百合花瓣的抗氧化物质提取方法[0002]随着社会的发展，科学的进步，花卉资源的开发越来越受到人们的重视，花卉的食用、药用保健方面也倍受青睐。我国也自古有食用花卉的传统，不少少数民族都有取食花卉的习惯，食用花卉种类多达200多种。食用的方式主要以:制作菜肴，入药，制茶，调酒，加工饮料等。但针对众多食用花卉资源的物质深入研究，仍较少。其中对于牡丹花瓣、芍药花瓣、巴西蕉花蕾、月季花瓣等都有许多研究，但对百合花瓣的研究较少。百合作为药食同源最先见于《神农本草经》。1984年，我国卫生部首批颁布的药食兼用植物，百合便是其中之一，李明河等、吴汉斌等、郭戎等对百合鳞茎的药用和营养成分做了研究，但至今鲜有百合花瓣抗氧化活性物质的研究报道。目前上海相宜本草化妆品股份有限公司推出了百合系列产品，其部分产品所含保湿、抗氧化物质就有从百合鳞片中提取。[0003]现在渐渐流行把花做成各式各样的食品，百合食品也很流行，无论是花瓣还是鳞茎。烹饪百合的方式也是多种多样的，除了因它含有一定的营养价值，还因它含类黄酮、维生素C、总酚以及花青素苷等天然抗氧化物质，它们能抑制细胞内氧化反应的发生，减轻自由基对脂、脂蛋白和DNA的氧化损伤，对细胞抗衰老起着很大的作用。[0004]近年来针 对牡丹、月季、芍药、菊花等常见观赏花卉的营养品质或抗氧化活性分析都常有研究，百合亦是常见观赏花卉之一，目前关于百合鳞茎的营养成分和抗氧化活性物质的研究有报道，鳞茎的开发利用越来越受到重视，但是鲜有针对百合花瓣抗氧化活性物质的研究。而且百合花瓣的抗氧化活性物质提取影响因素较多，有些因素是本领域技术人员尚未意识到的，如何能够有效的提取百合花瓣的抗氧化物质是本领域技术人员亟待解决的技术问题。
[0005]为了提高百合花瓣的抗氧化物质提取效率，本发明提供一种百合花瓣的抗氧化物质提取方法。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案:[0006]本发明涉及一种百合花瓣的抗氧化物质提取方法，其特征在于包括如下步骤:[0007]称取百合花瓣，放入研钵，按1:5的料液比加入80%的乙醇研磨提取，然后放入摇床Ih浸提,浸提后1000Orpm离心10min取上清液。
[0008]在本发明的一个优选实施方式中，所述的百合花瓣为大百合的盛花期花瓣。
[0009]在本发明的另一个优选实施方式中，所述的百合花瓣为‘白天使’百合的现蕾期、初开期、盛花期和/或谢花期的花瓣。
[0010]通过本发明的方法，能够有效的得到含抗氧化剂、自由基清除剂的百合花瓣提取物。
[0011 ] 下面结合实施例对本发明进一步说明。
[0012]实施例1
[0013]I材料和方法
[0014]1.1 材料
[0015]供试材料为大百合、宜昌百合、‘白天使’百合，种植于四川农业大学农场。对百合花期分阶段采样，采摘现蕾期(外轮花瓣2/3显色)、初开期(外轮花瓣展开)、盛花期(全部花瓣展开I~2d)、谢花期(柱头开始变色I~2d) 4个阶段新鲜内外轮花瓣，将各样内外轮花瓣的上部、中部、基部切块混合备用。重复3次。
[0016]1.2 方法
[0017]1.2.1类黄酮提取与含量测定
[0018]取Ig样品，用10ml70%乙醇研磨，研磨后放入三角瓶中于摇床浸提2h，浸提后用离心机按照1000Or.mirT1离心10min取得上清液,现配现用。取3mL提取液于Eppendorf管中，用30%乙醇补足至5ml，混匀，各加入0.3mlNaN02 (5%, W/V)，混匀后静置5分钟，加入 0.3mlAl (NO3)3(10%,ff/V)，混匀后静置 6min,加入 5% (ff/V)NaOH4ml，再加入 0.4ml30%乙醇使总体积为10ml，混匀后静置lOmin，以30%乙醇溶液作为空白，在波长510nm处测吸光值，计算类黄酮含量，以mg/100g的芦丁为单位(以鲜质量计)，且以芦丁做标曲Y = 5.8027x-0.0031，相关系数 R2 = 0.9993。
