专利名称：中药山药的制药新用途的制作方法 胰岛素抵抗(IR)是指机体对一定量的胰岛素的生物学效应低于预计正常水平的一种现象，是II型糖尿病的主要特征之一，主要表现为胰岛素抑制肝脏释放葡萄糖的能力及促进周围组织利用葡萄糖的能力下降，为了调节血糖在正常水平，机体代偿性的分泌过多胰岛素，即出现高胰岛素血症，从而给机体带来一系列不良影响。同时研究表明胰岛素抵抗与动脉硬化性心血管疾病、高血压、血脂异常、内脏型肥胖等疾病的发病有关，是“代谢综合征”的成分之一，而胰岛素抵抗和代偿性高胰岛素血症是代谢综合征的中心环节，因此，改善II型糖尿病病人胰岛素抵抗，对糖尿病的治疗及减少糖尿病并发其它疾病的发病率具有重要的临床意义。胰岛素增敏剂正是针对这一发病机理而出现的一类药物，它通过提高胰岛素靶组织的敏感性，促进外周组织(脂肪、肝脏、骨骼肌等)对葡萄糖的摄取与消除能力，抑制肝脏的糖异生的作用，从而改善胰岛素抗性，增加胰岛素敏感性。目前，这一类药物中研究最多的是噻唑烷二酮类(TZDS)药物，虽然这类药物降低胰岛素抵抗的确切机理还不清楚，但它们确定降低了胰岛素抵抗病人体内升高的脂肪酸水平，同时，它们也改变了体内脂肪组织的分布，用TZDS类治疗胰岛素抵抗的II型糖尿病不仅改善了血糖的控制，降低抵抗，而且使胰岛素抵抗综合征的其它部分失调状况(包括高胰岛素血症、脂质代谢紊乱、高尿酸血症、微白蛋白血症等)得到好转，且治疗时不会引起低血糖，倍受人们注目。因此，从天然药物原料中筛选具有胰岛素增敏活性的药物，可具有良好的临床实用价值和市场前景。肾素—血管紧张素广泛存在于人体内，高血压时，人体血液循环中过多的血管紧张素II直接引起血管收缩、血压升高；组织中过多的血管紧张素II则产生对组织器官长期的损伤。血管紧张素转换酶抑制剂，是指直接针对血管紧张素转换酶为作用靶点的一类新型药物，它通过抑制血管紧张素转换酶而阻止血管紧张素I向血管紧张素II生成，减慢缓激肽的降解，升高缓激肽水平，促进一氧化氮和前列腺素生成，产生舒血管效应。血管紧张素转换酶抑制剂在降低外周血管总阻力、降低血压的同时，能扩张冠状动脉、改善心功能；改善肾血流量和肾小球滤过率；血管紧张素转换酶抑制剂的应用对葡萄糖代谢无不良影响，并可降低胆固醇和甘油三酯，还可增加胰岛素敏感性；对尿酸代谢也无不良影响，利钠、利尿且无低钾低镁症。血管紧张素转换酶抑制剂不仅抑制血液循环中的血管紧张素转换酶，而且抑制组织中的血管紧张素转换酶，从而减少机体内血管紧张素II的过度生成，发挥控制血压，保护靶器官的作用。鉴于血管紧张素转换酶抑制剂作用机理的上述特点，血管紧张素转换酶抑制剂目前已作为临床治疗高血压的一类新型降压药物，不仅具有降压作用强、副作用小的疗效特点，尤其对心脏、血管和肾脏等靶器官具有良好的保护作用，适用于各种程度的高血压病的治疗。同时，血管紧张素转换酶抑制剂尚可作为临床治疗心力衰竭、肾功能衰竭及糖尿病肾病的重要治疗药物。因此，从传统中药中筛选研究和发现具有血管紧张素转换酶抑制活性的新药，同样具有良好的临床应用价值和市场前景。山药为薯蓣科植物薯蓣(Dioscorea opposita Thunb.)的干燥根茎，是临床常用中药，具有补脾养胃、生津益肺、补肾涩精的作用，临床常用于治疗消渴之症。山药根茎含有薯蓣皂苷、薯蓣皂甙元、胆碱、植酸、止杈素、维生素、甘露聚糖等成分。现代药理研临床研究证实山药煎剂及其提取物具有广泛的药理作用。据《中华本草》(第八册)(宋立人主编，上海科学技术出版社出版，7292)报导，山药水煎剂30mg/kg和60mg/kg给小鼠灌胃连续10天，可以降低正常小鼠的血糖，对四氧嘧啶引起的小鼠糖尿病有预防及治疗作用，并可对抗由肾上腺素或葡萄糖引起的小鼠血糖升高。同时，大量研究报导表明山药水煎液显著增加小鼠的脾脏重量、增强小鼠碳廓粒清作用、能明显减轻小鼠脏器受缺氧环境的损害、提高耐受性，山药多糖能有效的对抗环磷酰胺的免疫抑制作用，山药还有较好的延缓衰老作用(郑虎占主编.《中药现代研究与研究》(第一卷)，学苑出版社出版，568-570)。此外，山药具有滋补、助消化、止咳、祛痰、脱敏的作用(雷载权.中药学.北京高等教育出版社，1995.282)。本发明人研究发现，中药山药或山药提取物可以改善胰岛素抵抗，并且还有抑制血管紧张素转换酶活性的作用，但到目前为止，尚未见相关的研究报道。
