐年上升的趋势。由于此类疾病持续时间长，易反复发作，给患者带来痛苦，严重影响患者的身心健康。此类疾病多与生殖器及周围常驻病原体感染有关，如淋球菌、阴道毛滴虫、白色念珠菌、衣原体、疱疹病毒、梅毒螺旋体、阴虱等感染，引起多种性病如淋病、梅毒、 尖锐湿疣、生殖器疱疹、软下疳、生殖道衣原体感染、阴虱等；妇科病如滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎、细菌性阴道炎、外阴瘙痒症、宫颈炎、宫颈糜烂等；肛周疾病如肛周脓肿、肛周外痔感染等。目前治疗此类疾病多为抗菌药、抗病毒药或抗真菌药，以及皮质类固醇激素、免疫抑制剂，这些药物虽有一时效果，但见效慢、停药后易复发；而且长期应用会引起诸多副作用。为了避免此类不良现象的发生，市场需要研制开发一种来源于天然、效果显著、无明显不良反应的治疗性病、妇科病和肛周疾病的外用制剂，以减轻患者痛苦。此类疾病种类多且患者众多，因此开发治疗此类疾病的外用制剂产品具有良好的临床应用前景，对患者是十分有益和必要的。银杏是我国珍贵的药用植物，银杏的叶、果和外种皮等皆具有药用开发价值。据 《本草纲目》记载，银杏性甘、苦、平、涩；有定喘止咳、止带浊、止痛之功；主治寒嗽痰喘、哮喘、小便频数、赤白带下、手足皲裂等。特别是近几十年来人们发现银杏叶中含有多种有效成分，主要有效成分为黄酮类和萜类内酯化合物，具有防治心脑血管疾病的功能。我国民间早有将银杏外种皮浸泡液作为农药使用，对蚜虫、稻螟虫等害虫有杀灭作用。银杏酚酸为无色或淡黄色的油状或粉末状物质，是存在于银杏叶、果和外种皮中一类具有重要生理活性的组分。本发明所涉及的银杏酚酸为烷基或烯基苯酚酸类物质，根据分子中苯环上是否连接有羧基，将其分为银杏酸和银杏酚两大类。银杏酸是水杨酸分子在苯环C6位上有饱和或不饱和长链烷基的系列化合物，按化学结构可分为5种，侧链R为 C13H27, C15H29, C15H31、C17H31 和 C17H33，对应的分子量分别为 320、346、348、372、374。银杏酚酸包括白果酸、氢化白果酸、白果新酸、白果亚酸、氢化白果亚酸、漆树酸、银杏酚、银杏二酚、白果醇等。银杏酚酸(银杏酸、银杏酚、银杏二酚)结构见下图。银杏酚ginkgoKcardanols) R C1fiHj9(C1s: 1)锒杏二酚bilolx^hydra&ilobol^cardots) ^sC17H幻{C 订:1}银杏酚酸的结构随着对银杏酚酸类物质研究的逐渐深入，发现银杏酚酸具有多种生物活性。已有研究表明，银杏酚酸对体外多种细菌有良好的抑制作用，能抑制部分农业病原菌的生长；银杏酚酸对肿瘤细胞株的生长有良好的抑制作用。有关银杏酚酸的提取、分析及体外抗菌活性、抗农业病原菌和病原虫、抗肿瘤活性已有文献报道。目前尚未见银杏酚酸在制备治疗性病、妇科病和肛周疾病的外用制剂中的用途的报道。因此，有关银杏酚酸外用制剂防治性病、妇科病和肛周疾病新型药物、消毒剂的研究开发，以及对银杏资源的充分开发利用，将产生巨大的社会和经济效益。
本发明的目的是提供银杏酚酸的新用途，即银杏酚酸在制备防治性病、妇科病和肛周疾病的外用制剂中的用途。它具有疗效显著、使用安全的特点。本发明的目的是这样实现的提供银杏酚酸在治疗性病、妇科病和肛周疾病中的用途。提供银杏酚酸在制备治疗性病、妇科病和肛周疾病的外用制剂中的用途。所述银杏酚酸包括银杏酸、银杏酚、银杏二酚等，可通过化学分离方法，从银杏的叶、果、外种皮、根茎等部位的提取物中得到；或对银杏叶、果、外种皮、根茎提取加工产物在提取加工过程中剩余的废料中重新回收；或从其它植物含有本类化合物的各部分提取物中获得；或通过化学合成的方法获得。