绿豆皮有效组分的制备方法与用途[0002]绿豆皮是泡发绿豆后揉搓下来的种皮。《本草纲目》载:用于解热毒，退目翳。绿豆皮是常见绿豆制品加工，大多作为饲料使用，未得到充分的开发和利用。[0003]程霜等在“绿豆皮中抗氧化剂的初步研究”载:利用甲醇从绿豆皮中提取出黄酮类物质用于抗氧化，其黄酮类化合物的提取率为1.32%。[0004]在“绿豆皮中总黄酮的提取工艺研究”一文中载:利用绿豆皮，提取时间150min，乙醇体积分数50%，提取温度80°C，固液比1:10，提取次数2次，绿豆皮中总黄酮的提取量为3.879mg/g。[0005]还有在“绿豆皮中黄酮类化合物的提取及定量测定”一文中载:用正交实验探讨了绿豆皮中黄酮类化合物的最佳提取工艺。研究结果表明:在70°C下用6倍于绿豆皮重体积30%的乙醇回流提取2次，每次2h，绿豆皮黄酮类化合物提取效果最好。样品用Al (NO3) 3比色法于510nm下测定，芦丁为标准计算含量，得到绿豆皮中黄酮类化合物的平均含量为1.459%ο[0006]申请号为201110203090.0的中国发明专利“一种提取抗氧化绿豆多糖的方法”公开了一种从绿豆皮中提取出绿豆多糖用于抗氧化的方法。
[0007]然而，现有利用绿豆皮提出的成分用于抗氧化的作用效果不显著，还存在着有效成分提取不充分的缺点，造成了资源的浪费。


[0008]本发明的目的是提供一种绿豆皮有效组分的制备方法与用途。
[0009]本发明的绿豆皮有效组分，其制备过程包括以下步骤:
[0010]a、取绿豆皮，加水提取，过滤，浓缩，加水稀释，过滤，得上样液；
[0011]b、将所述上样液上HPD450大孔吸附树脂吸附后，先用水洗脱至无色，然后再用乙醇洗脱，得洗脱液，过滤，浓缩，即得绿豆皮有效组分。
[0012]作为优选，所述步骤a中提取的次数为I~3次，提取的时间为I~3小时。
[0013]作为优选，所述步骤a中加水提取时，加水的重量为所述绿豆皮的8~20倍。特别优选的，所述步骤a中加水提取时，加水的重量为所述绿豆皮的10倍、12倍、14倍、16倍和18倍。
[0014]作为优选，所述步骤a中浓缩采用减压浓缩。
[0015]作为优选，所述步骤a中浓缩至比重为1.05~1.075。
[0016]作为优选，所述步骤b中乙醇的质量百分比浓度为70%~90%。
[0017]作为优选，所述步骤b中浓缩至比重为1.15~1.175。[0018]进一步地，本发明还提供一种所述制备方法制得的绿豆皮有效组分。
[0019]进一步地，本发明还提供一种所述绿豆皮有效组分在制备抗氧化药物中的应用。
[0020] 进一步地，本发明还提供一种利用所述的绿豆皮有效组分制作的具有抗氧化功能的化妆品组合物，该化妆品组合物由以下组分组成:按重量份数，1、3_ 丁二醇600~800份、绿豆皮有效组分50~150份、纯化水200~400份、苯氧乙醇0.005~0.015份。特别优选的，该化妆品组合物由以下组分组成:按重量份数，1、3_ 丁二醇700份、绿豆皮有效组分100份、纯化水300份、苯氧乙醇0.01份。其中，在绿豆皮有效组分中加入1、3_ 丁二醇、纯化水，有助于该组合物与其它原辅料相容，形成稳定的化妆品成品。加入苯氧乙醇用于防腐。
[0021]本发明中，可以用上述化妆品或直接以绿豆皮有效组分为基础成分，再配以其它原辅料，按照制备化妆品的常规工艺制成化妆品成品。
[0022]本发明的有益效果在于:以绿豆皮为原料，研究出一种制备绿豆皮有效组分的制备方法。该方法提高了产品的纯度，降低了生产成本，且生产设备简单，效率高，适合大规模生产。该有效组分具有抗氧化、抗衰老、保护皮肤、延缓皮肤衰老等活性，可以用于食品、保健品、化妆品和药品的添加剂或作为原料。



[0023]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0024]图1为绿豆皮有效组分还原能力测试图；
[0025]图2为绿豆皮有效组分对DPPH自由基清除作用的测试图；
