专利名称：生产不饱和脂肪酸含量提高之乳的方法生产不饱和脂肪酸含量提高之乳的方法本发明涉及生产乳(尤其是不饱和脂肪酸含量提高并且反式脂肪酸含量降低的乳)的方法。此外，本发明涉及选择用于以富脂饲料喂养之乳牛的方法。在另一方面，本发明涉及测试饲料添加剂的方法。在另一方面，本发明涉及减少在乳牛产乳期间甲烷排放的方法。在另一方面，本发明涉及乳组合物、其用途和基于该乳组合物的产品。动物乳(尤其是乳牛的乳)是重要的营养物并且被广泛消费。乳可进一步被加工成多种基于乳的产品，例如奶油(cream)、乳酪、黄油(butter)、酸乳(yogurt)、甜点(dessert)、冰激凌。原料乳包含大量的脂肪、蛋白质和钙，并且其组成在物种之间差别很大。在乳牛的乳中，多于70wt.%的总脂肪由饱和脂肪酸组成，而不饱和脂肪酸构成小于30wt.%的乳脂肪。已知不饱和脂肪酸，尤其是长链多不饱和脂肪酸(long-chainpolyunsaturated fatty acid, LC-PUFA)降低心血管疾病的风险。在现有技术中，已描述了乳组合物(尤其是其脂肪酸组合物)可适合用于提供对人类消费者更健康的组合物。例如，在EP-1106077中，描述了以下的乳牛之乳组合物:其具有每IOOg总脂肪酸60.30至68.15g的总饱和脂肪酸含量，每IOOg总脂肪酸32.85至39.70g的总不饱和脂肪酸含量。反式脂肪酸(C18:1反式11和C18:2反式9，12)的总含量是每IOOg总脂肪酸3至7g/100g总脂肪酸。该乳获得于用这样的饲料添加剂喂养的乳牛，所述饲料添加剂包含50%至99%的亚麻籽并且其具有23%至30%的总脂肪性物质(fatty matter)含量。在W02010/015708中，描述了每IOOg总脂肪具有37.8至41.4g总不饱和脂肪酸含量和3.12至3.55g反式脂肪酸含量(C18:1反式10和C18:1反式11)的乳牛的乳。该乳获得于用这样的饲料添加剂喂养的乳牛，所述饲料添加剂基于亚麻籽和还原性二糖。观察到了乳牛的乳中的不饱和脂肪酸主要来源于乳牛的饲料。但是，用富含不饱和脂肪酸的添加剂(例如亚麻籽)喂养乳牛通常导致乳中的反式脂肪酸含量提高，其在乳牛瘤胃(rumen)中因生物 氢化作用而形成。反式脂肪酸被认为对人健康有害，并且与患冠心病的提高的风险有关。因此，应限制乳中所述反式脂肪酸的量。本发明的一个目的是提供被认为对于大部分消费者而言更健康的乳组合物。“更健康”意指具有以下优点中的一个或更多个:更高含量的不饱和脂肪酸(特别是ω-3脂肪酸)、更低的反式脂肪酸含量、更低的饱和脂肪酸含量、更高含量的共轭亚油酸(conjugatedlinoleic acid，CLA)。特别地，本发明的一个目的是提供一种生产乳组合物的方法，所述乳组合物同时具有相对大量的不饱和脂肪酸和有限量的反式脂肪酸。本发明基于这样的发现:乳牛的乳的组合物可通过基于乳牛基因型进行选择性喂养来改变。更详细地，相关基因是牛二酰基甘油-ο-酰基转移酶I基因(或DGATl (diacylglycerol-o-acyltransferasel)),其与乳的脂肪酸组成有关。由于多态性(polymorphism)(K232A),所以它有两种遗传变体(genetic variant)K和A,这导致了 DGATl蛋白质中的氨基酸替换(赖氨酸-丙氨酸)。等位基因的两种类型K和A导致了三种基因型KK、AA和AK。本发明人出乎意料地发现，用富脂饲料喂养之AA基因型乳牛生产的乳中的脂肪酸组成与通过遗传选择或仅通过富脂饲料得到的乳之脂肪酸组成不同。此外，根据本发明的乳比具有AK或KK基因型之乳牛的乳或不具有饲料添加剂之乳牛的乳更健康，原因是与获得于AK和KK乳牛的乳相比，它包含更多的不饱和脂肪酸和更少的饱和脂肪酸。