专利名称：一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物及其制备方法中国专利200410051250. 4公开了一种治疗高脂血症的药物，命名为“复方贞术调 脂方”(FTZ)，由女贞子、白术、杜仲、三七、大蓟、丹参、黄连、佛手八味中药组成。是经临床 十多年应用经验方，用于治疗高脂血症取得理想疗效，实验研究也表明，该方对实验性的大 鼠饮食性高脂血症具有很好的降脂作用，该处方专利已经获得授权。虽然该复方有良好调节血脂的作用，但是由于是中药复方，有八味中药组成， 其化学成分复杂，有效成分并不清楚，实际应用中其产品质量不易获得有效控制，最终将影 响产品临床疗效的稳定，且用于制备药物制剂时无效组分太多，服用量大，剂型不能多样 化，不利于大规模生产上市，广泛应用受到限制。
本发明的目的在于根据现有的“复方贞术调脂方”药物中存在的化学成分复杂、有 效成分不清楚、实际应用中其产品质量不易获得有效控制、无效组分太多等缺陷，提供一种 防治脂代谢紊乱的复方中药提取物。本发明的另一目的是提供上述复方中药提取物的制备方法。本发明的目的通过以下技术方案予以实现一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，有效成分为腊醇、谷留醇、正二十六 烷酸、白术内酯III、齐墩果酸、小檗碱、药根碱、黄连碱、丹参素、丹酚酸B、环二十四烷、 9，12-十八碳二烯酸、5，7- 二甲氧基香豆素、特女贞苷、人参皂苷和Rgl、三七皂苷R1、 杜仲醇。它们的重量比例是1 5:1 6:1 4:1 4: 1 8: 1 8:1 5: 1 5: 1 6:1 5:1 4:1 3:1 5:1 4:1 8:1 8:1 3:1 4。上述复方中药提取物的制备方法，该复方中药是由丹参、女贞子、黄连、大蓟、杜 仲、白术、三七和佛手八味中药组成，制备方法步骤如下将原料药物经过C"醇(甲醇、乙醇或丙醇)提和/或水提后，合并总提取物，再以不同 极性的有机溶剂萃取总提取物得到不同极性的有效部位，将各有效部位混合，得到防治脂 代谢紊乱的复方中药提取物。具体制备步骤如下(ι)将原料药三七和女贞子进行CV3醇提，得到Ci_3醇提物，将大蓟、白术、丹参、杜仲、 佛手和黄连进行水提、浓缩，得到水提物，合并(V3醇提物和水提物得到总提取物；(2)以石油醚萃取步骤(1)得到的总提取物，得到有效提取部位A；(3)然后以乙酸乙酯萃取步骤(2)石油醚萃取后剩下的提取物，得到有效提取部位B;
(4)然后再以正丁醇萃取步骤(3)乙酸乙酯萃取后剩下的提取物，得到有效提取部位C，合并各有效部位，得到防治脂代谢紊乱的复方中药提取物。所述Cp3醇为甲醇、乙醇或丙醇。作为一种优选方案，所述CV3醇提优选用30 95体积％的乙醇提取1 5次，优 选2 3次，每次提取的乙醇体积为药材质量的1 15倍，优选5 10倍，每次提取时间 为5 min 10 h，优选5 min 5 h，更优选1 3 h ；所述水提优选以水煎煮1 5次， 优选2 3次，每次用水的体积为药材质量的1 15倍，优选4 12倍，每次煎煮时间为 5 min 10 h，优选1 3 h ；所述浓缩后的浓缩液体积优选药材质量的0. 2 5倍，优选 1 2倍。 上述制备方法中，有效提取部位A的制备方法如下加入0. 5 15倍，优选5 15 倍于被萃取物体积的石油醚，萃取1 5次，优选3 4次，合并萃取液，经低温干燥得到有 效提取部位A ；
有效提取部位B的制备方法如下(3)然后以乙酸乙酯萃取步骤(2)石油醚萃取后剩 下的提取物，加入0. 5 15倍，优选5 15倍于被萃取物体积的乙酸乙酯，萃取1 5次， 优选3 4次，合并萃取液，经低温干燥得到有效提取部位B ；
有效提取部位C的制备方法如下(4)然后再以正丁醇萃取步骤(3)乙酸乙酯萃取后 剩下的提取物，加入0. 5 15倍，优选5 15倍于被萃取物体积的正丁醇，萃取1 5次， 优选3 4次，合并萃取液，经低温干燥得到有效提取部位C。本发明制备得到的防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，有效提取部位A、B和C的 重量比为0 1:0 2:0 3。本发明中，还可以将各个有效提取部位或其组合物按照药剂学上可以接受的载体 和一般制剂方法，加工成为口服制剂或注射制剂等形式。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果