基于上述的原因，本发明人经大量的体内外筛选实验证明中药山药具有良好的胰岛素增敏作用，可用于治疗和改善II型糖尿病患者的胰岛素抵抗。因此，本发明的目的之一是提供中药山药制备胰岛素增敏剂类药物中的新用途。此外，本发明人经大量的筛选实验还发现，中药山药具有良好的抑制血管紧张素转换酶活性。所以，本发明还提供中药山药在制备血管紧张素转换酶抑制剂药物中的新用途。技术方案本发明提供山药在制备胰岛素增敏剂类药物中的应用，以及山药在制备血管紧张素转换酶抑制剂类药物中的应用。所述的山药来自薯蓣科植物薯蓣(Dioscorea opposita Thunb.)的干燥根茎。本发明所述的山药可以是山药的原生药，也可以是提取物，具体的说，所述的山药提取物是水或有机溶剂的提取物；更进一步的，所述的山药有机溶剂提取物是醇提取物。
所述的山药醇提取物，可以按以下方法制备的a、山药打粉以后，用浓度为30～90％的乙醇回流提取，将提取液减压浓缩，回收乙醇；b、将a步骤所得的浓缩液稀释，过大孔树脂吸附柱，分别用去离子水与乙醇洗脱，将洗脱液浓缩干燥至粉末状。
实际上，上述方法中，步骤a所得到的提取液已经具有胰岛素增敏剂或血管紧张素转换酶抑制剂的作用，步骤b只是将提取物中的有效成分进行更进一步的纯化和浓缩，对本发明来说，必不可少的步骤仅为步骤a，但是经过步骤b后，使得制备药物时质量控制更加容易。
本发明还提供一种作为胰岛素增敏剂或血管紧张素转换酶抑制剂的药物组合物，它含有上述的山药原生药粉、或其水或有机溶剂提取物。
上述的药物组合物，它是以山药原生药粉、或其水或有机溶剂提取物为活性成分，加上药学上可接受的载体或辅助性成分制备而成的药物制剂，所述的药物制剂是胶囊剂、颗粒剂、片剂、散剂、口服液，糖浆剂。
中药山药在用于制备胰岛素增敏剂药物或血管紧张素转换酶抑制剂时，可以是将山药原生药直接加工成药物，也可以是对山药原生药进行分离提取，将各种提取物(包括水提取物、有机溶剂提取物)制备成药品，也可以是将山药原生药与其他传统降糖中药配伍组成复方中药及其制剂，如将山药与葛根配伍组成中药复方制剂。
用中药山药，即薯蓣(Dioscorea opposita Thunb.)的干燥根茎为原料，直接加工制备成药品。可以是将上述原生药净制后粉碎，过80～120目筛，制成细粉，再将细粉装胶囊，或制备成片剂、丸剂、颗粒剂、散剂。
或者，用中药山药原生药为原料，进行初步提取后制备成药品。可以采用现代技术中的各种常规提取方法进行提取，例如，以水为溶剂提取，或者以乙醇、甲醇等有机溶剂提取，优选乙醇提取。也可以采用以下方法制备山药提取物a.山药打粉以后，用浓度为30～90％的乙醇回流提取，将提取液减压浓缩，回收乙醇；b.将a步骤所得的浓缩液稀释，过大孔树脂吸附柱，分别用去离子水与乙醇洗脱，将洗脱液浓缩干燥至粉末状。
以上所得的山药提取物，加上药学上可接受的载体，可以制成胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂等多种剂型。
中药山药，或其水提物，或其有机溶剂提取物，或其药物复方制备的药物及其制剂，具有良好的胰岛素增敏作用和对血管紧张素转换酶的抑制作用。中药山药来源于天然植物，药源充足，提取制备方法简便易行，可将其制成胶囊、片剂、颗粒剂、口服液多种剂型，不仅能有效地改善和治疗II型糖尿病的胰岛素抵抗，适用于II型糖尿病的治疗；同时能有效地抑制血管紧张素转换酶的活性，可用于高血压的治疗，具有疗效显著、价格低廉、使用安全方便等优势特点。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术和惯用手段，在不脱离本发明上述基本思想的前提下，还可以作出其他多种形式的修改、替换与变更。
以下通过实施例形式的
，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。


