专利名称：从白花蛇舌草中提取总环烯醚萜苷的方法白花蛇舌草0 办Oii1S i/i/fiAsa (Willd) Roxb.)为茜草科耳草属植物，全草入药，具有清热解毒、活血化瘀、抗菌消炎和抗肿瘤等多种生理活性。化学成分主要包括黄酮类、环烯醚萜苷类、蒽醌类等化合物。环烯醚萜苷类是天然产物中一类重要的化合物，也是白花蛇舌草中主要类化学物质之一，白花蛇舌草中常见的环烯醚萜类化合物主要有鸡矢藤苷甲酯、去乙酰基车叶草苷酸甲酯、车叶草苷酸和车叶草苷。它具有细胞毒、抗肿瘤、抗氧化等多种生物活性。环烯醚萜类化合物属于臭蚁二醛的半缩醛衍生物，半缩醛结构不稳定，易发生水解或再酸性介质中发生重排等变化。李存满等研究了白花蛇舌草中环烯醚萜苷类化合物的稳定性，发现环烯醚萜苷类化合物在室温纯水介质中存放于玻璃瓶中较稳定，60°C 放置时间不宜超过他。环烯醚萜苷类化合物的富集方法主要通过大孔吸附树脂的分离纯化来实现，中国专利申请号200810010309. 3，一种白花蛇舌草提取物及其分离制备方法，以白花蛇舌草药材为原料，经水提取、醇沉、膜分离、非极性大孔树脂分离和工业色谱分离等步骤，获得提取物。该方法杂质多，对膜损坏较大，成本高。中国专利申请号200610028468. 7，白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物单体的提取、分离方法，采用醇水溶液两次提取，大孔树脂柱分离，水醇洗脱，洗脱液浓缩后上kphadex LH-20住曾想，醇水洗脱，浓缩，结晶，得到E_6_0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯，该法存在重现性差、耗时长、自动化程度低等缺点。经文献检索，目前尚无采用超临界流体从白花蛇舌草中萃取环烯醚萜苷的方法报道。
本发明的目的是为了提供一种简便、低耗能、环保、快速有效从白花蛇舌草中提取总环烯醚萜苷的方法。本发明的目的是通过以下技术方案实现从白花蛇舌草中提取总环烯醚萜苷的方法，其特征在于包括以下工艺步骤(1)将白花蛇舌草全草粉碎成粗粉，加入超临界萃取罐中，以乙醇为夹带剂进行萃取，收集萃取物； (2)将上述萃取物放入索氏抽提器中，加入5-6倍量的乙醇溶液，反复抽取3-6小时，提取液浓缩至无醇味；(3)将上述浓缩液通过大孔吸附树脂柱，依次用0-10%乙醇和30-80%乙醇洗脱，收集洗脱液，经膜浓缩、过滤，真空干燥得到总环烯醚萜苷。步骤(1)所述超临界CO2萃取条件为萃取压力为25_35MPa，萃取温度为30-50°C， 超临界CO2流量为20-3^g/h，萃取时间为1-6小时，解析压力为4-llMPa，解析温度为 45-60 0C，夹带剂乙醇体积分数为70-95%。步骤(2)所述索氏抽提用乙醇体积分数为50-70%。步骤(3)所述大孔吸附树脂选自XDA-I、ADS-7、NKA、HPD450中的一种。步骤(3)所述膜浓缩为先通过超滤膜，透过液再加入纳滤膜浓缩，所述超滤膜为截留分子量3000-8000的中空超滤膜，纳滤膜截留分子量为200-300，材质可选聚醚砜或聚四氟乙烯。本发明与现有技术相比，有益效果是本发明采用超临界流体萃取，萃取率高，对环境污染少，自动化程度较高，可扩大规模化生产；本发明采用树脂吸附与膜分离浓缩技术联用，药液经树脂精制后使污染膜的成分大大降低，是超滤应用很有效的预处理方法，而且超滤能起到进一步精制的作用，提高有效成分的含量，清除树脂的脱落微粒，本发明工艺不需要加热，对有效成分起到一定的保护作用，提高了产品的稳定性。取白花蛇舌草全草粉碎成粗粉，取^g投入超临界萃取罐内，加入体积百分比为80%的乙醇溶液作为夹带剂，加入量为0. IOkg ；在萃取压力27. 6MPa，萃取温度40°C，CO2流量为 22kg/h的条件下萃取2小时；控制解析罐压力为4MPa，温度为45°C，收集萃取物；将萃取物放入索氏抽提器中，加入5倍量60%的乙醇溶液，反复抽取3小时，提取液减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过XDA-I大孔吸附树脂柱，依次用去离子水及50%乙醇洗脱，收集50%乙醇洗脱液，洗脱液通过截留分子量3000的中空聚醚砜超滤膜系统，滤过液再通过截留分子量为200的聚醚砜纳滤膜，收集浓缩液，真空干燥得到总环烯醚萜苷提取物2. lg，提取物中环烯醚萜成分总含量为78%。