[0026]图3为绿豆皮有效组分对超氧阴离子的清除作用的测试图；
[0027]图4为绿豆皮有效组分对铜离子螯合能力的测试图；
[0028]图5为绿豆皮有效组分与绿豆籽有效组分对DPPH自由基清除作用的测试图。

[0029]为使本领域技术人员详细了解本发明的生产工艺和技术效果，下面以具体的生产实例来进一步介绍本发明的应用和技术效果。
[0030]实施例1:
[0031]a、取绿豆皮，加10倍重量的水提取2次，每次提取的时间为2小时，采用具有200目的滤网进行过滤，减压浓缩至比重为1.06 (热测定)，随后以浓缩液为基础单位，加4倍重量水稀释，采用滤布进行过滤，得上样液；
[0032]b、将所述上样液上HPD450大孔吸附树脂吸附后，先用水洗脱至无色，然后再用质量百分比浓度为75%乙醇溶液洗脱，流速为2BV/小时，得洗脱液，采用具有300目的滤网进行过滤，浓缩比重为1.15 (热测定)，即得绿豆皮有效组分。
[0033]实施例2:
[0034]a、取绿豆皮，加20倍重量的水提取I次，提取时间I小时，采用具有200目的滤网进行过滤，减压浓缩至比重为1.07(热测定)，随后以浓缩液为基础单位，加5倍重量水稀释，采用滤布进行过滤，得上样液；
[0035]b、将所述上样液上HPD450大孔吸附树脂吸附后，先用水洗脱至无色，然后再用质量百分比浓度为70%乙醇溶液洗脱，流速为2BV/小时，得洗脱液，采用具有300目的滤网进行过滤，浓缩比重为1.17 (热测定)，即得绿豆皮有效组分。
[0036]实施例3:
[0037]a、取绿豆皮，加8倍重量的水提取3次，每次提取的时间为3小时，采用具有200目的滤网进行过滤，减压浓缩至比重为1.06 (热测定)，随后以浓缩液为基础单位，加3倍重量水稀释，采用滤布进行过滤，得上样液；
[0038]b、将所述上样液上HPD450大孔吸附树脂吸附后，先用水洗脱至无色，然后再用质量百分比浓度为90%乙醇溶液洗脱，流速为2BV/小时，得洗脱液，采用具有300目的滤网进行过滤，浓缩比重为1.16 (热测定)，即得绿豆皮有效组分。
[0039]实施例4:
[0040]a、取绿豆皮，加14倍重量的水提取2次，每次提取的时间为3小时，采用具有200目的滤网进行过滤，减压浓缩至比重为1.06 (热测定)，随后以浓缩液为基础单位，加3倍重量水稀释，采用滤布进行过滤，得上样液；
[0041]b、将所述上样液上HPD450大孔吸附树脂吸附后，先用水洗脱至无色，然后再用质量百分比浓度为90%乙醇溶液洗脱，流速为1.5BV/小时，得洗脱液，采用具有300目的滤网进行过滤，浓缩比 重为1.16 (热测定)，即得绿豆皮有效组分。
[0042]对比例1:
[0043]取绿豆皮用10倍量水煎煮2次，每次煎煮的时间为2小时，得绿豆皮水提取物。
[0044]对比例2:
[0045]取绿豆皮用10倍量质量百分比浓度为50%的乙醇提取2次，每次提取2小时，得绿豆皮醇提取物。
[0046]对比例3:
[0047]取绿豆皮用10倍量质量百分比浓度为30%的乙醇提取2次，每次提取2小时，得绿豆皮醇提取物。
[0048]为验证本发明效果，特作以下对比试验:
[0049]

I总黄酮含量
实施例1 7.35mg/ml
实施例 2~ 6.28mg/ml
实施例 3~ 8.12mg/ml
实施例 4 5.32mg/ml
对比例 I 0.535mg/ml
对比例 2 0.380mg/ml
对比例 3~ 0.345mg/ml[0050]
[0051]由上表可知，通过本发明制备方法所得的绿豆皮有效组分中，总黄酮含量较高，另由于通过HPD450树脂富集总黄酮，能有效避免叶绿素等杂质溶出到绿豆皮有效组分中，从而保证了绿豆皮有效组分的纯度。
[0052]另通过实施例1-4与对比例1-3所得有效组分和提取物对DPPH自由基清除作用的研究比较发现，实施例中所得的绿豆皮有效组分的抗氧化能力是对比例中所得提取物的4-6 倍。
