专利名称：一种基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂的制作方法恶性肿瘤是威胁人类健康的严重疾病。药物化疗在恶性肿瘤的治疗中占有极其重要的地位。目前，临床所用的抗肿瘤药物一般为小分子药物，实践显示，其在应用时尚存在着一些严重的缺陷，如缺乏选择性，在杀死肿瘤细胞的同时对正常细胞也有较大的毒副作用；代谢快，体内消除快，导致在体循环中的半衰期短；长期使用肿瘤细胞产生耐药性等坐寸ο对于能特异性靶向肿瘤组织，提高疗效并能尽量降低毒副作用的治疗药物的开发具有非常重要的意义和广阔的应用前景。有研究采用具有精确和可调控的结构，良好的水溶性，可修饰的表面基团的树枝状聚合物(Dendr imer )为载体,利用肿瘤的EPR效应 (Enhanced permeability and retention effect)可以被动富集于肿瘤组织；利用聚乙二醇(PEG)对树枝状聚合物载体修饰能进一步提高载体系统的分子量，增强EPR效应，增强载体亲水性，利于躲避巨噬细胞的识别，延长体内循环时间，从而有利于药物在肿瘤部位的蓄积。近年来，通过配体-受体介导的主动靶向药物传递系统已经成为肿瘤治疗研究的热点。 RGD多肽为整合素ανβ 3天然配体中的共有特征序列。研究显示，整合素ανβ3在多种恶性肿瘤细胞(胶质母细胞瘤、黑色素瘤、骨肉瘤、成神经细胞瘤、乳腺癌等)和新生血管内皮细胞膜高表达，而在成熟血管内皮细胞和绝大多数正常器官无表达或几乎不被探及。研究还显示，环状RGD多肽较线性多肽具有更强的结构稳定性和受体亲和力，表现出更高的临床应用潜力。此外，利用肿瘤细胞内涵体和溶酶体的pH偏酸性特征，在小分子抗肿瘤药物和聚合物之间引入中性条件下稳定而对酸性敏感的化学键，使得形成的纳米前药在体内正常组织器官的中性环境下稳定不释药，故可降低对正常组织器官的毒副作用，而在肿瘤部位通过内吞作用进入肿瘤细胞,在内涵体/溶酶体偏酸性环境下释放母体药物,进而发挥高效低毒的抗肿瘤作用。缓释植入剂是一种新型的药物剂型，该剂型将药物包埋于某种基质或载体辅料中，经手术植入体内或皮下，或经穿刺倒入皮下的给药系统。此种给药系统能够使得药物浓度在给药部位长期稳定，提高药物的生物利用度，从而减少药物用量和降低毒副作用，因此近年来倍受研究者的关注。目前已经上市和有研究报导的抗肿瘤缓释植入剂所含药物多为小分子抗肿瘤化疗药物，其释放的药物在肿瘤部位的富集浓度和滞留时间，以及对正常组织的毒副作用都有待进一步的提闻。
本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂及其制备方法。本发明的缓释植入剂由基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药、缓释辅料和调节剂组成，能于局部释药达60天左右，通过前药在体内缓慢释放同时具有主动、被动靶向作用的抗肿瘤纳米前药，保持局部长效用药，能大幅度降低全身性的毒副作用。具体而言，本发明的基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂，其特征在于，由下述重量百分比的原料组成，树枝状抗肿瘤纳米前药 1% 25%缓释辅料70% 95%调节剂O 5%
本发明中，树枝状抗肿瘤纳米前药优选基于树枝状聚合物的阿霉素纳米前药；
本发明中，缓释辅料是指可生物降解的聚合物；
本发明中，调节剂是指调节释放的水溶性物质、疏水性物质及调节制剂成型的物质。本发明中，树枝状抗肿瘤纳米前药由以下四个功能部分组成1)主动靶向头基 RGD多肽；2)连接靶向头基和树枝状聚合物的聚乙二醇(PEG);3)树枝状聚合物；4)通过酸敏感化学键连接到树枝状聚合物表面的抗肿瘤药物阿霉素(D0X)，该树枝状抗肿瘤纳米前药的通式标示为
RGD-PEG-Dendrimer-DOX
其中，RGD为RGDyC，RGDyK，RGDfC或RGDfK等含有RGD序列的环状多肽，其结构中含有游离巯基或游离氨基；
PEG分子量为1000-10000Da的双功能的聚乙二醇，其一端含有马来酰亚胺基，另一端含有羟基琥珀酰亚胺活化酯；
Dendrimer为表面带氨基的树枝状聚合物，如整数代的聚酰胺_胺树枝状聚合物 (PAMAM)，聚丙烯亚胺树枝状聚合物(PPI)和树枝状聚赖氨酸(PLL)等；
