专利名称：一种快速提取禽类血液基因组dna的方法基因组DNA提取是分子生物学研究最基本的技术，DNA可以从各种样品材料中犾得，包括抗凝血，凝固血，裂解血，软层细胞，毛囊等。目前常用的提取方法是酚-氯仿抽提法，该方法利用SDS破解细胞膜，释放细胞所含的蛋白质；再利用蛋白酶K分解释放的蛋白质，多余的没有被蛋白酶K分解的蛋白质被酚-氯仿抽提除去；剩余的基因组DNA用こ醇沉淀。该方法可以得到高纯度的基因组DNA，但需要的化学试剂也多，尤其用到了对皮肤有腐蚀作用的化学试剂——酹，对试验操作人员存在相当大的危险；此外，用到的酚、氯仿、异戊醇等试剂容易挥发，对实验室及其周边环境也会造成一定污染。
本发明的目的在于提供ー种安全的快速提取禽类血液基因组DNA的方法。为了实现上述目的，本发明的技术方案采用了 ー种快速提取禽类血液基因组DNA的方法，包括以下步骤(I)取抗凝血，将其与细胞裂解液按I : 50混合(体积比)，向混合液中加入蛋白酶K;(2)在55-65°C的温度下，水浴消化3_5小时；(3)加预冷的こ醇，充分混匀，こ醇使溶液中的DNA和部分蛋白一起沉淀；IOOOOrpm离心5min,弃上清液；(4)加双蒸水ddH20溶解沉淀，こ醇使蛋白发生不可逆变性,沉淀中的蛋白不能溶解，而DNA可以再次溶解；IOOOOrpm离心5min,吸上清液到干净的离心管中；(5)加入4mol/L的NaAc和预冷的こ醇,充分混勻；IOOOOrpm离心5min,弃上清液，加75%的预冷こ醇，出现白色絮状沉淀，即基因组DNA。所述的细胞裂解液的组成是0.5M EDTA 35_45ml，IM Tris *HC1 6_12ml，5M NaCl2-6ml, 10% SDS 8_12ml。所述的抗凝血与细胞裂解液的体积比为I : 50，蛋白酶K的加入量与混合液的比为 I 125。步骤(3)中こ醇的加入量占总体积的70%以上。步骤(5)中使NaAc的含量为O. 1-0. 2mol/L,预冷的こ醇的浓度达到70% -90%。本发明的方法针对酚-氯仿抽提法提取基因组DNA的缺点，结合禽血红细胞中含有细胞核，基因组DNA含量丰富的特点，提出了用こ醇进行两次沉淀，代替酚-氯仿抽提进行禽血基因组DNA提取的方法。本方法仅需IOul抗凝血，加入细胞裂解液裂解细胞后，用蛋白酶K消化溶液里的蛋白质，然后用こ醇沉淀基因组DNA和剩余的未被消化的蛋白质，弃上清液，将沉淀用ddH20溶解，由于こ醇使蛋白发生不可逆变性，所以沉淀中的蛋白不能溶解，而DNA可以再次溶解；转移上清液(含有基因组DNA)到新的I. 5ml离心管中，第二次向溶液中加入高浓度こ醇，基因组DNA就可以再次沉淀，从而得到高纯度的基因组DNA。本方法快速、高效、无毒、经济，所得到的基因组DNA可以进行下一歩的PCR、酶切等分子生物学分析。本发明的方法具有操作安全，没有环境污染；本方法进行禽血基因组DNA提取主要试剂是こ醇，没有用到酚、氯仿、异戊醇等有毒有害试剂，对操作者和环境都没有污染。另外，提取方法简单，结果可靠，基因组DNA提取过程中没有用到氯仿等溶剤，不出现液面分层和移上清液等难度较大的操作，因此，也不存在有机溶剂残留在提取的基因组DNA里，影响下面的操作(如PCR扩增、酶切)等问题。采用本发明的方法的提取过程所需要时间在Ih以内。图I为本发明的方法提取的鹌鹑基因组DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测图。 电泳条件取4ul基因组DNA加Iul 6XLoading buffer点样，8v/cm电泳30min后拍照。图2为用本方法提取的北京鸭基因组DNA用多对引物进行PCR扩增，扩增产物经O. 8%琼脂糖凝胶电泳检测的照片。电泳条件取4ul PCR产物加Iul 6 X Loading buffer点样，8v/cm电泳30min后拍照。

本发明涉及一种快速提取禽类血液基因组DNA的方法，包括以下步骤(1)取抗凝血，将其与细胞裂解液混合形成混合液，向混合液中加入蛋白酶K；(2)在55-65℃的温度下，水浴消化3-5小时；(3)加预冷的乙醇，充分混匀；(4)加双蒸水ddH2O溶解沉淀；10000rpm离心5min，吸上清液到干净的离心管中；(5)加入4mol/L的NaAc和预冷的乙醇，充分混匀；10000rpm离心5min，弃上清液，加75％的预冷乙醇，出现白色絮状沉淀，即基因组DNA。本方法进行禽血基因组DNA提取主要试剂是乙醇，没有用到酚、氯仿、异戊醇等有毒有害试剂，对操作者和环境都没有污染。另外，提取方法简单，结果可靠，采用本发明的方法的提取过程所需要时间在1h以内。