一种鳄鱼胆素的提取方法[0002]鳄鱼是一种古老的爬行动物，《本草纲目》等古代医学典籍中均有关于鳄鱼药用价值的记载。早在南北朝时期的《本草经集注》就有对鳄鱼甲的记载:“味辛，微温。主心腹癥瘕、伏坚、积聚、寒热。”《本草拾遗》称鼍甲“主恶疮，腹内癥瘕”。明代李时珍的《本草纲目》“鳞部”第四十三卷则详细记载了:“鼍(即鳄)甲主治心腹症瘕；伏坚积聚；肉:主治少气吸吸，足不立地；别录湿气邪气、诸蛊内症瘕、恶疱。脂:主治摩风及恶疮。”在现代医学中，鳄鱼肉、鳄鱼胆已广泛用于保健和医疗领域。[0003]根据中国专利CN101856368B的《鳄胆素及其制备方法与应用》记载，其通过萃取的方法获取鳄胆素，并用于肿瘤病人的治疗，取得了良好的疗效。但是，该专利在提取的鳄胆素应用到制品中时，存在保质时间短、溶剂残留高的问题，高残留的正丁醇对人体粘膜会产生强烈的刺激性。
[0004]本发明提供一种杂质少，溶剂残留少的鳄鱼胆素的提取方法。[0005]本发明提供的技术方案为:一种鳄鱼胆素的提取方法，包括以下步骤:[0006]步骤1:将鳄鱼胆去除胆囊壁，得到胆汁混合物100重量份；[0007]步骤2:在所述的胆汁混合物中加入无水乙醇200~500重量份，低温搅拌；[0008]步骤3:将步骤2中得到的混合物进行过滤，收集滤液；将滤液置于旋转蒸发仪中进行真空浓缩，浓缩时间为2~4小时；优选地，所述的过滤采用微孔滤膜过滤器进行过滤，所述的微孔滤膜的孔径为3~10微米。上述步骤2和步骤3可以选择重复进行多次，比如4次，可以轻微的提高收集效果。
[0009]步骤4:将步骤3中得到的浓缩后的混合物中加入60~100重量份蒸馏水，优选90重量份，用乙醚进行萃取三次，并通过真空浓缩除去乙醚；
[0010]步骤5:用二氯甲烷进行萃取三次，并通过真空浓缩除去二氯甲烷，得到鳄鱼胆素。
[0011]在上述的鳄鱼胆素的提取方法中，所述的步骤2中低温搅拌时，混合物的温度为5~10°C，优选地，所述的混合物的温度为6~TC。
[0012]在上述的鳄鱼胆素的提取方法中，所述的步骤3中，旋转蒸发仪的加热温度为50~60°C，优选地，所述的加热温度为51~55°C。
[0013]在上述的鳄鱼胆素的提取方法中，所述的步骤4中，所述的每一次萃取所用的乙醚的量为200~500重量份，优选250~350重量份。
[0014]在上述的鳄鱼胆素的提取方法中，所述的步骤5中，所述的每一次萃取所用的二氯甲烷的量为200~500重量份，优选250~350重量份。[0015]在本发明中，鳄鱼可以选择为人工养殖的泰鳄、尼罗鳄、扬子鳄等。
[0016]在本发明中，采用无水乙醇对胆汁进行低温预处理和过滤，使鳄鱼胆汁中的蛋白质和脂肪同时析出和除去，可以有效的缩短后续的萃取工序，并且降低鳄鱼胆素制品中的脂肪含量。在本发明中，萃取工序的溶剂沸点均低于40°C，在真空浓缩的过程中，无需进行加热，在常温下即可以快速的除去溶剂，成品中的溶剂残留微乎其微。更为重要的是，乙醚的极性大于二氯甲烷的极性，溶剂极性先大后小有利于对鳄胆素的进一步纯化，有效去除制品中的残留的蛋白质和其他大分子物质。

[0017]下面结合，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
