专利名称：一种河蟹饲料及其生产工艺的制作方法河蟹即中华绒螯蟹，拉丁名为Eriocheir sinensis，是我国特有的水产珍品。但 随其养殖规模不断扩大、养殖密度不断增加，养殖环境日益恶化，严重威胁河蟹的生长和繁 育。目前，河蟹饲料主要是通过在基础饲料中添加抗生素如吉他霉素等来预防河蟹疾病， 通过添加促生长剂如喹乙醇等加快河蟹生长。但是将含抗生素和促生长剂的饲料投喂河 蟹后，这两类物质会残留在河蟹体内，使河蟹产生耐药性，进而威胁食物链中其他生物的安 全；未能被河蟹摄入的饲料残渣散落于水体中，导致抗生素、促生长剂等药物的残留，严重 污染了生态环境。河蟹品质与安全问题严重困扰并制约着河蟹养殖业的健康发展。因此， 开发一种无抗生素残留、不产生耐药性、能够增强机体抗病能力的河蟹饲料，对实现河蟹养 殖业的可持续健康发展具有重要的现实意义。河蟹的传统养殖饲料是在基础饲料中掺入添加剂制备而成的，基础饲料包括鱼 粉、玉米、豆粕、菜粕、乌贼膏、小虾米、磷酸二氢钙、蟹用维生素、蟹用矿物质等，主要为河蟹 提供基本生存所需的营养；然后根据不同的研究方向，将具有相关功效的添加剂掺入基础 饲料中，实现增产、抗病等目的。北冬虫夏草，又名蛹虫草，拉丁名为Cordxc印smilitaris，是虫草属中具有药用价 值的大型真菌，人工栽培北冬虫夏草的方法是在培养基中接入北冬虫夏草菌种，经培养得 到北冬虫夏草的子实体。子实体中除了富含蛋白质、氨基酸、维生素等物质外，还含有虫草 素、虫草酸、腺苷、超氧化物歧化酶等活性成分，具有增强机体免疫力的生理功效。随着北冬 虫夏草的市场需求量越来越大，采用培养基栽培子实体的工业化生产逐渐发展起来。大规 模生产后，产生了大量摘除子实体后的残余培养基，作为废料被丢弃，既造成浪费，又污染 环境。目前，还没有对上述残余培养基作为河蟹饲料的原料进行再利用的研究报道。
本发明针对现有技术中抗生素和促生长剂的残留对河蟹生长、人类健康和环境造 成危害的现状，提供了一种河蟹饲料。这种河蟹饲料可以避免抗生素、促生长剂残留带来的 负面影响，同时能够增强河蟹的免疫力，加快河蟹的生长速度。为了实现上述发明目的，本 发明提供以下技术方案本发明提供了一种河蟹饲料，包含鱼粉、菜粕、玉米、豆粕、次粉、豆油、小虾米、乌 贼膏、磷酸二氢钙、蟹用矿物质、蟹用维生素和粘合剂，所述饲料还包含虫草素、虫草酸、腺 苷和超氧化物歧化酶；在所述河蟹饲料中，所述虫草素的含量为0. 7-14. Omg/kg、所述虫 草酸的含量为131.0-2620. Omg/kg、所述腺苷的含量为0. 1-2. Omg/kg、超氧化物歧化酶 290. 0-5800. 0IU/kg。当然，本发明提供的河蟹饲料还可以包含其他组分，只要在本领域技 术人员认知范围内可以作为河蟹饲料组分的物质，都可以按照适用配比添加到本发明所述的河蟹饲料中。虫草素，即3 ‘ _脱氧腺苷，同腺苷作用类似，是一种具有抗菌活性的核苷类物 质，对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用，具有抗病毒、抗菌的活性；虫草酸，分子式为 C7H12O6，为1，3，4，5_四羟基环己酸，能抑制各种病菌的成长，促进机体的新陈代谢；超氧化 物歧化酶，是一种非常重要的抗氧化酶，它可以帮助体内消除过多的自由基，避免细胞受到 氧化、老化或破坏，还能抑制病毒、增强免疫功能。本发明提供的河蟹饲料，按照干物质的质量百分比计，可以包含鱼粉19-22%、菜 粕26-28%、玉米8-11%,豆粕8-11%,次粉9-10%、豆油2. 5-3%、小虾米3-4%、乌贼膏 6-8%、磷酸二氢钙1. 5%、蟹用矿物质3. 5%、蟹用维生素1%、粘合剂0. 5-1%。