本发明要求保护该类化合物及其药学上可接受的盐、 酯、溶剂化物、结晶形态等物质。所述所述性病为感染性、炎症性生殖器疾病，如细菌、病毒、真菌、衣原体、寄生虫等感染，包括淋病、梅毒、尖锐湿疣、生殖器疱疹、人乳头瘤病毒(HPV)感染、软下疳、生殖道衣原体感染、阴虱等多种性病。所述妇科病为滴虫性阴道炎、真菌性阴道炎、细菌性阴道炎、 外阴瘙痒症、宫颈炎、宫颈糜烂等。所述肛周疾病为肛周脓肿、肛周外痔感染等。还提供含有银杏酚酸的治疗性病、妇科病和肛周疾病的药物、消毒剂外用制剂，含有银杏酚酸0. 001-80%,以重量百分比计，以及药学上常用的外用制剂基质或外用制剂可接受的载体。更进一步的，含有银杏酚酸0.001-30%，以重量百分比计。更进一步的，含有银杏酚酸0. 5-20%，以重量百分比计。按上述重量比范围取主药银杏酚酸、药学上常用的外用制剂基质或可接受的载体制备得到银杏酚酸外用制剂；以及包含银杏酚酸和任何物质组合用于治疗性病、妇科病和肛周疾病的药物、消毒剂外用制剂。所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型，可以是OH1R^13H27 (013:0}
,COOH 2 R=ci$H (c15:1) ‘ 3 R=C11H31 (017:2)
4 H=C15H31 (C15;0)
卞 § R=C17H33 (01 :1)液体制剂、膏霜剂、凝胶剂、膜剂、洗剂、粉剂、气雾喷雾剂、栓剂、透皮吸收制剂等。本发明的有益效果是，药理药效学试验研究表明，本发明银杏酚酸外用制剂具有杀灭生殖器及周围常驻病原体，如淋球菌、阴道毛滴虫、白色念珠菌、衣原体、疱疹病毒、人乳头瘤病毒(HPV)、梅毒螺旋体、阴虱等，以及抗炎、止痛、止痒的显著作用。对多种性病和妇科病具有显著的治疗作用，且疗效优于常用抗生素或免疫抑制剂，无长期使用免疫抑制剂、 抗生素所致的副作用。局部刺激性实验研究表明本发明安全，无皮肤刺激、过敏等不良反应。临床多种性病、妇科病和肛周疾病病患者试用结果表明，本发明对此类疾病具有显著的治疗作用，有效率达100%，使用安全无副作用。

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软膏剂的制备取上述银杏酚酸浸膏40g，溶解于IOOml 95%乙醇溶液中，再向其中加入三乙醇胺50ml，加温至70°C。将石蜡300g、硬脂酸300g、丙二醇IOOml分别加入搅拌融化，补蒸馏水至足量lOOOg，搅拌均勻至膏状，即得淡黄色银杏酚酸软膏lOOOg，银杏酚酸含量为1.91% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。软膏剂制备工艺为公知公用的方法。实施例3:银杏叶中银杏酚酸提取工艺如下将银杏叶剪碎，放入粉碎机中将其粉碎。准确称取一定量经粉碎的银杏叶，加入料液比为1 6(W/V)的80%乙醇，在水浴温度60°C下， 搅拌浸提2次，每次提取时间4小时，(注加液后，烧杯口用保鲜膜封住，以防止乙醇的挥发)。浸提结束后，离心(5000转/分，15分钟)，取上清液。用真空旋转蒸发仪浓缩上清液，条件为温度^°C，压强0. 008-0. 009MPa，减压浓缩，并于60°C真空干燥，得银杏酚酸浸膏，性状为浅褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水。称重，并测定银杏酚酸含量(mg/g)。银杏酚酸含量测定同实施例1。浸膏中银杏酚酸含量为520. 53mg/g。