实施例2:取白花蛇舌草全草粉碎成粗粉，取^g投入超临界萃取罐内，加入体积百分比为80%的乙醇溶液作为夹带剂，加入量为0. 12kg ；在萃取压力29. IMPa，萃取温度32°C，CO2流量为 30kg/h的条件下萃取1小时；控制解析罐压力为6MPa，温度为56°C，收集萃取物；将萃取物放入索氏抽提器中，加入6倍量75%的乙醇溶液，反复抽取6小时，提取液减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过HPD450大孔吸附树脂柱，依次用10%乙醇及70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，洗脱液通过截留分子量4000的中空聚四氟乙烯超滤膜系统，滤过液再通过截留分子量为200的聚四氟乙烯纳滤膜，收集浓缩液，真空干燥得到总环烯醚萜苷提取物2. 3g，提取物中环烯醚萜成分总含量为76%。实施例3:
取白花蛇舌草全草粉碎成粗粉，取^g投入超临界萃取罐内，加入体积百分比为80%的乙醇溶液作为夹带剂，加入量为0. 15kg ；在萃取压力25. 5MPa，萃取温度44°C，CO2流量为 35kg/h的条件下萃取3小时；控制解析罐压力为7MPa，温度为58°C，收集萃取物；将萃取物放入索氏抽提器中，加入5倍量70%的乙醇溶液，反复抽取5小时，提取液减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过XDA-I大孔吸附树脂柱，依次用10%乙醇及40%乙醇洗脱，收集40%乙醇洗脱液，洗脱液通过截留分子量8000的中空聚醚砜超滤膜系统，滤过液再通过截留分子量为300的聚四氟乙烯纳滤膜，收集浓缩液，真空干燥得到总环烯醚萜苷提取物2. 5g，提取物中环烯醚萜成分总含量为75%。实施例4:取白花蛇舌草全草粉碎成粗粉，取^g投入超临界萃取罐内，加入体积百分比为80%的乙醇溶液作为夹带剂，加入量为0. 18kg ；在萃取压力32. 8MPa，萃取温度47°C，CO2流量为 20kg/h的条件下萃取6小时；控制解析罐压力为llMPa，温度为49°C，收集萃取物；将萃取物放入索氏抽提器中，加入5倍量90%的乙醇溶液，反复抽取4小时，提取液减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过ADS-7大孔吸附树脂柱，依次用去离子水及80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，洗脱液通过截留分子量6000的中空聚四氟乙烯超滤膜系统，滤过液再通过截留分子量为300的聚醚砜纳滤膜，收集浓缩液，真空干燥得到总环烯醚萜苷提取物2. 2g，提取物中环烯醚萜成分总含量为73%。
实施例5:
取白花蛇舌草全草粉碎成粗粉，取^g投入超临界萃取罐内，加入体积百分比为80%的乙醇溶液作为夹带剂，加入量为0. 14kg ；在萃取压力34. 4MPa，萃取温度50°C，CO2流量为 ^kg/h的条件下萃取5小时；控制解析罐压力为8MPa，温度为60°C，收集萃取物；将萃取物放入索氏抽提器中，加入6倍量95%的乙醇溶液，反复抽取5小时，提取液减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过NKA大孔吸附树脂柱，依次用10%乙醇及60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，洗脱液通过截留分子量5000的中空聚醚砜超滤膜系统，滤过液再通过截留分子量为 200的聚四氟乙烯纳滤膜，收集浓缩液，真空干燥得到总环烯醚萜苷提取物2. 3g，提取物中环烯醚萜成分总含量为74%。


本发明提供从白花蛇舌草中提取总环烯醚萜苷的方法，其特征在于以白花蛇舌草为原料，采用超临界CO2萃取方法，以乙醇为夹带剂进行萃取，萃取物用乙醇溶液抽提，浓缩，通过大孔吸附树脂，乙醇洗脱，洗脱液经膜浓缩、干燥，获得总环烯醚萜苷。该方法效率高、不使用有害试剂、对环境污染程度低，易于实现工业化。