通过本发明制备方法，可以去除中药中大量无效的化学成分，得到不同的有效提取部 位，既保留了中药特色，又使传统中药中的有效成分含量大大提高，减少了无效成分对产品 加工和制剂质量的影响，使该复方中药有效成分明确，制备工艺稳定，产品质量可控，有利 于工业化生产和提高并稳定疗效。实验研究表明，本发明方法得到的复方中药提取物对实 验性的大鼠高血脂血症具有很好的调血脂作用。


图1 实施例2中复方中药提取物(FTZCE)经UHPLC-MS分析得到的指纹图谱；
图2 实施例2中复方中药提取物(FTZCE)促进L-02肝细胞胆固醇7 α羟化酶基因 mRNA表达的试验结果图，其中1为marker，2为空白对照，3为FTZ组，4为FTZCE低剂量组， 5为FTZCE中剂量组，6为FTZCE高剂量组；
图3 实施例2中复方中药提取物(FTZCE)物对HMG-CoA还原酶活性的抑制作用试验 结果图，其中c为正常L-02肝细胞HMG-CoA还原酶活性，Fl. 0、F5. 0、F25. 0为1 μ g/ml、5 μ g/ml、25 μ g/ml浓度FTZCE处理后肝细胞HMG-CoA还原酶活性，SlO为辛伐他汀10 μ g/ ml处理后肝细胞HMG-CoA还原酶活性；
图4 实施例2复方中药提取物(FTZCE)促进L-02肝细胞LDL-R基因mRNA表达的试 验结果，c为正常L-02肝细胞LDL-R基因基础表达，Fl. 0、F5. 0、F25. 0为1、5、25 μ g/ml浓度FTZCE处理后肝细胞LDL-R基因表达；
图5 实施例2复方中药提取物(FTZCE)促进L-02肝细胞HNF4 α a基因mRNA表达的 影响图，c为正常L-02肝细胞HNF4a基因的基础表达，Fl. 0、F5. 0、F25. 0为1、5、25 g/ml 浓度FTZCE处理后肝细胞HNF4 α基因表达；
图6 :实施例2中复方中药提取物(FTZCE)对L-02肝细胞FXR α基因表达的影响图，c 为正常1^-02肝细胞？父1^基因的基础表达，Fl. 0、F5. 0、F25. 0为1、5、25 g/ml浓度FTZCE 处理后肝细胞FXR α基因表达。

将女贞子、白术、杜仲、三七、大蓟、丹参、黄连、佛手(重量比为1:1:1:2:1:2:1:1)中的 三七、女贞子两药粉碎成粗粉，以药材量的10倍、8倍和6倍的60体积％乙醇分别回流提取 三次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇并使醇提部分浓度为1 ml相当于1 g生药；方中其 余药材都以八倍、六倍和四倍量的水，分别煎煮提取三次，每次2 h，合并三次水提液，真空 减压浓缩至1 g药材/ml提取液，水提体部分和前面醇提部分合并得到中药复方总提取物 (FTZ)0实施例2复方总提取物的提取部位的制备
以复方总提取物15倍体积的石油醚萃取一次，分离石油醚层；再以10倍体积提取两 次，分离得到石油醚层，合并三次的石油醚萃取液，回收石油醚，再于0. 08 MPa, 60°C真空干 燥，得到提取部位A ；
萃取后的提取物再分别加15、10、8倍量的乙酸乙酯萃取，得到的乙酸乙酯萃取部位， 回收溶剂，于0.07 MPa，60°C下真空干燥，得到复方提取物部位B ；
萃取后的提取物再分别以总提物15、10、8倍量的正丁醇分别萃取，得到萃取液合并， 回收正丁醇，将萃取物于0. 07 MPa，75°C下真空干燥，得到复方提取部位C。根据中药复方总投料量和得到各提取部位的量，分别计算各提取物的得率。有效提取部位A的得率在0. 10% 0. 30% ； 有效提取部位B的得率在0. 40% 1. 00% ； 有效提取部位C的得率在2. 00% 4. 00% ；
按有效提取部位A、B和C和重量比为1: 2:5混合得复方中药提取物(FTZCE)^S UHPLC-MS分析得到的指纹图谱如图1所示，该提取物经测定含有腊醇、谷留醇、正 二十六烷酸、白术内酯III、齐墩果酸、小檗碱、药根碱、黄连碱、丹参素、丹酚酸B、环二十四 烷、9，12-十八碳二烯酸、5，7-二甲氧基香豆素、特女贞苷、人参皂苷Rbl和Rgl、三七皂苷 R1、杜仲醇等有效成分。实施例3复方中药提取物胶囊的制备方法 提取物按照以下重量份组合
有效提取部位A 1份 有效提取部位B 2份检测项目
齐墩果酸 特女贞苷 丹騎酸 正二十六烷酸 人参皂苷Rbl 5J-二甲氧基香豆素
实施例4复方中药提取物对饮食性高脂血症大鼠血脂代谢的影响
1.实验材料
1.1药品与试剂
复方中药提取物(FTZCE)同实施例2