DOX为阿霉素。本发明中，所采用的缓释辅料选自聚乳酸(PLA)和聚乳酸-聚羟乙酸共聚物 (PLGA)的混合物或完全为聚乳酸-聚羟乙酸，所述聚乳酸(PLA)与聚乳酸-聚羟乙酸共聚物(PLGA)的重量配比为O 75%，本发明的一个实施例中优选重量配比为PLA =PLGA= 15 50% ;所述两种辅料的分子量皆为10000 25000。本发明中，所采用的调节剂选自表面活性剂、盐、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠或胶原蛋白中的一种或几种的组合，本发明的一个实施例中优选见有助悬和调节释放作用的物质，如聚乙二醇。本发明的缓释植入剂通过将基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药和其他组分混合溶于合适溶剂，经过不完全挥发、特定模具成型、完全挥发干燥制备而成植入体内肿瘤病灶部位的药片或药粒。本发明的制备方法为溶剂分时段挥发干燥法，第一时段挥去绝大部分溶剂，模具成型后再挥去剩余溶剂并干燥，其包括步骤
(1)将树枝状聚合物抗肿瘤纳米前药、缓释辅料和调节剂溶于适当的有机及无机溶
剂；
(2)将树枝状聚合物抗肿瘤纳米前药、缓释辅料和调节剂的溶液在适当的环境条件下搅拌挥去大部分溶剂；(3)将一定稠度的树枝状聚合物抗肿瘤纳米前药、缓释辅料和调节剂软膏状物用特定模具成型，挥去剩下的有机溶剂和干燥。本发明的基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂优选经瘤内或瘤周放
置给药。本发明的基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂能用于治疗脑胶质瘤、 黑色素瘤、乳腺癌、骨肉瘤、成神经细胞瘤、肺癌、前列腺癌或膀胱癌，优选用于治疗脑胶质瘤、黑色素瘤、乳腺癌，经瘤内或瘤周放置给药。本发明的基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂经体外实验，结果显示，能于局部释药达60天左右，通过前药在体内缓慢释放同时具有主动、被动靶向作用的抗肿瘤纳米前药，保持局部长效用药，能大幅度降低全身性的毒副作用。为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本发明的基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。


图I为基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂体外释放曲线。图2为基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药对脑胶质瘤(C6)细胞毒性，其中 RGD-PPCD为基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药。

在净化台上，用2ml 二氯甲烷溶解400mg PLGA(75/25，分子量10000 25000)，将IOmg 树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药溶于适量的去离子水，用定量甲醇稀释后加入PLGA溶液， 混合后倒入容器中，室温，搅拌挥去大部分溶剂，用特制模具成型。35°C干燥，出模，检验后灭菌封装。实施例2
在净化台上，用2ml 二氯甲烷溶解400mg PLGA/PLA: 3/1 (75/25,分子量10000 25000) 混合物，将IOmg树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药溶于适量的去离子水，用定量甲醇稀释后加入PLGA/PLA溶液，混合后倒入容器中，室温，搅拌挥去大部分溶剂，用特制模具成型。 35°C干燥，出模，检验后灭菌封装。实施例3
在净化台上，用2ml 二氯甲烷溶解400mg PLGA/PLA: 1/1 (75/25,分子量10000 25000) 混合物，将IOmg树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药溶于适量的去离子水，用定量甲醇稀释后加入PLGA/PLA溶液，混合后倒入容器中，室温，搅拌挥去大部分溶剂，用特制模具成型。 35°C干燥，出模，检验后灭菌封装。实施例4