酊剂的制备取上述银杏酚酸浸膏80g，溶解于600ml 95%乙醇溶液中，再向其中分别加入三乙醇胺50ml，丙二醇200ml搅拌，补95 %乙醇溶液至足量1000ml，即得淡黄色银杏酚酸酊剂1000ml，银杏酚酸含量为4. 16% (W/V)。分装于50支小管中，每支20ml。酊剂制备工艺为公知公用的方法。实施例4 银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏， 银杏酚酸含量为631. 82mg/g。取银杏酚酸浸膏80g，按实施例1凝胶剂制备工艺制备银杏酚酸凝胶1000g，银杏酚酸含量为5% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。实施例5 银杏果实白果中银杏酚酸提取工艺同实施例2，含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为517. 93mg/g。取银杏酚酸浸膏10g，按实施例2软膏剂制备工艺制备银杏酚酸软膏1000g，银杏酚酸含量为0.52% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。实施例6 银杏叶中银杏酚酸提取工艺同实施例3，含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为520. llmg/g。取银杏酚酸浸膏200g，按实施例3酊剂制备工艺制备银杏酚酸酊剂1000ml，银杏酚酸含量为10. 4% (W/V)。分装于50支小管中，每支20ml。实施例7 银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏， 银杏酚酸含量为622. 64mg/go取银杏酚酸浸膏300g，按实施例3酊剂制备工艺制备银杏酚酸酊剂1000ml，银杏酚酸含量为18. 68% (W/V)。分装于50支小管中，每支20ml。实施例8 银杏叶中银杏酚酸提取工艺同实施例3，含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为539. 55mg/g。取银杏酚酸浸膏200g，按实施例1凝胶剂制备工艺制备银杏酚酸凝胶1000g，银杏酚酸含量为10. 8% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。实施例9 银杏果外种皮中银杏酚酸提取工艺和含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为660. 77mg/g。取银杏酚酸浸膏500g，按实施例3酊剂制备工艺制备银杏酚酸酊剂1000ml，银杏酚酸含量为33% (W/V)。分装于50支小管中，每支20ml。实施例10 银杏果实白果中银杏酚酸提取工艺同实施例2，含量测定方法同实施例1，得银杏酚酸浸膏，银杏酚酸含量为451. 76mg/g。取银杏酚酸浸膏lg，按实施例2软膏剂制备工艺制备银杏酚酸软膏1000g，银杏酚酸含量为0.045% (W/W)。分装于50支小管中，每支20g。用以上方法制成的银杏酚酸外用制剂，进行相关的药理药效学试验、局部刺激性安全性评价实验和临床试用试验。下面是本发明的实验数据对大鼠细菌性阴道炎的治疗作用体重200_250g的雌性大鼠，从阴道注入金黄色葡萄球菌(3X105CFU/ml)和大肠杆菌(1. 6X 106CFU/ml)的混合菌液，菌液注入量为 0. 05ml/100g体重，隔日再接种1次。第5天及第7天分别取阴道分泌物做镜检、细菌培养， 并分别分离出金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，再分别接种于培养基中，经培养后，做菌株鉴定。