[0018]实施例1
[0019]取一定量的泰鳄的鳄鱼胆去除胆囊壁，得到胆汁混合物1000g ;在所述的胆汁混合物中加入无水乙醇2500g,在7°C的条件下搅拌；搅拌结束后对混合物进行微孔滤膜过滤，微孔滤膜的孔径 为10微米，收集滤液；将滤液置于旋转蒸发仪中进行真空浓缩，浓缩时间为2~4小时，加热油温度为51°C ;在浓缩后的混合物中加入900g蒸馏水，用乙醚进行萃取三次，并通过真空浓缩除去乙醚，压力为-0.095Mpa，每次萃取所用的乙醚量为3000g ；三次乙醚萃取结束后再用二氯甲烷进行萃取三次，并通过真空浓缩除去二氯甲烷，压力为-0.095Mpa，每次萃取所用的二氯甲烷的量为3000g，得到鳄鱼胆素。
[0020]实施例2
[0021]取一定量的泰鳄的鳄鱼胆去除胆囊壁，得到胆汁混合物1000g ;在所述的胆汁混合物中加入无水乙醇4000g，在TC的条件下搅拌；搅拌结束后对混合物进行微孔滤膜过滤，微孔滤膜的孔径为10微米，收集滤液；将滤液置于旋转蒸发仪中进行真空浓缩，浓缩时间为2~4小时，加热油温度为53°C ;在浓缩后的混合物中加入900g蒸馏水，用乙醚进行萃取三次，并通过真空浓缩除去乙醚，压力为-0.095Mpa ;每次萃取所用的乙醚量为2500g ；三次乙醚萃取结束后再用二氯甲烷进行萃取三次，并通过真空浓缩除去二氯甲烷，压力为-0.095Mpa，每次萃取所用的二氯甲烷的量为2500g，得到鳄鱼胆素。
[0022]对比例I
[0023]取一定量的泰鳄的鳄鱼胆去除胆囊壁，得到胆汁混合物1000g ;在所述的胆汁混合物中加入70%的乙醇3000g，在常温下搅拌均匀后置于旋转蒸发仪中进行真空浓缩，浓缩时间为2~4小时；在浓缩后的混合物中加入900g蒸馏水，用沸程为50~60°C的石油醚进行萃取三次，并通过真空浓缩除去石油醚，压力为-0.095Mpa ;每次萃取所用的石油醚量为2500g;三次石油醚萃取结束后再用乙酸乙酯进行萃取三次，并通过真空浓缩除去乙酸乙酯，压力为-0.095Mpa，每次萃取所用的乙酸乙酯的量为2500g，三次乙酸乙酯萃取结束后再用正丁醇进行萃取三次，并通过真空浓缩除去正丁醇，压力为-0.095Mpa，每次萃取所用的正丁醇的量为2500g，得到鳄鱼胆素。
[0024]测试方法:
[0025]稳定性测试
[0026]取鳄鱼胆素Ig溶于1000g50%的乙醇溶液中，置于3°C的环境中，放置90天，观察混合液表面和混合液中是否含有析出物。
[0027]溶剂残留测试
[0028]将鳄鱼胆素用无水乙醇溶液稀释1000倍后，用移液器取2ml稀释液并用0.45微米的微孔膜过滤后转移至标准样品瓶中待测；设定好气相色谱仪的GC-MS参数后，用10微升进样针精确吸取I微升样品注入仪器中进行分析，根据出峰顺序和出峰面积，计算鳄鱼胆素中二氯甲烷和正丁醇的含量。
[0029]测试结果:
[0030]稳定性测试结果:
[0031]实施例1和实施例2在4°C条件下放置90天后，液体内部和液体表面均无析出物，液体透明清澈。
[0032]对比例I在放置4°C条件下90天后，容器壁上出现少量不溶物。
[0033]溶剂残留测试结果:
[0034]表1
[0035]