专利名称:基于石蜡的核酸等温扩增反应试剂保存方法及反应试剂的制作方法在过去的20年里,以多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)为代表的核酸扩增技术得到了迅猛的发展和应用;最近几年,产生了一系列新型的核酸扩增技术。其中,核酸等温扩增(isothermal nucleic acid amplification)能在某一特定的温度下,扩大特定DNA或RNA片段的拷贝数。核酸等温扩增利用具有特殊功能的生物酶来实现恒温条件下对目标核酸的扩增;无论在实际操作还是在仪器要求方面,等温扩增技术都比PCR技术更简单和廉价,从而更容易被开发和利用。尤其是在核酸检测及诊断领域,等温扩增技术正逐渐成为PCR技术的替代方法而被广泛应用。利用等温扩增技术开发的各类检测及诊断 产品在特异性、易用性、成本和方便性等方面具有PCR技术产品无可比拟的优势,市场前景极为广阔。虽然等温扩增技木本身优势明显,但基于等温扩增技术的产品在大規模应用过程中却面临ー些问题的困扰,其中最为突出的是产品需要低温冷冻保存和运输。作为核酸扩增技术的ー种,等温扩增需要具有生物活性的酶的參与,而酶生物活性的长期保持需要低温冷冻条件,同时等温扩增反应所需的寡聚核苷酸引物、三磷酸脱氧核苷酸(dNTP)和反应缓冲液等均需在冷冻条件下贮存,反复冻融会使这些成份失效。所以基于等温扩增技术的产品要求在低温冷冻条件进行运输和保存,这ー方面増加了运输成本,另ー方面也限制了这些产品在不具备低温保存条件的环境或地区的应用。对于大規模生产、商品化的基于等温扩增技术的产品,为了保证产品的一致性、稳定性和可靠性,也要求尽可能把各种反应试剂一次性添加和分装,并使产品在贮存和运输过程中具备尽可能长的保质期限。因此,发明一种能够方便有效保存等温扩增反应试剂混合物的方法具有重要的价值。发明专利“环介导等温扩增反应试剂混合物的保存方法(200810159414. 3)”公开了ー种在环介导等温扩增反应试剂混合物中添加干燥保护剂然后进行真空干燥或快速风干实现环介导等温扩增反应试剂混合物常温长期保存的方法,但这种方法需要专门的真空冷冻干燥仪或快速风干机等复杂的设备,还需要消耗大量的能源,并不是ー种十分经济的方法。
本发明的目的之ー是提供ー种利用石蜡实现核酸等温扩增反应试剂在室温或常温进行长时间保存的方法。本发明的目的之ニ是提供ー种通过采用上述方法制备的可在室温或常温长时间保存的核酸等温扩增反应试剂,以及包含该试剂的试剂盒。本发明的核酸等温扩增反应试剂保存方法,是将用于核酸等温扩增的生物酶用石蜡覆盖或包埋后与 核酸等温扩增反应液中的除生物酶外的一种或几种组分隔离来实现核酸等温扩增试剂的常温长期保存的。所述石蜡为熔点介于20°C 90°C的直链烷烃、支链烷烃或环烷烃中的任一种或几种。所述的石蜡为固体石蜡或固体石蜡与液体石蜡的混合物。为了防止常温保存时核酸等温扩增的反应液蒸发,核酸等温扩增反应液中的除生物酶外的一种或几种组分也用石蜡覆盖或包埋。上核酸等温扩增反应液中的除生物酶外的组分为寡聚核苷酸引物、dNTP和/或NTP、核酸等温扩增的生物酶的反应缓冲液中的ー种或几种。上述的生物酶为DNA聚合酶和/或RNA聚合酶。上述的生物酶为DNA聚合酶和/或反转录酶。上述的核酸等温扩增的生物酶的反应缓冲液为核酸序列依赖性扩增的反应缓冲液、链替代扩增反应缓冲液或环介导等温扩增反应缓冲液。本发明还涉及ー种可在室温或常温长时间保存的核酸等温扩增反应试剂,是将核酸等温扩增反应液中一种或几种组分用石蜡包埋或覆盖来隔离制备的。本发明还提供ー种可在室温或常温长时间保存的等温扩增试剂盒,包括有上述利用石蜡包埋或隔离的核酸等温扩增反应试剂,以及其它分子生物学的反应组分。采用本发明方法处理后的等温扩增反应试剂或其混合物,可常温贮存和运输,使用时无需特殊处理,直接使用即可。同时本发明的方法具有エ艺简单、成本低廉的特点,采用本发明方法处理后的等温扩增反应试剂或其混合物在便利的贮存条件下(常温或室温等温度条件)具有活性稳定持久的优点,这在大大降低等温扩增反应试剂的贮运成本的同吋,还为等温扩增反应的实际操作带来极大的便利。本发明将有力促进等温扩增技术的在科研、医疗、检验和检疫等领域的运用和基于等温扩增技术的诊断或检测试剂产品的大規模推广应用。本发明涉及一种基于石蜡的核酸等温扩增反应试剂保存方法及反应试剂,所述的保存方法是将用于核酸等温扩增的生物酶用石蜡覆盖或包埋后与核酸等温扩增反应液中的除生物酶外的一种或几种组分隔离来实现核酸等温扩增试剂的常温长期保存的。采用本发明方法处理后的等温扩增反应试剂或其混合物,可常温贮存和运输,使用时无需特殊处理,直接使用即可。同时本发明的方法具有工艺简单、成本低廉的特点。采用本发明方法处理后的等温扩增反应试剂或其混合物在便利的贮存条件下具有活性稳定持久的优点,这在大大降低等温扩增反应试剂的贮运成本的同时,还为等温扩增反应的实际操作带来极大的便利。
基于石蜡的核酸等温扩增反应试剂保存方法及反应试剂制作方法
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