因此，本发明涉及得到乳的方法，其包括以下步骤:i)用富含脂肪的饲料喂养具有DGATl基因之AA基因型的乳牛，和ii)对乳牛进行挤乳。优选地，所述乳牛属于荷斯坦(Holstein)或娟姗(Jersey)品种。更优选地，所述乳牛是荷斯坦黑白花乳牛(Holstein Friesian)。在荷兰，荷斯坦黑白花乳牛种群中A等位基因的频率为0.6并且K等位基因的频率为0.4，这使得基因型AA、AK和KK的频率分别为0.36,0.48和0.16。可通过 技术人员已知方法测定乳牛的基因型，例如每种待检测等位基因使用两种引物和两种探针的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR)(所谓的Taqman测定)。为此通常使用乳牛的血液。已知AA基因型乳牛比其他乳牛生产更多的乳。但是与AK和KK乳牛的乳相比，该乳具有更低含量的脂肪和蛋白质。对于农民，这使得AA乳牛的乳出售的价值较小，并且由于体积较大而在运输方面也相对昂贵。相比之下，得于AK和KK乳牛的乳包含相对多的脂肪和蛋白质，并因此在以往具有更高价值。因此，经常选择具有K等位基因的基因型用于乳生产。但是根据本发明，与其他乳牛的乳相比，AA乳牛的乳可为人类消费者提供相当大的健康优势。根据本发明，用富含脂肪的饲料喂养AA乳牛。所述饲料一般包含基础粗饲料(base roughage)和/或基础浓缩物(base concentrate)和富含脂肪的饲料添加剂。所述基础粗饲料可，例如，由玉米青忙饲料(maize silage)或牧草青忙饲料(grass silage)组成，也可同样地使用其他合适的基础组合物。牧草和玉米青贮饲料是荷兰乳牛冬季饲料的典型组分。所述基础浓缩物可以是任何类型，并且是通常干物质含量高于80wt.%且粗脂肪含量低于10%的常规饲料。饲料优选地富含脂肪，这意指所述饲料包含多于4wt.%的脂肪，通常包含4至6wt.%的脂肪。饲料中较高量的脂肪(尤其是未经保护的油(unprotected oil))较不优选，原因是它们可导致乳牛的胃失调。饲料通常包含8至14wt.优选10至12wt.%的饲料添加剂。适用于本发明的饲料添加剂通常包含10至40wt.%的脂肪,优选地20至30wt.%的总干物质。所述添加剂优选包含添加剂中总脂肪酸的5至90wt.更优选10至80wt.%的量的不饱和脂肪酸。优选地，存在于所述饲料添加剂中至少20wt.% ,更优选至少30wt.%的不饱和脂肪酸是C18:3顺式9，12，15脂肪酸。不饱和脂肪酸优选以甘油三酯的形式(例如，作为脂肪或油)供应。不饱和脂肪酸的合适来源是包含至少2wt.%不饱和脂肪酸(优选至少5wt.% )的油,例如种子油(seedoil)，如下述的种子油:亚麻籽、油菜籽、大豆、核桃、向日葵、棉籽、红花、鼠尾草种子(clarysage seed)、紫苏(perilla)、突欧鼠尾草(chia)和 chemp。鱼油(fish oil)、海藻油(algaeoil)、玉米油和花生油也是合适的。优选地,使用亚麻籽油。合适的饲料添加剂是，例如，EPi 106077 中描述的Nutex 。一般来说，饲料添加剂以每只乳牛每天1.6至2kg干物质(通常约1.8kg)的量喂养乳牛。虽然给出的添加剂的量取决于特定的乳牛、使用的基础粗饲料和/或浓缩物等，但是本领域技术人员能够确定饲料添加剂的合适量以实施本发明。还可保护饲料添加剂中的不饱和脂肪酸免受瘤胃的生物氢化作用，使得这些不饱和脂肪酸不被转化为反式脂肪酸。这些保护通常通过另外的化学处理来实现，因此是较不期望的。