一种以核桃粕为原料制备降压肽的方法 [0002]高血压是一种常见的心脑血管疾病,会引起心血管、大脑、肾脏的病变。降压肽是一种ACE抑制剂,通常用于高血压患者的治疗。目前,对高血压患者的治疗通常使用化学合成的药物,然而,这些合成药物有一些副作用,包括咳嗽和皮瘆。 [0003]食源性降压肽来源于天然植物,无副作用,易被人体吸收,且食物蛋白来源丰富,方便易得,用食物蛋白来生产活性肽,成本较低、安全性高、适合大规模生产。来源于食品的降压肽只对高血压患者起到降压的作用,对血压正常者无降压作用,不会产生降压过度的问题。这些肽是用食用级的酶在温和条件下制得的,其安全性极高,无毒副作用。除了有降压的功能外,食品降压肽还同时具有抗氧化、促消化、降血糖、抗血小板凝集、增强人体免疫力等作用,此外,还具有较高的热稳定性、水溶性等优点,可作为功能因子添加到饮料、食品中去,市场前景极好。 [0004]目前,关于核桃柏为原料制备的降压肽尚未见报道。我国核桃的种植和产量居世界首位。核桃柏是核桃经过提取油后的副产物,含有29.65%蛋白质,提油后的核桃柏多数被用作饲料或丢弃,资源造成了一定的浪费,核桃降压肽的制备可以促进核桃的深加工,实现资源的综合利用。
[0005]本发明的目的在于提供一种原料来源广泛、制造成本低、高附加值、降血压性高的核桃降压肽的制备方法。
[0006]为了实现上述目的,本发明采用以下技术措施:
一种以核桃柏为原料制备降压肽的方法,其步骤如下:
1、以核柏为原料,按照5?10%(W/V)比例加入95%乙醇,搅拌,过滤,把滤饼烘干挥除溶剂。滤饼按照1:10-1:30 (W/V)的料液比加水配制蛋白质溶液,用氢氧化钠溶液调节蛋白液的 pH 值到 10.0-11.0,保温 500C -53。。,搅拌 1.0-1.5h 后于 5000-7000r/min 离心10_15min,取上清液,调节 pH 至 4.0-5.0,揽拌 1-1.5h,于 5000-7000r/min 离心 10_15min,收集沉淀并水洗,调节pH至中性后冻干;
2、用缓冲溶液配制成底物质量浓度为10-20g/L的核桃蛋白溶液,搅拌均匀,调节PH8.0-9.0,然后加碱性蛋白酶4000-10000U/g,控制溶液温度为35_65°C水解l_4h,水解过程中保持pH恒定,酶解液采用90-95°C加热煮沸lOmin,然后调节pH5.5-7.5,然后加风味蛋白酶4000-10000U/g,控制溶液温度35-65°C水解l_4h,水解过程中保持pH恒定,酶解液采用90?95°C煮沸灭酶lOmin,然后于5000-8000r/min离心10_15min,取上清液,调节pH为中性; 3、将上述滤液先用孔径为0.45um的微孔滤膜进行过滤,然后用l_3KDa超滤膜对过滤好的酶解液进行超滤,将滤液用DA201-C大孔树脂脱盐后浓缩,最后干燥。
[0007]本发明所使用的碱性蛋白酶和风味蛋白酶的活力分别为:7.1XlO4 U/g,
2.0XlO4 U/g ο
[0008]与现有技术相比,本发明方法的优点和有益效益如下:
1、原料为一种食品工业副产物核桃柏,酶解后其应用价值和加工性能大大增加,可以提高核桃的附加值;
2、实施设备简便且经济,适合规模化工业生产;
3、采用本发明的膜分离技术,对液态物料进行分离、浓缩和纯化,均在常温下操作、无相态变化、高效节能,并且生产过程中不产生污染;
4、本发明生产周期短、成本低、不产生任何有毒有害物质,安全,无毒副作用,可广泛用于化妆品、食品、药品等领域。
[0009]以下结合实施例对本发明的具体实施作进一步说明,但本发明的实施和保护范围不限于此:
实施例1
称取2g的核桃蛋白,用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5,定容到100ml,搅拌均匀,按加酶量3600U/g添加碱性蛋白酶,在55°C水浴锅中水解2h,并保持pH恒定,酶解液于水浴锅中90°C 1min处理,然后调节pH为6.5按加酶量2400U/g添加风味蛋白酶,保持溶液50°C水解3h,并保持pH恒定,酶解液于90°C加热lOmin,酶解液的ACE抑制率为64.06%。
[0010]实施例2
称取1g的核桃蛋白,用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5,定容到500ml,搅拌均匀,按加酶量5000U/g添加碱性蛋白酶,保持溶液温度为55°C下水解3h,并保持pH恒定,酶解液在90°C煮沸15min,然后调节pH为6.5,加酶量3000U/g添加风味蛋白酶,保持溶液温度为50°C水解3.5h,并保持pH恒定,酶解液于90°C加热lOmin,酶解液的ACE抑制率为69.91%o
[0011]实施例3
称取4g的核桃蛋白,用硼酸-硼砂缓冲溶液调节其pH为8.5,定容到100ml,搅拌均匀,按加酶量2000U/g添加一种蛋白酶,保持溶液温度为55°C水解2h,并保持pH恒定,酶解液在沸水加热1min灭酶,然后调节pH为6.5,按加酶量4500U/g添加另一种蛋白酶,保持溶液温度为50°C水解3h,并保持pH恒定,酶解液于90°C加热lOmin,酶解液的ACE抑制率为71.72%。
[0012] 申请人:声明,本发明通过上述实施例来说明本发明的详细特征以及方法,但本发明并不局限于上述详细特征以及方法,即不意味着本发明必须依赖上述详细特征以及方法才能实施。所属【技术领域】的技术人员应该明了,对本发明的任何改进,对本发明所选用材料和步骤的等效替换以及辅助材料和步骤的增加、具体方式的选择等,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
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