镜检及菌株鉴定均为阳性者为感染成功的大鼠。取感染成功的大鼠随机分为3组，模型对照组、氧氟沙星软膏组和本发明银杏酚酸凝胶组，每组10只。本发明银杏酚酸凝胶组各只大鼠阴道内注入本发明银杏酚酸凝胶，模型对照组各只大鼠阴道内注入生理盐水，氧氟沙星软膏组各只大鼠阴道内注入氧氟沙星软膏，每天1次，连续5天。停药后第1天和第 4天取大鼠阴道分泌物进行鉴定，2次鉴定病原体均为阴性定为转阴。停药后第5天将大鼠解剖，取阴道标本进行肉眼观察；阴道标本按充血、水肿、出血3项指标进行评分无充血、 水肿、出血评0分；阴道粘膜尚平滑有轻度充血，评为1分；阴道粘膜尚平滑中度充血，可见点状出血点，评为2分；阴道粘膜不平滑，重度充血，可见大量出血点，组织轻度水肿，评为3 分。以模型对照组的分值定为100% (炎症程度)，药物组与模型对照组比较，可得出药物组炎症抑制率。用t检验对炎症评分进行统计，用x2检验对转阴率进行统计。结果表明(见表1)，本发明银杏酚酸凝胶对大鼠细菌性阴道炎具有显著的治疗作用，疗效优于氧氟沙星。表1.对大鼠细菌性阴道炎的治疗作用
分组炎症评分炎症抑制率(％) 转阴率(％)
模型对照 2. 51 ±0.8100
银杏酚酸 0.31 ±0.12"87.6580"
铽氣沙足 0.65±0.26m74. 1070**χ士s. n = 10.与模型组相比，*Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01.对大鼠真菌性阴道炎的治疗作用体重200_250g的雌性大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠35mg/kg麻醉，切除卵巢。手术10天后，大鼠皮下注射苯甲酸雌二醇10mg/kg，连续5天， 显微镜下阴道涂片，可见大量角化细胞，形状大而不规则，说明大鼠处于假动情期。以后每隔3日注射1次苯甲酸雌二醇，使大鼠维持在假动情期。将处于假动情期的大鼠，从阴道注射入2.5X106CFU/ml的白色念珠菌0. 1ml，用无菌棉球堵住阴道口，防止菌液流出，10天后镜检阴道分泌物，可见大鼠外阴明显红肿，并有大量白色分泌物，将分泌物接种于沙氏培养基中，经培养后，镜检均为阳性者即为感染成功的大鼠。取感染成功的大鼠随机分为3组，模型对照组、硝酸咪康唑乳膏组和本发明银杏酚酸软膏组，每组10只。本发明银杏酚酸软膏组各只大鼠阴道内注入本发明银杏酚酸软膏，模型对照组各只大鼠阴道内注入生理盐水，硝酸咪康唑乳膏组各只大鼠阴道内注入硝酸咪康唑乳膏，每天1次，连续7天。第4天给药前和第8天早晨取大鼠阴道分泌物在沙氏培养基中培养48小时，如无白色念珠菌生长则为治愈，反之，则未治愈。用X2检验对治愈率进行统计。结果表明(见表2)，本发明银杏酚酸软膏对大鼠真菌性阴道炎具有显著的治疗作用，疗效优于硝酸咪康唑。表2.对大鼠真菌性阴道炎的治疗作用


本发明涉及银杏酚酸在制备治疗性病、妇科病和肛周疾病的外用制剂中的用途。所述银杏酚酸包括银杏酸、银杏酚、银杏二酚等，可通过化学分离方法，从银杏的叶、果、外种皮、根茎等部位的提取物中得到。所述性病为感染性、炎症性生殖器疾病。含有银杏酚酸的治疗性病、妇科病和肛周疾病的药物、消毒剂外用制剂，含银杏酚酸0.001-80％(以重量百分比计)，以及药学上常用的外用制剂基质或可接受的载体；所述制剂是任何一种药剂学上所说的外用剂型。药理学试验研究表明，本发明具有杀灭生殖器及周围常驻病原体、抗炎、止痛、止痒的显著作用。临床试用表明本发明对多种性病、妇科病和肛周疾病疗效突出，有效率达100％，使用安全无副作用。