但是，本发明的一个优点是添加剂中的不饱和脂肪不需要化学保护，原因是根据本发明也可实现低的反式脂肪酸含量。在另一方面，本发明涉及包含脂肪酸的乳组合物，所述组合物每IOOg总脂肪酸包含35至42g不饱和脂肪酸，0.7至8.0g C18l3顺式9，12，15脂肪酸和低于3.5g的反式脂肪酸。优选地，本发明的乳来源于泌乳动物，尤其是乳畜，例如乳牛。与正常乳相比，得于AA乳牛的本发明之乳组合物的特征在于高含量的不饱和脂肪酸。虽然反式脂肪酸的含量也提高，但是与AK和KK乳牛中的乳相比，根据与不饱和脂肪酸的比例其增加较少。这通过不饱和/反式比(unsat/trans ratio)(总不饱和脂肪酸与总反式脂肪酸之比)证实。不饱和/反式比优选地高于12.2，更优选地高于13.0并且甚至更优选地高于13.5，例如高于13.7。具有高不饱和/反式比的乳对人类健康有益，因为它与对于相同水平不饱和脂肪的 较低反式脂肪酸摄入有关。因此，当消费者摄取日推荐量的不饱和脂肪酸(特别是C18:3)时，反式脂肪酸的摄入在AA乳牛乳的情况下远远低于其他乳牛乳的情况。如上所述，在普通乳牛的乳中，多于70wt.%的脂肪酸是饱和的，因此低于30wt.%的脂肪酸是不饱和的。本发明的乳组合物具有量低得多的饱和脂肪酸，这对血脂质量具有良好作用并且对胆固醇相关疾病和其他心血管疾病具有相应的积极作用。乳中的饱和脂肪酸在这里是异 +C15:(l+C15:。异+Ci5:o 反(ante)异 +C16:0+C16:0 异 +C17:0+C17:0 异 +C17l0 反异 +C18:0+C20:0 的总和。在一个优选实施方案中，每IOOg总脂肪酸中，饱和脂肪酸的总量为55.0至64.0g,优选56.0至62.0g,更优选57.0至60.0go每IOOg总脂肪酸中，C12l0脂肪酸的含量为1.8至3.4g，优选2.0至3.0g,更优选2.4至2.8g。每IOOg总脂肪酸中，C14l0脂肪酸的含量为7.0至11.0g,优选8.0至9.5g。每IOOg总脂肪酸中，C16l0脂肪酸的含量为18至28g，更优选19至25g，最优选21至24g。C4:0 (丁酸)是与抗致癌作用相关的脂肪酸，每IOOg总脂肪酸中优选以3.0至4.3g的量存在。多种脂肪酸可存在于本发明的乳组合物中，而既没有特别的有益作用也没有任何副作用。以下脂肪酸属于这组脂肪酸:c6:(l、C8:0, C1010和C18:Q。不饱和脂肪酸是脂肪酸链中具有至少一个不饱和键的那些。具有一个不饱和键的脂肪酸称为单不饱和脂肪酸(mono-unsaturated fatty acid,MUFA),链中具有两个和更多个不饱和键的那些称为多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)。在一个优选实施方案中，本发明的乳的特征在于，每IOOg总脂肪酸中，不饱和脂肪酸的总量高于33g,优选35至42g，更优选37至41g。本发明的乳组合物的特征还在于高量的ω-3脂肪酸。所述ω-3脂肪酸特别地是(:18:3顺式9，12，15(八12)、(:20:5顺式 5，8，11，14，17(EPA)、C22:5 顺式 7，10，13，16，19 (DPA)和C2216顺式4，7，10，13，16，19 (DHA)。优选地，本发明的乳组合物包含C18:3顺式9，12，15 (ALA)，在每IOOg总脂肪酸中其量高于0.6g,优选0.7g至8.0g,更优选0.78g至4.0g。术语“ω-6脂肪酸”在这里表示C18:2顺式9，12(亚油酸)和C22:2顺式13，16。C18l2顺式9，12的含量在每IOOg总脂肪酸中优选为1.0g至4.0g,更优选1.5g至2.5g。