当然，只要 能够满足河蟹生长的基本营养需求，在本领域技术人员的认知范围内，上述各组分的含量 也可以在实际养殖情况允许的范围内进行调整。在本发明提供的河蟹饲料中，按照干物质质量百分比计，蟹用矿物质中各组分的 含量可以为，磷酸二氢钠3. 5%、磷酸二氢钾6. 0%、碳酸钙3. 5%、氯化钾0. 8%、硫酸镁 3. 2%、氯化铝0. 35%、硫酸锌0. 157%、硫酸锰0. 043%、碘化钾0. 016%、氯化铜0. 014%、 氯化钴0.055%、乳酸钙5. 15%、柠檬酸铁0.019%，其余为稀释剂。当然，本发明涉及到的 蟹用矿物质还可以包含其他组分，只要在本领域技术人员认知范围内可以作为蟹用矿物质 组分的物质，都可以添加到本发明提供的河蟹饲料中。在本发明提供的河蟹饲料中，按照干物质质量百分比计，蟹用维生素中各组分的 含量可以为，Ve 2%、 3. 0%,VA 0. 7%, Vd3 0. 08%, Vbi 0. 07%,VB2 0. 14%,VB3 0. 28%, VB5 0. 02%,VB6 0. 07%,VB7 0. 05%,Vbu 0. 02%,Vh 0. 03%、烟酸 0. 3%、叶酸 0. 05%、泛酸 钙0.25%、氯化胆碱0.5%、肌醇0.7%、生物素0.05%，其余为稀释剂。当然，本发明涉及 到的蟹用维生素还可以包含其他组分，只要在本领域技术人员认知范围内可以作为蟹用维 生素组分的物质，都可以添加到本发明提供的河蟹饲料中。作为优选，粘合剂可以为α-淀粉、小麦面筋、褐藻胶、丙烯酸钠、聚乙烯醇、聚丙 烯酸钠、多聚脲甲醛、溶胀胶质面筋；只要在本领域技术人员认知范围内可以作为粘合剂的 物质，都可以添加到本发明提供的河蟹饲料中。作为优选，稀释剂可以为膨润土、沸石粉、麸皮；只要在本领域技术人员认知范围 内可以作为稀释剂的物质，都可以添加到本发明提供的河蟹饲料中。在本发明中，所述虫草素、虫草酸、腺苷和超氧化物歧化酶可以由摘除北冬虫夏草 子实体后的残余培养基提供，使得在本发明提供的河蟹饲料中，包含虫草素0. 7-14. Omg/ kg、虫草酸 131. 0-2620. Omg/kg、腺苷 0. 1-2. Omg/kg、超氧化物歧化酶 290. 0-5800. 0IU/kg。 当然，本发明涉及到的虫草素、虫草酸、腺苷和超氧化物歧化酶还可以通过其他方式添加到 所述河蟹饲料中，只要在本领域技术人员认知和实际情况允许的范围内可以添加的方式， 都在本发明的保护范围内。而且只要能够达到提高河蟹免疫力和生长速度的目的，在本领 域技术人员的认知范围内，上述四种物质的含量也可以在实际情况允许的范围内进行调iF. ο本发明涉及到的摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基可以在市场购得或者自 行制备，制备可以按照如下方法常用虫草培养基原料按照比例混合、灭菌、分装，将北冬虫 夏草菌进行常规采集、分离、纯化、扩繁，然后接种在所述培养基上，在18-20°C、避光、湿度为60-65%的条件下，培养10-25d左右，待长出菌丝后，将温度升高到21-24°C，湿度保持在 85%以上，每天光照不少于10h，通风培养2-8d，当菌蕾生成后，在温度为21-24°C、湿度为 85-90 %的条件下，增加光照，使菌蕾生长为子实体；子实体长度约2cm时，适当增加通风， 再培养15-20d;当虫草子座生长到长度为8cm左右、子实体表面有黄色粉末物质出现时，此 子实体成熟可采收；采收子实体后，得到摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基。所述摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基在本发明提供的河蟹饲料中的质量 百分含量可以为0. 