专利名称：酵母葡聚糖注射液提高奶牛口蹄疫疫苗免疫效力的应用的制作方法酵母葡聚糖是一种从酵母中提取并精制而成的纯天然活性免疫调节剂，能有效地 激活巨噬细胞，并诱导机体产生一系列的免疫应答反应，从而提高机体的免疫功能。此外， 葡聚糖具有清除游离基、抗辐射、抗肿瘤、溶解胆固醇、预防高脂血症作用及病毒、真菌、细 菌等引起的感染，故广泛用于医药、食品、化妆品、饲料等行业。从酵母细胞壁提取得到的酵母葡聚糖是不溶于水的，水不溶性酵母葡聚糖添加在 饲料中，可促进动物的免疫器官发育，增加淋巴细胞数量，增强体液免疫，对动物具有较好 的防病、治病作用。近年来，通过有关专家的试验研究，经硫酸化、羧甲基和乙酰化等化学修 饰方式，将水不溶性酵母葡聚糖制成水溶性葡聚糖。水溶性葡聚糖的研制成功，使酵母葡聚 糖不仅能通过口服，也可通过注射途径给动物应用，这将大大拓宽酵母葡聚糖的应用范围 和明显提高其生物利用度。由于水溶性酵母葡聚糖对哺乳动物的特异性和非特异性免疫功能均具有良好的 刺激作用，可提高机体免疫系统的抗病能力，且具有用量少、纯天然、无残留等优点，所以， 水溶性酵母葡聚糖在动物养殖业中将会具有广阔的应用前景。目前已有羧甲基水溶性酵母 葡聚糖产品的出售，主要作为生物添加剂应用于化妆品的生产，但尚未见到有关将水溶性 酵母葡聚糖作为注射液给哺乳动物应用的报道，更没有将其作为免疫增强剂用在提高奶牛 口蹄疫疫苗免疫效力的研究报道。口蹄疫是口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病，由于该疫病具有快 速、大面积传播的特性，每次流行都造成较大的经济损失，而且人畜共患，并且有较强的变 异性，因此引起世界各国的高度重视，国际兽疫局将其列为A类传染病的首位。我国也将其 列为一类传染病的第一位。按照我国政府有关规定，如发现本病的流行，需采取扑杀病畜、 销毁病尸和封锁、隔离、消毒疫区等一系列综合性防疫措施。根据国内外动物疫病防疫的实践经验，结合我国的具体国情，应用疫苗进行预防 接种，是提高动物疫病防疫水平最为重要的措施之一。口蹄疫油乳剂灭活苗不含活病毒，具 有安全性好、免疫持续期长等优点，是预防猪、牛、羊等口蹄疫流行的有效手段。但是该疫苗 是灭活苗，仅能刺激机体产生体液免疫，对细胞免疫刺激作用很小，其免疫效果受到一定影 响。本发明主要目的是在现有疫苗免疫的基础上，给牛接种口蹄疫油乳剂灭活苗的同 时，将酵母葡聚糖增强剂通过注射途径给牛应用，旨在通过酵母葡聚糖的免疫增强作用来 启动和调节牛自身的非特异性免疫功能，并特异地提高牛口蹄疫灭活苗的抗体水平，从而 增强该疫苗的免疫效力，最终通过牛自身免疫抵抗力的增强和灭活苗免疫效果的提高，来 较好地预防口蹄疫在我国的发生和流行，这对防止口蹄疫这一重大疫病的流行具有十分重要的实际生产意义。本发明通过开发新型酵母葡聚糖免疫增强剂注射液，不仅可增强牛口蹄疫灭活苗 的免疫效力，也可为增强牛用其他疫苗的免疫效力奠定基础，进而提高牛群对疫病的抵抗 能力，以保障养牛业的健康发展，同时也可弥补现有佐剂的不足，减少动物性食品的化学药 物残留，这对保障食品安全和人类健康，具有重要的现实意义。