图1为实施例4中山药提取物SY-3(50μg/ml)、SY-3(100μg/ml)、罗格列酮对3T3-L1胰岛素抵抗细胞GLUT4 mRNA表达水平的影响，横向从左往右依次表示山药提取物SY-3(50μg/ml)、SY-3(100μg/ml)、罗格列酮、模型、正常、marker，纵向从上往下依次为GLUT4、GAPDH。
图2为实施例6中山药提取物SY-1、SY-2、SY-3、卡托普利对血管紧张素转换酶活性影响的测定，横坐标表示山药提取物SY-1、SY-2、SY-3、卡托普利，纵坐标表示血管紧张素转换酶(ACE)抑制率(％)。

实施例1山药原生药药品的制备取中药山药原生药，即薯蓣(Dioscorea opposita Thunb.)的干燥根茎净制后，按常规方法粉碎，过筛，制成粒度60～80目的葛根细粉8.5g，细粉装入胶囊，灭菌，分装即成。
实施例2山药水提取物、山药乙醇提取物的制备中药山药，即薯蓣(Dioscorea opposita Thunb.)的干燥根茎为原料，除去植物杂质。取山药原生药500g，粉碎后加入10倍量水，加热回流提取2小时，滤渣再加10倍量水，加热回流提取2小时，过滤。合并两次滤液，浓缩得山药水提取物(以下称SY-1)。另取山药原生药1000g，粉碎后加70％乙醇溶液8L，加热回流提取2小时，滤渣再加70％乙醇溶液6升，加热回流提取2小时，过滤。合并两次滤液，浓缩得山药乙醇提取物(以下称SY-2)。
实施例3山药提取物的制备取1600克山药，加8升60％乙醇回流提取两次，每次1小时，合并提取液，减压浓缩回收乙醇，用去离子水稀释至16升，过D-140大孔吸附树脂柱，用去离子水洗脱至洗脱液无色澄清，再用75％的乙醇洗脱，至流出液无色，减压浓缩洗脱液，干燥得到棕黄色结晶状粉末5.118g(以下称SY-3)。
实施例4山药提取物SY-1、SY-2、SY-3改善胰岛素抵抗作用的体外实验①3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型的建立3T3-L1细胞用高糖DMEM(含10％FBS)培养于6孔板上，待细胞长满达到一定的密度以后，换成含有一定浓度的胰岛素、地塞米松与IBMX的培养基培养，待细胞分化达80-90％以后，将细胞接种于24孔板用正常培养基培养两天，两天后开始诱导抵抗，留两孔作为空白对照，其余用含有胰岛素与地塞米松的培养基培养，诱导四天以后，检测细胞培养基中葡萄糖浓度，当诱导抵抗孔的葡萄糖浓度达到空白对照孔葡萄糖浓度的0.5-1倍以后，即可确认抵抗成立。
②山药提取物SY-1、SY-2、SY-3对3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型改善作用测定分别称取山药提取物SY-1、SY-2、SY-3，用磷酸缓冲液配成浓度为10mg/ml的无菌溶液，以马来酸罗格列酮(ROG，葛兰素史克天津有限公司，批号02100020)为阳性药物，配成浓度为2×10-3M的无菌溶液。设空白对照孔、模型对照孔、阳性对照孔与药物孔，加药，各药物终浓度分别为ROG2×10-5M，SY-1、SY-2、SY-3均为100μg/ml。加药后两天检测各孔葡萄糖浓度变化，同时用RT-PCR方法检测药物对3T3-L1细胞葡萄糖转运子GLUT4的mRNA表达水平的影响。结果分别见表1与图1表1葡萄糖浓度测定(mM)

由表1结果可以看出，给药以后ROG组、SY-1、SY-2、SY-3组葡萄糖浓度虽然没有恢复到正常水平，但均较模型组明显降低，SY-3(100μg/ml)组作用几乎接近ROG(2×10-5M)的作用，由此可以看出山药提取物对3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型具有改善作用。
从图1可以看出，胰岛素抵抗3T3-L1细胞(模型)葡萄糖转运子GLUT4的mRNA表达水平显著下降，在山药提取物SY-3作用以后其表达水平恢复到接近正常水平。
实施例5山药提取物SY-3对胰岛素抵抗大鼠的影响造模方法Wistar大鼠，雌雄各半，体重300-380g，由实验动物中心提供。随机10只作为空白对照组，其余则给予肌肉注射地塞米松磷酸钠注射液(西南药业股份有限公司生产批号0210020)1mg/kg，隔一天一次。共21天。