1-2%。当然，只要在本领域技术人员认知范围内，所述摘除北冬虫夏草 子实体后的残余培养基在本发明提供的河蟹饲料中的百分含量可以在实际情况允许的范 围内进行调整。作为优选，所述摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基在本发明提供的河蟹饲料 中的质量百分含量为0.5%。此外，本发明还提供了所述河蟹饲料的生产工艺原料包含鱼粉、菜粕、玉米、豆 粕、次粉、豆油、小虾米、乌贼膏、磷酸二氢钙、蟹用矿物质、蟹用维生素、粘合剂、虫草素、虫 草酸、腺苷和超氧化物歧化酶，将所述原料粉碎、过60目筛后，按比例混合，使虫草素的含 量为0. 7-14. Omg/kg,虫草酸的含量为131. 0-2620. Omg/kg,腺苷的含量为0. 1-2. Omg/kg, 超氧化物歧化酶290. 0-5800. 0IU/kg ；混合后的所述原料经80°C -90°C熟化20-30min，制 粒，得到所述河蟹饲料。当然，本发明提供的饲料生产工艺所用原料还可以包含其他组分， 只要在本领域技术人员认知范围内可以作为饲料组分的物质，都可以被用于本发明提供的 所述饲料生产工艺。作为优选，以干物质的质量百分比计，原料可以包含鱼粉19-22%、菜粕26-28%、 玉米8-11 %、豆粕8-11%、次粉9-10 %、豆油2. 5-3 %、小虾米3-4 %、乌贼膏6-8 %、磷酸二 氢钙1.5%、蟹用矿物质3.5%、蟹用维生素1%、粘合剂0. 5-1%。本发明在河蟹基础饲料中，添加了虫草素、虫草酸、腺苷和超氧化物歧化酶，或 者直接添加摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基，所述摘除北冬虫夏草子实体后的 残余培养基含有上述四种物质，使得在本发明提供的河蟹饲料中，所述虫草素的含量为 0. 7-14. 0mg/kg，所述虫草酸的含量为131. 0-2620. 0mg/kg，所述腺苷的含量为0. 1-2. Omg/ kg,所述超氧化物歧化酶290. 0-5800. 0IU/kg。用本发明提供的河蟹饲料投喂河蟹，在 水族箱中的养殖试验发现，所述河蟹饲料使河蟹肝胰腺中超氧化物歧化酶的含量提高了 26. 8-90. 2%，溶菌酶的含量提高了 13. 9-112. 0%，对河蟹的免疫力起到了显著地增强作 用；此外，使河蟹的成活率提高了 7. 3-22. 6 %，增重率增加了 6. 9-32. 9 %，肥满度增加了 5. 6-14. 1%，饲料系数下降了 8. 6-18. 7%，对河蟹的生长具有显著地促进作用。在池塘养殖 试验中，本发明提供的河蟹饲料还使河蟹的亩产量增加了 23.6%，具有良好的工业开发应 用前景；此外，对所述摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基进行回收再利用，减少了浪费 和环境污染。本发明提供的河蟹饲料的生产工艺，具有成本低廉、操作简便的特点。6温高压的聚丙烯薄膜和橡皮筋封住栽培瓶口 ；将上述栽培平放入高压灭菌锅，在121°C、 1. 05MPa条件下，灭菌3-4h，得到北冬虫夏草子实体的培养基；在无菌条件下，将北冬虫夏 草菌种接种在培养基上；将接种后的北冬虫夏草栽培瓶密封，移入经消毒处理的培养室内， 将温度保持在20°C、避光、湿度为60-65%的条件下，培养IOd左右，待长出菌丝后，将温度 升高到22°C，继续培养，待北冬虫夏草子实体产生后升温至23°C，湿度保持在85%以上，每 天光照不少于10h，通风培养，当菌蕾生成后，在温度为23°C、湿度为85-90 %的条件下，增 加光照，使菌蕾生长为子实体；子实体长度约2cm时，适当增加通风，再培养15d左右；当虫 草子座生长到长度为8cm左右、子实体表面有黄色粉末物质出现时，此子实体成熟可采收； 采收子实体后，得到摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基。