一种从粪便样本中收集结肠脱落细胞的装置制造方法 【技术领域】 [0001]本实用新型属于生物检测装置【技术领域】，具体涉及一种从粪便样本中收集结肠脱落细胞的装置。 [0002]在所有被推荐的结直肠癌的筛选方法中，如可屈性乙状结肠镜检查、结肠镜检查、螺旋CT结肠成像术、双重对比钡灌肠及粪便细胞检测等，其中粪便隐血试验、粪便免疫生化试验或粪便DNA测试是最为简便和便宜的方法，每项试验费用大约为五美元。然而，粪便细胞检查只能检测出30 - 40%的结直肠癌及10%的良性肿瘤。结肠镜检查(CS)是目前结直肠癌诊断的金标准并且可以检测出超过90%的结直肠癌和大约80%的巨大良性肿瘤。但是，检查结肠平均需要耗时大约一小时，花费约两百五十美元，而检查到需要切除的肿瘤或息肉则需要几小时并且花费五千美元以上。五千名训练有素的医生每天二十四小时不间断地在五千台结肠镜前工作，为整个美国范围内的结直肠癌合格人群做筛查工作大概需要耗时三年。因此，结肠镜作为一种初级筛查方法使用时很耗时，也很昂贵，是医疗资源的一个负担。长远看来，结肠镜检查对超过80%的没有罹患良恶性肿瘤的合格人群没有直接效益。 [0003]更重要的是，结肠镜检查伴有结肠穿孔(约1000例中发生I例)、脾损伤和死亡(约5000例中发生I例)的风险，全世界一般人群中使用结肠镜检查进行结直肠癌筛查的依从率仅约5%。甚至对于罹患结直肠癌的高风险个体，其中根据准则通过结肠镜检查进行筛查的仅有49%，其余18%则时常不按照准则进行筛查，33%甚至从未进行过筛查。对于其他被推荐的适合个体或集体筛查方法，由于它们本身的局限性、代价高、或者在结肠镜检查下有高辐射暴露的风险等因素，所预期获得的满意结果则更少。 [0004]基于以上事实，很显然，增强粪便细胞试验的敏感度来筛查结肠镜检查提示罹患结直肠癌高风险患者，可以显著提高目前筛查结直肠癌方法的效率。然而，增强粪便细胞试验的敏感度存在技术挑战性，原因有三:首先，尽管每天有成千上万的表层上皮细胞脱落至肠道中，但是它们与占粪便容量的99%以上的食物残渣、细菌、细胞碎屑及其他胃肠道器官的分泌产物混合在一起；其次，虽然据报道脱落细胞较多存在于粪便表面的粘液中，但这些粘液存在于粪便的任何片段中，如果有可能的话也很难收集到脱落细胞；再次，粪便的粘稠度、容量和内容物个体差异大。 [0005]尽管大量的方法已被试验室应用，包括采用密度梯度离心分离法从粪便表面获得均质样本或采用免疫磁珠分离技术获得样本，但上述的技术挑战性使得开发一种收集结肠脱落细胞的全球性的有效方法变得很困难。目前，临床最常见的粪便细胞收集方法是使用一根小棉签蘸取患者提供的粪便样本的粘液处蘸取一点粪便。这种方法存在三个缺点:其一，收集的样本一般占所有粪便表面区域的0.1%不到，因此，这不太可能精确地反映患者的实际情况；其二，对于高通量基础试验而言细胞数量不足，比如全DNA或RNA系列分析，或蛋白组学等；其三，未被加工的粪便样本伴有难闻气味而且存在播散传染性结肠细菌的风险。更重要的是，粪便样本需要及时送检及处理以防变质，否则会导致假阳性或假阴性结果O
[0006]因此，急需一种新的装置用于从粪便样本中收集结肠脱落细胞。



[0007]针对上述现有技术存在的问题，本实用新型提供一种从粪便样本中收集结肠脱落细胞的装置，在管子内设有一个滤网，增加了与粪便的大面积接触，通过挤压、上下摇晃以及缓冲液冲洗等步骤，它可有效从全部粪便样本中收集脱落细胞，细胞搜集率比目前的收集方法高大约1000倍，且结构简单，使用方便，可在研究和临床中广泛使用。