[0053]实施例5:
[0054]为有效保存绿豆皮有效组分，更好地应用到化妆品中。可将实施例1-4所得的绿豆皮有效组分配以其它组分制成化妆品所需的组合物。该组合物由以下组分组成:按重量份数，取1、3_ 丁二醇700份、绿豆皮有效组分100份、纯化水300份和苯氧乙醇0.01份，混匀，包装，即可。
[0055]实施例6:
[0056]为有效保存绿豆皮有效组分，更好地应用到化妆品中。可将实施例1-4所得的绿豆皮有效组分配以其它组分制成化妆品所需的组合物。该组合物由以下组分组成:按重量份数，取1、3_ 丁二醇600份、绿豆皮有效组分150份、纯化水200份和苯氧乙醇0.015份，混匀，包装，即可。
[0057]实施例 7:
[0058]为有效保存绿豆皮有效组分，更好地应用到化妆品中。可将实施例1-4所得的绿豆皮有效组分配以其它组分制成化妆品所需的组合物。该组合物由以下组分组成:按重量份数，取1、3_ 丁二醇800份、绿豆皮有效组分50份、纯化水400份和苯氧乙醇0.005份，混匀，包装，即可。
[0059]为验证本发明的技术效果，特作以下试验:
[0060]1、绿豆皮有效组分还原能力测试
[0061]实验原理:还原力是物质潜在抗氧化能力的指标之一，试样将赤血盐还原成黄血盐，黄血盐与Fe3+作用生成普鲁士蓝，在700nm处测定吸光值以检测普鲁士蓝的生成量，通过普鲁士蓝的生成量衡量样品的还原能力。
[0062]实验方法:分别取待测绿豆皮有效组分溶液0.lmL、0.2mL、0.5mL、lmL，用蒸馏水将体积补足到ImL ;取阳性对照样品维生素C溶液0.lmL、0.2mL、0.5mL、lmL，用蒸馏水补足到lmL。在各组样品中加入ImL磷酸盐缓冲液和ImL铁氰化钾溶液，混匀，50°C水浴20min，取出，加入ImL三氯乙酸溶液，混匀。取2mL的混合液置于5mL离心管中，加入2mL蒸馏水和0.4mL的三氯化铁溶液，迅速混匀。测定溶液在700nm处的吸光值。
[0063]实验结果:见图1 ;绿豆皮有效组分表现出良好的还原能力，表明绿豆皮有效组分具有潜在抗氧化能力。
[0064]2、绿豆皮有效组分对DPPH自由基清除作用的测试
[0065]实验原理:DPPH甲醇溶液为紫罗兰色，在517nm下有强的吸光值，若与样品结合，会降低吸光值，由此借以判断样品清除自由基的能力。
[0066]实验方法
[0067]实验组:分别取0.1mL,0.2mL,0.5mL, ImL绿豆皮有效组分溶液样品于试管中，用蒸馏水补足到lmL，加入4mLDPPH甲醇溶液，混匀，暗处放置30min，不断震荡，测定517nm处的吸光值。
[0068]空白组:在各个试管中分别取同实验组同等体积的样品溶液，用蒸馏水补足到ImL,加入4mL的甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处吸光值。
[0069]对照组:lmL蒸懼水加入4mLDPPH甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处的吸光值。
[0070]实验结果:DPPH抑制率(％) = (A0-A1+A2) /A0*100%
[0071]其中AO为对照组的吸光值，Al为实验组的吸光值，A2为对应空白组的吸光值。
[0072]结果见图2 ;样品可以有效清除DPPH自由基，且在测试范围清除率均达到90%以上。
[0073]3、绿豆皮有效组分对超氧阴离子的清除作用测试
[0074]实验原理:邻苯三酚在弱碱性环境中自身氧化分解产生超氧阴离子，随着反应的进行，超氧阴离子在体系中不断积累，导致反应液在420nm处的吸光度在反应开始一段时间内会随着时间的变化而线性增大，因此测定在该段时间内被测物反应液的吸光度随时间的变化率，并与空白液比较便可得出被测物抑制超氧阴离子的能力。
