用于等温扩增核酸的纸质微流体的制作方法 [0002]一直以来，在一个平台上能简单、快速、准确、有效的进行多通道检测是医学、生化、环境等各界学者们的共同期盼。微流体芯片技术(microfluidics technology)具有高效、低耗(包括时间、标本、试剂)、分析微型化和实验通量化的特点，并且通过结合传感或样品前处理模块，增加了分析检测的有效性，减少了交叉污染，为现场检测或及时检测(point-of-care, P0C)提供了一种快速诊断的方法。恒温微流体核酸扩增芯片技术是一种创新性结合核酸等温扩增和微流控芯片的一种用于核酸快速扩增和结果肉眼判定的新型技术。但是微流体器件一般采用半导体或集成电路加工模式实现，过程繁琐，工艺复杂，迄今成本仍远不能达到用完即弃的目标。因此，本领域技术人员致力于需找一种结构简单、制造成本低、检测方便、用完即弃的微流体。 实用新型内容 [0003]有鉴于现有技术的上述缺陷，本实用新型所要解决的技术问题是提供一种用于等温扩增核酸的纸质微流体，结构简单、制造成本低、检测方便、用完即弃。 [0004]本实用新型的目的是通过以下技术方案来实现的:一种用于等温扩增核酸的纸质微流体，包括由滤纸制成的反应层和至少一层加样层，所述加样层重叠放置在反应层的上方，所述加样层中心设有加样孔，所述加样层上围绕加样孔均布有多个反应孔，所述加样孔和反应孔的孔口上均涂覆有疏水材料；所述反应层上设有由疏水材料画出的与加样孔相对应的样品区、与反应孔对应的多个反应区以及反应通道，所述反应区直径与反应孔的直径相同，所述样品区的直径小于加样孔的直径，每个反应区通过一个反应通道与样品区连通，所述反应通道的宽度从反应区到样品区逐渐变小。 [0005]采用上述技术方案， [0006]加样孔和反应孔的孔口上均涂覆有疏水材料，反应层上设有由疏水材料画出的与加样孔相对应的样品区、与反应孔对应的多个反应区以及反应通道，使得待测样品溶液通过加样孔滴加到样品区后不能通过疏水材料扩散到滤纸层的其它地方，从而将不同项目的检测隔开，一个微流体能同时进行多项不同的检测。
[0007]在上述技术方案中:所述加样层为两层以上，从上到下加样层的加样孔的直径逐层缩小，所述样品区的直径小于最下层加样层的加样孔的直径。加样孔的直径逐层缩小，使得微流体的中央形成一个由外往内直径逐渐缩小的孔，减少了样品被滤纸吸收带来的损耗。
[0008]在上述技术方案中:所有反应孔的圆心在同一圆周上，所有反应区的圆心也在同一圆周上，使得微流体装置美观整洁，结果易于观察统计。
[0009]在上述技术方案中:所述疏水材料为石蜡或者二甲基硅氧烷或者SU-8光阻胶。
[0010]在上述技术方案中:所述纸质微流体还包括位于反应层下方的加热层，所述加热层由滤纸制成，其下表面上设有电阻丝，可以连接电阻，接通电流后使纸层温度达到核酸扩增反应所需温度。
[0011]在上述技术方案中:所述加热层的电阻丝为由金属粉喷射沉淀而成，电阻丝微细、体积小，能够和滤纸层紧密结合，且利于均匀分布使得纸层温度均匀。
[0012]在上述技术方案中:所述加样层、反应层和加热层由双面胶层粘贴叠加固定，其中所述加样层之间、加样层与反应层之间的双面胶层上设有与位于其上方的加样层的加样孔和反应孔对应的孔，使得整个微流体结构稳固，各层不能移位避免造成实验结果不准确。
[0013]本实用新型的有益效果是:本实用新型提供的用于等温扩增核酸的纸质微流体由纸制备得到，通过毛细血管作用和液体灯芯作用在纸纤维间进行横向和纵向的流动，使得待测样品能够和包被在反应区的引物发生反应实现扩增目的，具有轻便、便宜、生产简单、一次性使用避免交叉污染等特点，多个反应孔使得可以同时检测同一对象的不同检测项目。该微流体可以通过导电层从外部接入电源，使得纸层温度达到扩增温度的需要，也可以不要加热层直接将只由加样层和反应层组装得到的微流体放入调好温度的人工培养箱中进行扩增反应，简化了该微流体的制备过程、降低了成本。