残余培养基保存备用。将所述摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基预粉碎成3mm大小的颗粒，进行低 温真空干燥，再经高速气流进行超微粉碎，使得上述摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养 基的细度为130目，保存备用。称取鱼粉210g、菜粕275g、玉米105g、豆粕110g、次粉95g、豆油25g、小虾米30g、 乌贼膏75g、摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基5g、磷酸二氢钙15g、蟹用矿物质35g、 蟹用维生素10g、粘合剂小麦面筋10g。饲料总重为1000g。其中，蟹用矿物质、蟹用维生素 中各组分的含量同实施例1，稀释剂为沸石粉。饲料生产工艺同实施例1。实施例3制备本发明提供的河蟹饲料摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基是人工栽培北冬虫夏草过程中的副产品， 由南京康能生物工程有限公司提供。将所述摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基预粉碎 成4mm大小的颗粒，进行低温真空干燥，再经高速气流进行超微粉碎，使得上述摘除北冬虫 夏草子实体后的残余培养基的细度为140目，保存备用。称取鱼粉220g、菜粕280g、玉米110g、豆粕85g、次粉90g、豆油30g、小虾米40g、乌 贼膏65g、摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基10g、磷酸二氢钙15g、蟹用矿物质35g、蟹 用维生素10g、粘合剂溶胀胶质面筋10g。饲料总重为1000g。其中，蟹用矿物质、蟹用维生 素中各组分的含量同实施例1，稀释剂为麸皮。饲料生产工艺同实施例1。实施例4制备本发明提供的河蟹饲料制备摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基的方法，同实施例2。将所述摘除北冬 虫夏草子实体后的残余培养基预粉碎成5mm大小的颗粒，进行低温真空干燥，再经高速气 流进行超微粉碎，使得上述摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基的细度为150目，保存称取鱼粉190g、菜粕260g、玉米110g、豆粕110g、次粉100g、豆油30g、小虾米40g、 乌贼膏80g、摘除北冬虫夏草子实体后的残余培养基20g、磷酸二氢钙15g、蟹用矿物质35g、 蟹用维生素10g、粘合剂多聚脲甲醛10g。饲料总重为1000g。其中，蟹用矿物质、蟹用维生 素中各组分的含量同实施例1，稀释剂为沸石粉。饲料生产工艺同实施例1。实施例5用本发明提供的河蟹饲料投喂河蟹，在水族箱中进行养殖试验试验分组试验组，用实施例1-4制备的饲料投喂河蟹；对照组，用对比实施例1制备的饲料投喂河蟹。对比实施例1 制备本发明提供的河蟹饲料，饲料总重以试验中河蟹所需投放量 为准，以饲料总重为IOOOg为例，称取鱼粉220g、菜粕280g、玉米100g、豆粕105g、次粉 110g、豆油25g、小虾米30g、乌贼膏60g、磷酸二氢钙15g、蟹用矿物质35g、蟹用维生素10g、 粘合剂褐藻胶10g。