在净化台上，用2ml 二氯甲烷溶解400mg PLGA/PLA: 1/3 (75/25,分子量10000 25000) 混合物，将IOmg树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药溶于适量的去离子水，用定量甲醇稀释后
5加入PLGA/PLA溶液，混合后倒入容器中，室温，搅拌挥去大部分溶剂，用特制模具成型。 35°C干燥，出模，检验后灭菌封装。实施例5
在净化台上，用2ml 二氯甲烷溶解400mg PLGA(75/25，分子量10000 25000)，将IOmg 树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药溶于适量的去离子水，用定量甲醇稀释后加入IOmg聚乙二醇(PEG4000)待溶解后加至PLGA溶液，混合后倒入容器中，室温，搅拌挥去大部分溶剂， 用特制模具成型。35°C干燥，出模，检验后灭菌封装。实施例6
在净化台上，用2ml 二氯甲烷溶解400mg PLGA/PLA:3/1 (75/25,分子量10000 25000) 混合物，将IOmg树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药溶于适量的去离子水，用定量甲醇稀释后加入IOmg聚乙二醇(PEG4000)待溶解后加至PLGA溶液，混合后倒入容器中，室温，搅拌挥去大部分溶剂，用特制模具成型。35°C干燥，出模，检验后灭菌封装。实施例7
在净化台上，用2ml 二氯甲烷溶解400mg PLGA/PLA: 1/1 (75/25,分子量10000 25000) 混合物，将IOmg树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药溶于适量的去离子水，用定量甲醇稀释后加入IOmg聚乙二醇(PEG4000)待溶解后加至PLGA溶液，混合后倒入容器中，室温，搅拌挥去大部分溶剂，用特制模具成型。35°C干燥，出模，检验后灭菌封装。实施例8
在净化台上，用2ml 二氯甲烷溶解400mg PLGA/PLA: 1/3 (75/25,分子量10000 25000) 混合物，将IOmg树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药溶于适量的去离子水，用定量甲醇稀释后加入IOmg聚乙二醇(PEG4000)待溶解后加至PLGA溶液，混合后倒入容器中，室温，搅拌挥去大部分溶剂，用特制模具成型。35°C干燥，出模，检验后灭菌封装。实施例9 :缓释植入剂的体外释放研究
将按上述实施例3、4、5条件制备的缓释植入剂放入装有pH7. 4的模拟生理条件的磷酸盐缓冲液中，置振荡器上37°C恒温90rpm振荡，于特等时间点取样，HPLC测释放DOX量，计算释放百分数。实施例10 :基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药对于脑胶质瘤(C6)细胞的毒性研究
将C6细胞接种于96空培养板，每孔O. 5 X IO4个，分别于不容浓度的药物孵育60小时， 然后加入MTT试剂，再孵育4h，去除培养液，加入O. Iml 二甲亚砜(DMSO)，37°C振荡lOmin， 于570nm测各孔吸光度。


本发明属于生物医药技术和纳米医学技术领域，涉及一种基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药缓释植入剂及其制备方法和应用。本发明的缓释植入剂由基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药、缓释辅料和调节剂通过将基于树枝状聚合物的抗肿瘤纳米前药和其他组分混合溶于合适溶剂，经过不完全挥发、特定模具成型、完全挥发干燥制成植入体内肿瘤病灶部位的药片或药粒，能于局部释药达60天左右，通过前药在体内缓慢释放同时具有主动、被动靶向作用的抗肿瘤纳米前药，保持局部长效用药，能大幅度降低全身性的毒副作用。