[0014]图1是本实用新型一
[0015]图2是本实用新型一【具体实施方式】的加样层结构示意图。
[0016]图3是本实用新型一【具体实施方式】的反应层结构示意图。
[0017]图4是本实用新型一【具体实施方式】的加热层结构示意图。

【具体实施方式】
[0018]下面结合附图和实施例对本实用新型作进一步说明:
[0019]实施例1:
[0020]如图1?4所示，本实用新型的用于等温扩增核酸的纸质微流体由至少一层加样层1、反应层2和双面胶层4从上到下依次叠放形成等温扩增核酸的纸质微流体，这里选择两层加样层I。
[0021]从上到下:第一层加样层I由滤纸制成，其中心设有直径为1mm的加样孔11，围绕加样孔11均布设有8个直径为5mm的反应孔12，反应孔12距离加样孔11距离为5mm，加样孔11和反应孔12的孔口涂覆有疏水材料石蜡或者二甲基硅氧烷(polydimethylsiloxane,PDMS)或者 SU-8 光阻胶(SU-8 photoresist)使得孔内液体不能通过。
[0022]第二层加样层I与第一层结构相同，也设有加样孔11和反应孔12，只是第二层加样层I的加样孔11的直径比上层加样层I的直径小，优选为第二层加样层I的加样孔11的直径为9mm。
[0023]第一层加样层I和第二层加样层2通过双面胶层4粘接，该层双面胶层4上设有与第一层的加样层I的加样孔11和反应孔12对应的孔。
[0024]在第二层加样层I下方通过双面胶层4粘接反应层2，该层双面胶层4上设置有与第二层的加样层I的加样孔11和反应孔12对应的孔。
[0025]反应层2由滤纸制成，反应层2上设有用疏水材料石蜡或者二甲基硅氧烷或者SU-8光阻胶画出的与加样孔11相对应的样品区21和与反应孔12对应的8个反应区22和反应通道23,样品区直径为6?1mm,反应区直径为5mm,每个反应区22通过一个反应通道23与样品区21连通，反应通道23的宽度从反应区22到样品区21逐渐变小。反应区22包被有与检测对象相对应的引物，引物通过生物素化引物和亲和素化微凝胶偶联结合，室温干燥沉淀在反应区22。
[0026]使用时将混有金属指示剂的待测样品反应液滴加在加样孔11中，在纸质微流体上覆盖一层耐热塑料膜防止挥发，然后将微流体置于事先调好温度的人工培养箱中，待测样品反应液通过毛细血管作用和液体灯芯作用在纸纤维间进行横向和纵向的流动到达反应区22与引物特异识别开始等温核酸扩增反应，反应结束后观察反应区的颜色变化即可得到检测结果。
[0027]实施例2:其它与实施例1相同，不同的是:在反应层2下面通过双面胶层4粘贴有加热层3，该双面胶层4上没有任何图案和孔。加热层3由滤纸制成，其下表面设有电阻丝31，优选为电阻丝31通过金属粉喷射沉淀形成，电阻丝31和可变电阻5串联后通过导线与电源和开关相连。通过可变电阻5的调节来改变电流的大小，从而起到调节加热层3的温度的作用。使用时将混有金属指示剂的待测样品滴加在加样孔11中，在纸质微流体上覆盖一层耐热塑料膜防止挥发，接通电源，调节可变电阻5，使微流体温度达到扩增反应所需温度，反应结束后观察反应区的颜色变化即可得到检测结果。
[0028]以上详细描述了本实用新型的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本实用新型的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本【技术领域】中技术人员依本实用新型的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。