[0075]实验方法 [0076]实验组:取5.6mLTris HCl缓冲液，分别加入0.1mL,0.2mL、0.3mL、0.4mL的待测样品，用蒸馏水补足到0.4mL,放入25°C水浴锅中水浴lOmin，然后加入25°C预温的邻苯三酚(如果室温高于25°C可以在室温下操作)，充分混匀，从加入邻苯三酚后开始准确计时3min，而后加入5%抗坏血酸(Vc) 0.05mL终止反应。IOmin钟后在420nm处测定其吸光度值。
[0077]对照组:取5.6mL的Tris HCl缓冲液，分别加入同实验组相同体积的待测样品，用蒸懼水补足到0.4mL,加入12mmol/LHCl,充分混匀，从加入HCl开始准确计时3min,加入5%抗坏血酸终止反应。IOmin钟后在420nm处测定其吸光度值。
[0078]空白组:取5.6mL50mmol/L Tris-HCl缓冲液,加入0.4mL蒸懼水,此后操作同实验组。
[0079]实验结果:E=[(A0-A1+A2)/A0]*100%
[0080]AO为空白吸光度值，Al为实验组吸光度值，A2为对照组吸光度值。
[0081]结果见图3 ;待测样品绿豆皮有效组分表现出一定的清除超氧阴离子的作用。
[0082]4、铜离子螯合能力测试
[0083]实验原理:金属离子如铁离子、铜离子在脂质氧化、细胞氧化以及黑色素的生成过程中起到催化剂的作用，具有金属螯合作用的物质也可以间接起到抗氧化以及抑制黑色素生成的作用，采用TMM螯合法测定铜离子螯合能力以评估试样螯合金属能力。
[0084]实验方法
[0085]标准曲线:分别取OmL, 0.2mL, 0.4mL, 0.6mL, 0.8mL, ImL的0.2mM无水硫酸铜溶液，用Hex缓冲液定补足到lmL。加入4mL的Hex缓冲液和0.2mLTMM指示剂，混匀静置lOmin，Hex缓冲液调零，测定460nm处和530nm处的吸光值。以A460/A530为纵坐标，铜离子浓度为横坐标绘制标准曲线。
[0086]实验组:分别取0.1mL, 0.2mL,0.3mL,0.4mL,0.5mL样品于离心管中，用蒸馏水补足到0.5mL,加入1.5mLHex缓冲液和0.5mL溶于Hex缓冲液的CuSO4(2mM)，室温下放置lh，无样品空白做同样的处理，另取一系列相同体积的样品于离心管中，用蒸馏水补足到
0.5mL，加入ImLHex缓冲液，室温下放置lh。
[0087]取上述反应液0.2mL,加入4.8mLHex缓冲液和0.2mLTMM指示剂，混匀静置lOmin，以Hex缓冲液做空白调零，测定460nm和530nm处的吸光值。
[0088]实验结果:E%=[(A0-A1+A3)/A0]*100%
[0089]AO为无样品空白A460/A530在标准曲线上对应的x值，Al为实验组样品A460/A530, A2 为无铜对照 A460/A530。
[0090]结果见图4:样品绿豆皮有效组分表现出稳定的铜离子螯合能力。
[0091]5、绿豆皮有效组分与绿豆籽有效组分对DPPH自由基清除作用的研究
[0092]实验方法
[0093]实验组:分别取绿豆皮有效组分溶液和用制备绿豆皮有效组分相同制备方法制备的绿豆籽有效组分溶液lmL，用蒸馏水定容到25mL，从中分别取ImL溶液于试管中，加入4mLDPPH甲醇溶液，混匀，暗处放置30min，不断震荡，测定517nm处的吸光值。
[0094]空白组:在各个试管中分别取同实验组同等体积的样品溶液，用蒸馏水补足到ImL,加入4mL的甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处吸光值。
[0095]对照组:lmL蒸 懼水加入4mLDPPH甲醇溶液。混匀后暗处放置30min,测定517nm处的吸光值。
[0096]实验结果:DPPH抑制率(％) = (A0-A1+A2) /AO*100%
[0097]见图5，结果表明绿豆皮有效组分的抗氧化效果优于绿豆籽有效组分。
[0098]最后应说明的是，以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。