乳中ω-6/ω-3脂肪酸的比例不应该太高，因为它可促进许多疾病(包括心血管疾病、癌症、炎性疾病和自身免疫病)的发病。在一个优选实施方案中，根据本发明的乳组合物的ω-6/ω-3脂肪酸重量比低于3.0，优选低于2.85，更优选低于2.7。在另一个优选实施方案中，根据本发明的乳组合物包含共轭亚油酸(CLA ；C18:2反式11顺式9)，在每IOOg总脂肪酸中优选地其量为0.45g至8.0g，优选0.6g至4.0g，更优选0.7g至3.0g。虽然CLA包含一个反式键，但是在本申请中它不包含在反式脂肪酸量中。已知CLA具有抗炎性和抗致癌作用。反式脂肪酸不被认为是特别健康的，并且这些脂肪酸的含量应保持被限制。本说明书和权利要求书中的术语“总反式脂肪酸”意指C16:1反式9+C18:1反式(4+5+6+7+8)+C18:1反式9+C18:1反式10+C18:1反式的总和。总反式脂肪酸优选低含量，即在每IOOg总脂肪酸中低于4.0g,优选在每IOOg总脂肪酸中低于3.5g，更优选低于3g，而最优选低于2.9g。可使用常规气相色谱技术容易地确定乳中多种脂肪酸的特性和量。特别地，本发明人使用以下方法。从乳样品中提取乳脂肪。如ISO标准15884(IS0-1DF2002b)所述由脂肪级分制备脂肪酸甲酯。使用Varian Fame Select柱(IOOmX0.25mm ID ；VarianInc.),在 Trace GC Ultra 色谱仪(Thermo Electron Corporation)上根据 ISO 标准15885 (IS0-1DF2002a)分析甲酯。最初温度在70°C下维持I分钟，以3°C /分钟升高至225°C并在225°C下维持5分钟。注射体积为I μ I。使用纯甲酯样品(Sigma-Aldrich ；Larodan)鉴定并定量每个峰。脂肪酸含量表示为总脂肪重量的一部分。除了改良的脂肪酸组成之外，AA乳牛之乳的特征还在于降低的尿素含量。由表2可以看出，AA乳牛的乳可包含27.4mg尿素/IOOg乳，而AK乳牛和KK乳牛的乳可分别包含29.1和31.9mg尿素/IOOg乳。本发明的乳组合物优选包含16.0至28.5mg尿素/IOOg乳，更优选18.0至28.0mg尿素/IOOg乳。由于用特定添加剂(例如，实施例中示范的)喂养乳牛而得到的乳组合物因个体乳牛而不同并且在季节期间变化。乳牛的健康状态、泌乳期、产次(parity)和遗传背景也决定了脂肪酸组成。此外，由除添加剂之外的饲料提供的脂肪酸的组成和量也取决于乳牛饲料(例如，所述粗饲料或所述浓缩物)中其他组分的脂肪酸组成和脂肪百分比。尤其是，粗饲料的组成在季节期间有很大不同。但是，根据提供的信息，本领域技术人员将能够制备根据本发明的乳组合物。在另一方面，本发明涉及选择乳牛用于以富脂饲料喂养的方法，其通过选择具有基因DGATl之AA基因型的乳牛来进行。在该方法的一个实施方案中，在不知道基因型的情况下可预先测试乳牛以确定乳牛的基因型，并进一步选择具有AA基因型的乳牛用于以高脂添加剂喂养。这种选择可容易地实施(例如，在自动送料系统(automated feeding system)或在挤奶机器人系统(milkrobot system)中，其中通过电子芯片鉴定并识别乳牛)。仅向具有AA基因型的乳牛(而不是所有乳牛)提供饲料添加剂还节约了成本，因为饲料添加剂一般比常规饲料更昂贵。 通过以下方法也可实践本发明:用富脂饲料喂养所有的乳牛，然后挤乳，从而收集AA乳牛的乳并分开储存。