[0008]本实用新型提供一种从粪便样本中收集结肠脱落细胞的装置，是通过以下技术方案实现的:
[0009]一种从粪便样本中收集结肠脱落细胞的装置，包括一个座板和一根上下开口呈中空结构的管子，所述座板中央开设有一个孔，所述管子的上端部设有凸出边缘，所述管子通过所述凸出边缘固定在所述座板中央的孔上，所述管子的顶部和底部均设有可拆卸的盖子，所述管子内壁嵌有一漏斗状滤网。
[0010]所述滤网呈V字型放置。
[0011]所述过滤网的孔径介于300目-1000目，所述过滤网优选为金属材质。
[0012]所述滤网的底部开设有多个过滤孔。
[0013]所述滤网的外周围绕有弹性件来调节漏网底部开口的大小，弹性件可以是橡皮筋或者弹性拉绳。
[0014]所述管子与所述座板为活动连接。
[0015]所述管子上端部的凸出边缘与所述座板结合处还设有固定拉绳。
[0016]所述座板由纸质或者塑料制作而成。
[0017]所述管子的长度为10_30cm，直径为5-lOcm。
[0018]所述管子由透明塑料制作而成。
[0019]与现有技术相比，本实用新型提供一种从粪便样本中收集结肠脱落细胞的装置，具有以下优点:
[0020]1.它可有效从全部粪便样本中收集脱落细胞；
[0021]2.它的细胞搜集率比目前的收集方法高大约1000倍；
[0022]3.它可消除粪便样本的难闻气味并且杜绝传染性肠道细菌播散的风险；
[0023]4.它使用方便，粪便脱落细胞可以轻而易举地由患者本人方便时在家中收集，收集的细胞可以固定并可被安全运送，对延迟处理不敏感；
[0024]5.结构简单实用，可大大提高取样效率。




[0025]图1为本实用新型的结构示意图；
[0026]图2为本实用新型中的滤网的俯视图；
[0027]图3为本实用新型中的滤网的立体图；
[0028]图4为本实用新型的滤网置于管子内的结构示意图；
[0029]其中:I座板，2管子，3盖子，4盖子，5滤网，6弹性件。


[0030]下面结合对实用新型作进一步的详细说明，以助于本领域技术人员理解本实用新型。
[0031]实施例1
[0032]图1为本实用新型的结构示意图，如图1所示，一种从粪便样本中收集结肠脱落细胞的装置，包括一个座板I和一根上下开口呈中空结构的管子2，座板I的中央开设有一个孔，管子2的上端部设有凸出边缘，管子2通过凸出边缘固定在座板I中央的孔上，管子2的顶部和底部均设有可拆卸的盖子3、4;图4为本实用新型滤网置于管子内的结构示意图，如图4所示，管子2内壁嵌有一漏斗状滤网5。座板I可以是纸质的或者是塑料的，或者其他硬质材料制作而成的，座板I的大小以能卡置在坐便器上为宜。管子2由透明塑料制作而成，加上盖子3、4长度为16cm,直径为8cm。为了更好的将管子2固定在座板I上,管子2上端部的凸出边缘与座板I结合处还设有四条固定拉绳，将管子2绑定在座板I上。当然，管子2的直径和长度，可以根据实际需要常规选择，如直径可以设置为5cm、7cm或10cm，长度对应设置成10cm、20cm或30cm。
