红酵母及其产海藻糖的方法

杜云建, 赵玉巧, 顾玲玲

2011年8月17日

2011年2月22日

2011年2月22日

淮海工学院

C12R1/645GK102154134SQ20111004236

酵母 海藻

1.一种红酵母 2-14 0 oi/oiorWa 5/7. 2-14) CGMCC NO. 44452.根据权利要求1所述的红酵母2-14sp. 2-14) CGMCC NO. 4445，其特征在于，该菌株具有以下特征(1)形态特征细胞呈圆形或椭圆形，其大小4.5^5. 1X6. 3^7. 2 μ m,繁殖方式为芽殖，无假菌丝、子囊孢子及掷孢子形成；(2)培养特征发酵液清，表面无醭、无环、无气泡、无沉淀；菌落饱满潮湿，颜色为红色，边缘整齐，无褶皱，好氧；(3)生理生化特征菌株对乳糖、半乳糖、可溶性淀粉、L-山梨糖、D-木糖、D-果糖、 L-鼠李糖、麦芽糖、海藻糖、甘露醇、核糖、葡萄糖、蔗糖、琥珀酸、柠檬酸均不发酵；菌株不液化明胶，脲酶阳性，葡萄糖氧化阴性，DBB阳性，类淀粉化合物形成结果为阴性，石蕊牛奶试验产碱，在37 °C条件下正常生长3.一种如权利要求1所述的红酵母2-14 0 oi/oiorWa sp. 2-14) CGMCC NO. 4445产海藻糖的方法，其特征在于，其步骤如下(1)菌种的准备将红酵母2-14菌株在灭过菌的丰富培养基平板上划线，于30°C静置培养2天后，挑取单菌落进行丰富培养基斜面培养2天后保存于4°C冰箱中备用；所述的丰富培养基为马铃薯20%，蔗糖2%，琼脂1. 5% ；(2)细胞的培养挑取斜面培养的菌种，接种到装有50mL液体培养基的250mL三角瓶中，在2(T35°C，100^200 r/min,的摇床上培养18 30h后得种子液，将种子液按5%的接种量接种于含有75mL液体培养基的250mL三角瓶中，28°C，160 r/min摇床培养5(T60h后取出， 在5000 r/min离心除去上清液，所得菌体细胞用0. 85% NaCl溶液洗涤一次，置于4°C冰箱中贮存备用；所述的液体培养基为蔗糖31g，酵母膏9. 9g，蛋白胨9. 9g，氯化铵2. 2g，磷酸二氢钾0. 4g，磷酸氢二钠0. 4g，硫酸镁0. 2g，氯化钙0. 2g，三氯化铁0. 2g，煮沸过滤陈海水 IOOOmL, pH5. 5 ；(3)海藻糖的提取向菌体细胞中加入蒸馏水，每40g菌体细胞中加入IL蒸馏水，于 80°C水浴提取，离心，取上清液加活性炭脱色，过滤除去活性炭，上清液真空浓缩到原体积的1/4 1/5，用截留分子量为500的超滤膜超滤除去大分子杂质，采用阳离子交换树脂和阴离子交换树脂进行离子交换除去离子，真空浓缩，冷却结晶，恒温干燥，即得食用级海藻糖产品4.根据权利要求3所述的产海藻糖的方法，其特征在于步骤(2)中挑取斜面培养的菌种，接种到装有50mL液体培养基的250mL三角瓶中，25 30°C，140 180 r/min摇床上培养18 30h得种子液5.根据权利要求3所述的产海藻糖的方法，其特征在于步骤(2)中挑取斜面培养的菌种，接种到装有50mL液体培养基的250mL三角瓶中，28°C，160 r/min摇床上培养24h得种子液

本发明涉及一种微生物，特别是来自海洋的红酵母2-14OWoWorWa sp. 2-14) CGMCC NO. 4445 (已于2010年12月08日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，保藏编号为CGMCC NO. 4445);本发明还涉及利用该菌株产海藻糖的方法