其中，蟹用矿物质、蟹用维生素中各组分的含量同实施例1，稀释剂为膨 润土。饲料生产工艺同实施例1。试验用蟹及饲养管理将购于蟹种养殖基地的河蟹蟹种于3%的食盐水浸洗 5min后放入50cmX60cmX 100cm的玻璃钢水族箱中。暂养一星期后，选择健康，大小为 4. 0士 1. Og左右的河蟹，随机分为5组，每组6个平行，每箱15只蟹，随机分配到30个 50cmX60cmX 100cm的方形玻璃钢水族箱中。每个水族箱中设置孔径为5cm，孔深为20cm 左右的隐蔽物及瓦片，以曝气自来水为水源，养殖水体经过沉淀，过滤，除去残余饲料和粪 便回流到蓄水池，经增氧后由水泵抽回到各养殖箱内，每天补充总水量10% -15%的曝气 自来水，流速为5L/min。养殖实验时间为75d。试验期间水温为26士 1°C，DO彡7. 0mg/L, 间歇式充氧，PH 值为 7. 5士0. 2，NH4+-N ( 0. 2mg/L，Ν02 ( 0. 05mg/L，H2S ( 0. 05mg/L。投 饲量保持在3 %左右，每天早8 00，晚18 00投喂两次，早上投料约三分之一，晚上投料约三 分之二。实验期间，通过检查投喂3h后箱底剩余的饲料量来确定河蟹的食欲，一次来调整 逐渐增多的饲料投喂量，用此方法使过剩投喂最小化，接近于河蟹饱食量。样品的收集生长实验结束后，从各组随机取河蟹的部分新鲜肝胰腺，称重，加入 10倍体积0. 2mol/L, pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液，于玻璃勻浆器中冰浴勻浆，以IOOOOr/ min冷冻离心20min，取上清液，即为肝胰腺粗酶液。成活率的计算成活率(％ )=养殖试验后成活河蟹的只数/养殖试验前投放蟹 苗的只数X 100。相对增重率的计算相对增重率(％ ) = (W2-W1) /W1X 100式中F_摄取饲料重量； W1-试验开始蟹苗总重;w2-试验结束后成活河蟹总重。肥满度的计算肥满度=养殖试验后河蟹的平均体重(g)/养殖试验后河蟹的平 均体长(cm)。饲料系数的计算饲料系数=FAW2-W1)式中F_摄取饲料总重I1-试验开始蟹 苗总重;W2-试验结束后成活河蟹总重。溶菌酶活力测定按Hultmark等的改进方法进行测定，将经二次活化的溶壁微球 菌接种于液体培养基内37°C恒温摇床培养48h，取出后离心，收集菌体。用0. lmol/L, pH 值为6. 4的磷酸盐缓冲液配成一定浓度的作用底物，D570nm = 0. 3。取3mL该作用底物和 50 μ L待测血清或肝胰腺粗酶液于试管中混勻，测其A0值。然后将试管移入37°C水浴中保 温30min，取出后立即置于冰浴中IOmin以终止反应，测其A值。溶菌酶活力U按下式计算 U = (Atl-AVAc^式中，Atl为反应前的光吸收值，A为反应后光吸收值。超氧化物歧化酶活性测定参照南京建成生物研究所生产的试剂盒说明书进行。水族箱中养殖试验结果实施例1-4与对比实施例1相比，河蟹的非特异性免疫 力，成活率、增重率、肥满度等指标显著提高，饲料系数明显下降。具体试验结果见表1。表1养殖试验相关指标的测定
本发明公开了一种河蟹饲料，所述河蟹饲料包含鱼粉、菜粕、玉米、豆粕、次粉、豆油、小虾米、乌贼膏、磷酸二氢钙、蟹用矿物质、蟹用维生素、粘合剂以及虫草素0.7-14.0mg/kg、虫草酸131.0-2620.0mg/kg、腺苷0.1-2.0mg/kg、超氧化物歧化酶290.0-5800.0IU/kg。本发明所述饲料利用率高，减少了饲料残渣对环境的污染；避免了抗生素残留及其引起耐药性的负面影响，对河蟹及环境安全无危害；能够增强河蟹的免疫力，加快河蟹的生长速度。本发明还提供了所述河蟹饲料的生产工艺，具有成本低廉、操作简便的特点。