中药复方总提取物(FTZ)为复方贞术调脂方提取物，同实施例1 总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒。1. 2 动物
清洁级SD大鼠、体质量(180-225 g)，由南方医科大学省实验动物中心提供。纯种新西 兰雌兔、体质量(1.80-2.20 kg)，由广东省实验动物中心提供。2.实验方法
2.1对饮食性高血脂模型大鼠的血脂的影响
观察不同剂量的FTZCE对高脂血症整体动物大鼠血清TC、TG、LDL-C，HDL-C的影响。按文献(郭姣，贝伟剑等复方贞术调脂方对饮食性高脂血症大鼠肝脂酶的作用 中药材2009;31(4) :582-585)报道方法复制并确认高血脂大鼠动物模型成功。将动物随机分组将96只大鼠编号称重后随机分为8组，每组12只，设定①正 常对照组，②高脂模型组，③FTZ组，④洛伐他丁组，⑤非诺贝特组，⑥⑦⑧依次为FTZCE高、 中、低剂量各实验组。除正常对照组自由摄取普通饲料外，其余组分别在此基础上每天上午 按10 ml / kg量灌胃给予高脂乳剂，4 h后给予相应的药物，其中正常组、模型组给予等量 生理盐水，连续给药4周，禁食12 h(不禁水)，第2天清晨末次给药1 h后先从眼眶静脉丛 取血，离心、分离血清，分别测定TC、TG、HDL-C, LDL-C02. 2对高脂血症新西兰雌兔整体动物模型的血脂代谢的影响
纯种新西兰雌兔去势术+0. 5%胆固醇饲料+静注牛血清白蛋白造模。实验动物纯种新 西兰长毛兔49只，雌性，体重1.8-2. 2 kg，月龄3 4月，由广东省实验动物中心提供。给 家兔灌服高脂饲料(高脂饲料的配置比例为胆固醇0. 5%，猪油3%，基础饲料96. 5%)0实
腊醇 小檗碱 黄连碱 白术内酉旨I 人参皂苷R 杜仲醇
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有效提取部位C 5份。将上述比例的各提取物，提取部位A与等量的淀粉混合均勻，再与提取部位B混 合，最后与提取部位C混合，三者混合均勻后干法制粒，减压干燥后，整粒，填充2号胶囊，抛 光，质检包装。用HPLC方法测定制得的胶囊，其含各有效成分含量结果见表1 表1 FTZCE胶囊HPLC含量测定结果
Ili-1
(.). 量粒 含
测项目
11
量粒
6验兔经过1周适应性喂养后随机分成七个组①假手术对照组，②去势高脂模型组和给药 各组，③复方贞术调脂方FTZ组，④洛伐他丁组，⑤非诺贝特组，⑥FTZCE大剂量组，⑦FTZCE 小剂量组。每组7只。假手术组行假性手术(在卵巢周围切取一小块脂肪组织)，不切除卵 巢，术后予普通市售饲料(120 150g/d)；其余6组模型组和各给药组家兔实施经腹切除 双侧卵巢摘除术，上述动物术后予喂饲高脂饲料(120 150g/d)，并给牛血清白蛋白Q50 mg/kg)静脉注射(1次/4周)。复方贞术调脂方FTZ组(相当于临床成人日剂量的5倍) 和FTZCE组等给药若干组每天灌胃给药；对照、模型组予同体积的生理盐水和灌胃。实验第 12周测体重，血脂测定于12周经耳动脉采血2 mL，每次采血前禁食16 h。全血标本室温静 置3 h，2200 r/min离心15 min，上层血清分装后_20°C保存备用。血清总胆固醇、甘油三 酯、HDL-C和LDL-C的检测采用全自动生物化学分析仪，步骤参照试剂盒说明书进行。血浆 OX-LDL测定采用ELISA法，按试剂盒说明书操作。2. 3统计学方法
数据用X士S表示，用SSP10. 0软件进行方差分析和均数间多重比较。3 结果
3.1对饮食高血脂模型大鼠的血脂的影响
研究结果表明，FTZCE可明显降低饮食高血脂模型小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三 酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，明显升高高密度脂蛋白(HDL-C)，有调节血酯的作 用，见表2
表2 FTZCE对饮食高血脂模型大鼠的血脂的影响


本发明公开了一种防治脂代谢紊乱的复方中药提取物，该复方中药是由丹参、女贞子、黄连、大蓟、杜仲、白术、三七和佛手八味中药组成，所述制备方法包括如下步骤将原料药物经过C1-3醇提和/或水提后，合并总提取物，再以不同极性的有机溶剂萃取总提取物得到不同极性的有效部位，将各有效部位混合，得到用于预防或治疗脂代谢紊乱的复方中药。通过本发明制备方法，可以去除中药中大量无效的化学成分，减少了无效成分对产品加工和制剂质量的影响，使该复方中药有效成分明确，制备工艺稳定，产品质量可控，有利于工业化生产和提高并稳定疗效。