本发明公开了酵母葡聚糖注射液在增强奶牛细胞免疫功能方面的应用，其中的酵 母葡聚糖注射液为2% 6%羧甲基酵母葡聚糖水溶液。本发明所述的增强奶牛细胞免疫功能指的是提高奶牛的淋巴细胞转化率。本发明进一步公开了酵母葡聚糖注射液在提高奶牛口蹄疫灭活苗抗体水平方面 的应用，其中的酵母葡聚糖注射液为2 % 6 %的羧甲基葡聚糖水溶液。本发明主要目的是在现有疫苗免疫的基础上，给奶牛接种口蹄疫油乳剂灭活苗的 同时，将酵母葡聚糖增强剂通过后海穴或颈部皮下途径给奶牛注射，旨在通过酵母葡聚糖 的免疫增强作用来启动和调节牛自身的非特异性免疫功能，并特异地提高奶牛口蹄疫灭活 苗的抗体水平，从而增强该疫苗的免疫效力，最终通过牛自身免疫抵抗力的增强和灭活苗 免疫效果的提高，来较好地预防口蹄疫在我国的发生，这对防止口蹄疫这一重大疫病的流 行具有十分重要的实际生产意义。本发明在给奶牛注射口蹄疫油乳剂灭活苗的同时，注射适合剂量的酵母葡聚糖溶 液可增强灭活苗对体液免疫的刺激作用，具有安全性好、免疫持续期延长等特点，可以更有 效的起到预防牛口蹄疫流行的作用。本发明通过开发新型酵母葡聚糖免疫增强剂，不仅可增强牛口蹄疫灭活苗的免疫 效力，也可为增强牛用其他疫苗的免疫效力奠定基础，进而提高牛群对疫病的抵抗能力，以 保障养牛业的健康发展，同时也可弥补现有灭活苗对激活细胞免疫功能较弱的不足，减少 动物性食品的化学药物残留，这对保障食品安全和人类健康，具有重要的现实意义。本发明的具体实验数据及结果如下试验一、酵母葡聚糖注射液对奶牛细胞免疫功能的影响本试验研究了不同浓度的水溶性酵母葡聚糖注射液对奶牛的安全性和细胞免疫 功能的影响，为酵母葡聚糖作为免疫增强剂在动物临床上应用提供科学依据。1材料与方法1.1 材料1. 1. 1酵母葡聚糖羧甲基酵母葡聚糖(购于安琪酵母股份有限公司)。1. 1.2试验动物育成母奶牛(体重400 450kg/头)，15头，天津某奶牛场饲养 的临配种前的育成母奶牛。2. 2 方法1. 2. 1酵母葡聚糖注射液的配制将羧甲基葡聚糖用注射用水分别配制成2% 6%的水溶液备用。1.2. 2试验分组将15头健康育成母奶牛分成5组，每组3头，1 4组按120mg/ 头、200mg/头、280mg/头、360mg/头剂量，分别经后海穴注射5 6ml/头酵母葡聚糖注射液；第4组，仅注射生理盐水作为空白对照组。1. 2. 3临床观察奶牛注射酵母葡聚糖注射液后，观察它们的临床表现和体温变 化，并详细记录。1.2. 4采血和检测按照常规方法饲养奶牛。奶牛在试验前和注射后的4d、8d、 12d静脉采血，加肝素制成抗凝血，用MTT法测定淋巴细胞的转化率。2结果与分析2. 1酵母葡聚糖注射液对奶牛的安全性在奶牛试验前一天和注射药物后，对所有被试牛连续测温4d，其体温均正常；注 射部位无肿胀、发炎、化脓等异常反应；饮食、活动如试验前，无明显变化。说明奶牛注射 360mg/头大剂量的酵母葡聚糖注射液是安全的。2. 2酵母葡聚糖注射液对奶牛淋巴细胞转化率的影响在奶牛试验前、药物注射后的4d、8d、12d，测定各组外周血淋巴细胞转化率试验结 果见表1-1。表1-1表明在注射第4d时，4组所有奶牛淋巴细胞转化值均比注射前有所上 升，4组之间差异不显著；在注射第8d时，注射酵母葡聚糖注射液的4组奶牛淋巴细胞转化 值达到最高峰，其中200mg/头剂量组淋巴细胞转化值最高，与注射生理盐水的空白对照组 比较差异极显著；在注射后12d，所有注射葡聚糖免疫增强注射剂奶牛的淋巴细胞转化值 均出现下降，略高于试验前的水平，4组之间差异不显著。表1-1注射不同剂量羧甲基葡聚糖免疫增强注射剂奶牛的淋巴细胞转化值本发明公开了酵母葡聚糖注射液在提高奶牛口蹄疫疫苗免疫效力方面的应用。同时本发明也公开了酵母葡聚糖注射液在增强奶牛细胞免疫功能方面的应用，其中的酵母葡聚糖注射液为2％～6％羧甲基酵母葡聚糖水溶液。使用本发明制备的酵母葡聚糖注射液，安全、无不良反应，能有效增强奶牛机体细胞免疫功能和提高接种口蹄疫灭活苗奶牛的抗体水平，增强动物抗病能力。