造模一周后将造模大鼠随机分成5组，即模型组、阳性药物组(灌胃以罗格列酮3mg/kg.day)、山药提取物(SY-3)高剂量组(120mg/kg.day灌胃)、山药提取物(SY-3)中剂量组(90mg/kg.day灌胃)、山药提取物(SY-3)低剂量组(60mg/kg.day灌胃)，空白对照组每日灌胃以相应的生理盐水，连续两周，分别于给药前、给药后测定空腹血糖与血清胰岛素浓度。给药两周后测定结果见表2表2山药提取物(SY-3)对胰岛素抵抗大鼠的影响 注与模型组比较*P＜0.05由表2结果可见给药两周后，各给药(ROG、SY-3高、中、低剂量)组空腹血糖与模型组相比，无显著差异；血清胰岛素水平与模型组相比，SY-3高、中、低三个剂量组胰岛素水平均降低，其中高、中剂量组有显著差异(P＜0.05)；胰岛素敏感指数与模型组相比，SY-3高、中、低三个剂量组均升高，其中中剂量组有显著差异(P＜0.05)；胰岛素抵抗指数与模型组相比，SY-3三个剂量组均明显降低，其中中剂量组有显著差异(P＜0.05)。
以上结果显示，山药提取物在一定剂量条件下对糖尿病胰岛素抵抗大鼠有显著的改善胰岛素抵抗作用。
实施例6山药水提取物SY-1、山药乙醇提取物SY-2、山药皂苷类提取物SY-3抑制血管紧张素转换酶活性试验①血管紧张素转换酶的制备取大鼠肺组织，用10mmol/l冰磷酸钾缓冲液，清洗，切成小块，用匀浆器打成匀浆。匀浆在4℃，5000g离心10分钟，弃沉淀。上清用上述冰磷酸钾缓冲液低温下透析过夜，每次2升，换液4次。然后于4℃，40,000g离心40分钟，弃沉淀，上清即为酶提取物，分装，保存于-20℃备用。
②山药提取物SY-1、SY-2、SY-3对血管紧张素转换酶活性影响的测定分别称取卡托普利(汕头金石制药总厂，批号010701)、山药提取物SY-1、SY-2、SY-3，卡托普利配制成浓度为50μg/ml的溶液，SY-1、SY-2、SY-3均配制成浓度为10mg/ml溶液，以卡托普利为阳性对照药物，分别取各样品溶液10μl与酶提取液10μl(约含总蛋白10μg)，37℃反应30分钟，设空白对照为20μl缓冲液，阴性对照为10μl缓冲液与10μl酶提取液。酶与药物充分反应后，加入o-phthaldialdehyde，Hippuryl-histidyl-leucine(HHL)(邻苯二醛，马尿酸-组胺酰-亮氨酸)反应液120μl(以25mmol/LNaOH配制成25mmol/L贮液，1.25×硼酸钠缓冲液0.5mol/L，含NaCl375mmol/L，pH8.3，反应液为HHL贮液与1.25×硼酸钠缓冲液1∶4混合)，37℃反应15分钟，加入1NNaOH40μl终止反应。以自动进样器避光加入20mg/ml o-phthaldialdehyde(邻苯二醛)(DMSO配制)10μl，室温避光反应10分钟，自动进样器加入3N H盐酸20μl终止反应，30分钟内用荧光检测仪测定荧光强度F，激发波长405nm，发射波长535nm，以下列公式计算抑制率。
结果见附图2。从图2可见，山药提取物SY-3对血管紧张素转换酶活性具有显著的抑制作用，其抑制率为97％；山药提取物SY-1、SY-2对血管紧张素转换酶活性有一定的抑制作用，其抑制率分别为76％和63％。
通过上述的体外试验和药效学试验，证明中药山药具有胰岛素增敏性及血管紧张素转换酶抑制活性，提供一种新的用药选择，不仅能有效地改善和治疗II型糖尿病的胰岛素抵抗，适用于II型糖尿病的治疗；同时能有效地抑制血管紧张素转换酶的活性，可用于高血压的治疗，具有疗效显著、价格低廉、使用安全方便。


本发明涉及一种中药的新用途，具体地说，涉及中药山药原生药、山药水或有机溶剂提取物、山药醇提取物在制备胰岛素增敏剂类药物中的应用及在制备血管紧张素转换酶抑制剂类药物中的应用，不仅能有效地改善和治疗II型糖尿病的胰岛素抵抗，适用于II型糖尿病的治疗；同时能有效地抑制血管紧张素转换酶的活性，可用于高血压的治疗，具有疗效显著、价格低廉、使用安全方便等特点。