[0033]图2和图3分别为本实用新型中滤网的俯视图和立体图，滤网5是为金属纱网，优选金属材质，上面布满了细密的小孔，孔径可以是300目、500母或者1000目，可以根据需要选择，可以由普通的五金店中的细孔金属窗纱做成；如图2-图4所示，滤网5可以使用胶水粘结在管子2的内壁上，或者直接嵌入管子2内。滤网5的外周围绕有弹性件6来调节漏网5底部开口的大小，弹性件6可以是橡皮筋或者弹性拉绳。滤网5的底部开口在弹性件6的作用下张开或者收拢。
[0034]使用时，打开管子I顶部的盖子3和底部的盖子4，把座板I放在坐便器上，使用者可直接将粪便排入管子2内放置的一个呈V字形的滤网5中，当粪便通过滤网5时，调节滤网5外周围缠绕的弹性件6收缩滤网5，使粪便所有表面区域都会与过滤网5的粗糙的表面相接触。管子2与座板I为活动连接，当大便结束后，将管子2从座板上取下。然后盖上底部的盖子3，将管子2倒置上下颠倒后，管子I内滞留的粪便表面将进一步被迫通过滤网5的粗糙表面。滤网5的表面积很大，滞留在表面的粘液将被挤出滤网5之外进入管子2。
[0035]然后盖上底部的盖子4，从顶部的开口处往过滤网5内加入PBS溶液(磷酸盐缓冲溶液，PH为7左右)，盖上顶部的盖子3，用力摇晃管子2，将滞留在滤网5上的粘液连通结肠脱落细胞一起从滤网5上冲刷下来。冲洗过管子2后，将管子2及顶部的盖子3与底部的盖子分开，冲刷出来的溶液都聚集在底部的盖子4上。
[0036]将底部的盖子4里的溶液室温中下放置10-20分钟，弃去上清液，再将底部盖子里的盘状物混合PBS或10%的甲醛溶液，然后将其转移至一支15ml的密封管中。
[0037]用本实用新型装置收集的大量脱落细胞允许我们制作世界首块SDS凝胶，该凝胶源自从粪便收集的脱落细胞的完整蛋白。大部分蛋白保存很好，并且不同样本中蛋白的频率和规格很一致。实验步骤如下，样本准备:压平组织，用PBS缓冲液洗涤3次；然后用等量RIPA裂解液使之重新悬浮，冰上离心30分钟；旋转减速，上层清液40ul持续减少为SDS-PAGE。
[0038]从粪便样本收集的大量脱落细胞同样允许我们制作世界首块石蜡包埋块以行形态学的及免疫组化评估。脱落细胞的形态保存得很好，并且大部分脱落细胞表达了高水平的角蛋白-19 (CK-19)。脱落细胞常规分布为不同规格的丛簇。大面积的细胞丛簇(>100个独立细胞)中，细胞间的连接维持得很好。每个样本的石蜡块中预计有100-300万个脱落细胞。破碎的粪便细胞以10%甲醛固定并包埋在石蜡中。5~7 μ m厚的组织切片放置在带正电的载玻片上。把这些切片去石蜡处理及CK-19免疫染色。
[0039]本实用新型的装置应用在研究和临床中有如下优点:
[0040]1.它将允许收集肠腔表面大量的脱落细胞，不论正常的或是恶性的，这将显著有M于基础科学研究和临床诊断。
[0041]2.它将允许收集充足的肠腔表面脱落细胞以供评估，使用高通量基础试验如全DNA及RNA序列分析或蛋白组学等。这些鉴定试验在阐明脱落细胞的全部分子、生化资料方面及将正常细胞区分于肿瘤细胞方面远远有效于传统方法。
[0042]3.它将显著有益于收集和识别传染性结肠细菌和毒素，并且有助于结肠微生物的分析。
[0043]4.它可应用于早期结直肠癌切除后的脱落细胞收集，来监测治疗反馈及早期复发。
[0044]上述实施例，只是本实用新型的较佳实施例，并非用来限制本实用新型的实施范围，故凡以本实用新型权利要求所述的特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括在本实用新型权利要求范围之内。