在另一方面，本发明涉及测试用于乳牛之饲料添加剂的方法，其包括以下步骤:i)选自至少一只具有基因DGATl之AA基因型的乳牛， )用待测试的饲料添加剂喂养步骤i)中选择的乳牛，iii)对一只或更多只所述乳牛进行挤乳，和iv)分析乳的组成。根据本发明，具有AA基因型的乳牛是用于测试多种饲料添加剂(尤其是富含脂肪的那些)的最佳选择。第一，这些乳牛生产不饱和脂肪酸含量较高的乳并因此对饲料添加剂中存在的脂肪酸更敏感。第二，与其中使用任何基因型之乳牛的测试结果相比，仅对AA乳牛进行的测试结果更统计学均匀。因此，为得到统计可信任的结果需要较小的群体。因此，本发明还涉及乳牛畜群，其中至少60%，优选至少80%并且更优选至少90%的乳牛具有基因DGATl之AA基因型。更优选地，所述畜群仅由AA乳牛组成。畜群定义为为了特定目的饲养在一起的单一种类的一组牲畜或其他家畜。为了本发明的目的，所述畜群包含至少10只乳牛，喂养它们以得到它们所产的乳。如上所述，在荷兰，荷斯坦黑白花乳牛的典型畜群的AA基因型频率为约36%。根据本发明，畜群中AA乳牛的频率可通过选择而增加，目的是得到主要为AA乳牛的畜群。优选地，畜群中的乳牛属于荷斯坦或娟姗品种。更优选地，乳牛是荷斯坦黑白花乳牛。
根据本发明来生产乳还具有减少由乳牛导致的甲烷排放的优点，因为与其他基因型的乳牛相比，AA乳牛排放更少的甲烷。因此，本发明在另一方面涉及一种减少甲烷排放的方法，其包括选择具有基因DGATl之AA基因型的乳牛，并喂养那些乳牛。当用富脂饲料喂养乳牛时，减少的甲烷排放尤其显著。以产生的每体积乳计算甲烷排放。认为AA乳牛的甲烷排放的减少部分地归因于产生的相对更大量的乳，且部分地归因于乳的改良之脂肪酸组成。根据W02009/156453中描述的方法估算的甲烷排放对于AA基因型是9.6g甲烷/IL乳，对于AK是10.3g甲烷/IL乳，并且对于KK基因型为11.6g甲烷/IL乳。除了甲烷排放之外，由乳牛导致的氨排放吸引了许多注意。氨排放的指标之一是乳牛乳中的尿素含量。由表2可以看出，与其他基因型的乳牛相比，AA乳牛产生的乳具有最低水平的尿素，并因此排放更少的氨。因此，AA乳牛还因较低的氨排放而比其他基因型更为优选。因此，本发明提出减少由乳牛导致的氨排放的方法，其包括选择具有基因DGATl之AA基因型的乳牛，并喂养那些乳牛。当用富脂饲料喂养乳牛时，减少的氨排放尤其显著。在另一方面，本发明涉及本发明的乳组合物用于制备基于乳的组合物的用途，所述基于乳的组合物例如乳酪、酸乳、奶油组合物、甜点产品，还包括由乳组分制备的组合物(如乳粉、乳清蛋白质、乳脂(milk fat)等)。此外，本发明涉及使用乳组合物生产的产品(例如，基于或包含本发明之乳组合物)。尤其是，它涉及在最终产品中基本上保持其中乳组合物的脂肪酸组成的产品。这些产品，例如，适用于食物和饲料应用或适用于食物和饲料添加剂。现将通过以下非限制性实施例举例说明本发明。实施例1 (比较)用具有根据表I的组成的标准配给量(standard ration)喂养1762只乳牛,其中644只乳牛具有DGATl的AA基因型，829只具有AK基因型，289只具有KK基因型。表I中的量以每天每只乳牛给出。饲料的脂肪百分比为约3wt.%。表I


本发明涉及不饱和脂肪酸含量提高并且反式脂肪酸含量降低的乳组合物。此外，本发明涉及通过用富脂饲料(fat-rich feed)喂养具有基因GDAT1之AA基因型的乳牛来得到这种乳的方法。另外，本发明涉及选择用于以富脂饲料添加剂(supplement)喂养之乳牛的方法以及测试富脂饲料添加剂的方法。在另一方面，本发明涉及减少在乳牛产乳期间甲烷排放和减少氨排放的方法。在另一方面，本发明涉及乳组合物在制备基于乳之产品中的用途以及基于其的产品。