[0019]1.2.2维生素C提取及含量的测定
[0020]称取5g样品，放入组织捣碎机中，加IOmll%草酸，迅速捣成匀浆。称4ml浆状样品，用浸提剂将样品移入50ml容量瓶，并稀释至刻度，摇匀过滤。若滤液有色，可按每克样品加0.49白陶土脱色后再过滤。维生素C含量的测定采用2，6-二氯靛酚滴定法。取IOml研磨液于50ml三角瓶中，用2，6- 二氯靛酚溶液滴定至溶液呈粉红色15s不褪色为止。
[0021]1.2.3花青素苷提取及含量测定
[0022]称取百合花瓣混合样1.5g，用0.lmol/L盐酸乙醇溶液反复浸提4次，每次lh，直至花瓣退至近无色，过滤，并定容至25ml容量瓶中。以0.lmol/L盐酸乙醇溶液做参比液，取适量提取液测定在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。花青素的光密度值:D =(D530-D620)-0.1 (D650-D620)。总花青苷素含量(nmol.g-1) = (D/ ε ) (V/m) X IO6 (D:花青素在530nm波长下的光密度，ε:花青素摩尔消光系数4.62Χ104, V:提取液总体积(ml)，m:取样重量g)。
[0023]1.2.4总酚的提取
[0024]从混合的花瓣中称取lg，重复三份,放入研钵,按1:5的料液比加入80%的乙醇研磨提取，然后放入摇床Ih浸提,浸提后lOOOOrmirT1离心10min取上清液，用于总酚和抗氧化能力测定。
[0025]1.2.5总酚含量的测定
[0026]总酚物质含量的测定按照Folin-Denis法，提取液稀释2倍，取ImL稀释提取液于Eppendorf管中，分别加入0.5mL福林酚，3mL2% Na2CO3溶液，室温避光2h后，以80%乙醇为对照。用紫外分光光度计测定765nm波长处的吸光度，计算总酚含量_，以mg/100g的没食子酸为标准物，以标准没食子酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，做出标准曲线:y =17.817x+0.0466，相关系数 R2 = 0.9916。
[0027]1.2.6FRAP (ferricreducingantioxidantpower,铁还原氧化能力)法测定总抗氧化能力
[0028]取20 μ L上清液，加入1.8mLTPTZ工作液(由0.3mol/L醋酸盐缓冲液25mL，IOmmoI/LTPTZ 溶液 2.5mL, 20mmol/LFeCl3 溶液 2.5mL 组成)，混匀后 37°C反应 30min，测定593nm波长处的吸光度。以1.0mmol/LFeS04为标准，样品抗氧化活性(FRAP值)以达到同样吸光度所需的FeSO4的毫摩尔数表示。以FeSO4做出标准曲线y = 0.1783x+0.0030，相关系数 R2 = 0.9999。
[0029]1.2.7DPPH分析法测定DPPH自由基清除率
[0030]移取3mL浓度为60 μ mo I/L的DPPH-乙醇溶液(乙醇浓度为80% )于试管中然后加入ImL质量浓度分别为4、8、12、16、20mg/mL的提取液，使其充分混匀，室温静置15min，在波长517nm处测定其吸光度，记为样品吸光度Ap以3mLDPPH溶液与lmL80%乙醇溶液混合，在波长517nm处测定其吸光度，记为空白吸光度kQO
[0031 ] 1.3数据统计分析方法
[0032]试验数据采用SPSS20软件进行统计分析。
[0033]2结果与分析
[0034]2.1百合花瓣发育过程中类黄酮、维生素C、花青素苷、总酚的变化
[0035]2.1.1大百合花瓣发育过程中抗氧化物质的变化
[0036]如表1所示，大百合花瓣在不同发育时期抗氧化物质含量存在显著差异。
[0037]表1大百合花瓣发育过程中抗氧化物质质量参数
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